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普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响
目的探讨普罗托品(protopine, Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法采用无Ca2+-复Ca2+的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的 [Ca2+]i的升高的影响.结果在无钙Krebs液中,Pro 10、30、100 μmol/L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2+后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (50 μmol/L, 100 μmol/L) 对静息时的 [Ca2+]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 50 μmol/L能明显降低NA所致[Ca2+]i的升高,对KCl引起的 [Ca2+]i 升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到100 μmol/L时,对NA和KCl引起的 [Ca2+]i升高均有明显的抑制作用.结论 Pro可能通过抑制Ca2+释放和(或)Ca2+内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2+]i的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应.
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普鲁托品对大鼠血压的影响及扩血管作用机理研究
目的本实验旨在观察比较普鲁托品(protopine,Pro)对实验性高血压模型和正常大鼠血压的影响,评价其可利用性,并利用大鼠胸主动脉条和培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,探讨其对离体血管条舒张作用的特点、细胞内游离钙浓度和蛋白激酶C活性的影响,进一步阐明其扩血管的作用机理.方法1.采用肾动脉双肾双夹2K2C)法制作大鼠肾血管性高血压模型,分别对高血压和正常大鼠静脉及口服给药,观察大鼠血压的变化;2.应用血管平滑肌等张收缩的方法观察Pro对大鼠胸主动脉条的舒张作用,并采用无Ca2+-复Ca2+的实验法,间接观察Pro对细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的可能影响;3.利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的[Ca2+]i的升高的影响;4.采用同位素γ-32P-ATP催化活性测定法检测血管平滑肌细胞的蛋白激酶C(PKC)活性.结果1. Pro 1mg@kg-1及2mg@kg.静注,均可使肾性高血压大鼠的收缩压(SAP)和舒张压(DAP)明显下降,且随剂量的增加而增加(SAP降低幅度分别为10.1%和20.4%),持续时间约15～30min,用药前后心率变化不明显.在正常血压大鼠,Pro1mg@kg-1静脉注射大鼠血压和心率未见明显变化,但剂量为2mg@kg-1(静脉注射)时也可降低SAP和DAP,SAP由原来水平122.5±16.7mmHg降至111.8±18.9mmHg,较原水平降低8%,30min已基本恢复,用药后心率亦无明显改变.另一方面,Pro10、20、40mg@kg-1灌胃给药,连续观察4h,血压均未受明显影响.2.在离体胸主动脉血管条,Pro 3×10-5mol@L-1及10-1mol@L-1均明显降低去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的动脉条收缩幅度,使二者的量效曲线呈非平行右移,大反应压低,PD2值分别为5.06和5.05.在无钙Krebs液中,Pro10-5、3×10-5及10-4mol@L-1对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2+后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.3.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,静息时各浓度的Pro对[Ca2+]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 5 × 10-5mol@L-1能降低NA所致[Ca2+]i的升高,对KCl引起的[Ca2+]i升高有降低趋势,但无统计学意义;当Pro的浓度增加到10-4mol@L-1时,对NA和KCl引起的[Ca2+]i升高均有明显的抑制作用,对二者的抑制率分别为21.1%和25.6%,统计学上无显著差异.4.在无激动剂预处理的动脉条,随着Pro剂量的增加,胞浆PKC活性有略微下降趋势,而胞膜PKC活性却有略微上升趋势,但二者均无统计学显著差异,PKC的总活性与空白组比较也未见明显变化;另一方面,在NA预处理组,Pro对被NA所升高的血管平滑肌细胞胞浆内PKC的活性有降低的趋势,(无统计学显著差异),而明显升高胞膜PKC的含量,对PKC的总量亦无明显影响.结论1.Pro静脉可通过舒张血管平滑肌,降低外周阻力来降低血压,具有作用温和、起效较快、持续时间较短、对高血压状态下的血压比正常血压影响更大的特点.在10～40mg的剂量范围内,口服给药对血压无明显影响.2.Pro既非α肾上腺素受体阻断剂,也不是典型的钙通道阻滞剂.3.Pro可通过抑制Ca2+释放和(或)Ca2+内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2+]i的升高.其对通道的可能影响在本文作了讨论.4.Pro似能促使PKC从胞浆向细胞膜转移,其扩血管效应似为其降Ca2+作用、其升高cAMP和cGMP的作用(本室以前的工作)、及其对PKC影响等几方面的综合结果.
