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RP-HPLC法测定大鼠血浆的普鲁托品浓度及其药代动力学研究
普鲁托品(protopine,Pro)又名fumarine,是从罂粟科(Papaveraceae)的夏天无、紫金龙等植物中提取的一种异喹啉生物碱.现代药理学研究表明,Pro有抗血小板聚集[1]、解痉镇痛[2]、舒张血管平滑肌[3-5]及抗实验性心律失常[6]等作用,但有关Pro在生物体内处置及药代动力学研究未见报道.本研究建立了Pro的RP-HPLC测定法,并研究了Pro在大鼠的体内过程及其药代动力学参数,为临床应用提供实验资料.
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普鲁托品固体脂质纳米粒的制备及抗炎效果
采用热熔分散法制备不同处方的普鲁托品固体脂质纳米粒用于透皮给药.结果以三硬脂酸甘油酯为脂质材料、大豆磷脂为乳化剂的制品粒径小[(126.2±1.7)nm]、包封率高(92.7％).体外透皮试验表明,该制品12h累积渗透率为78.5％,明显高于溶液组(32.4％).并且,该制品对Freund's完全佐剂所致的佐剂性关节炎大鼠有较强的疗效,抗炎活性与扶他林组相当.
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RP-HPLC法测普鲁托品在大鼠体内分布和排泄
目的用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠的尿、粪、肝和脑等组织中普鲁托品(protopine,Pro)的药物浓度,并对Pro在大鼠体内的分布和排泄过程进行研究.方法流动相为甲醇、水和体积分数2.0 mol*L-1乙酸(80∶20∶2),以ODS-C18柱分离,紫外检测器检测,波长为285 nm,生物样品在碱性条件下,经两次乙醚处理,可获得良好的分离效果.为全面了解Pro在大鼠体内的代谢过程,给大鼠尾静脉注射Pro 10 mg*kg-1后,测定不同时间各组织中Pro的含量.结果静脉给药后,Pro快速分布到肺、肾、脾、脑、小肠、心脏、脂肪、睾丸、肝脏、胃壁及骨骼肌、以肺、肾、脾、脑、肠组织中药物浓度较高,尤以肺组织浓度高.药后3 h各组织中药物浓度下降,但睾丸中仍维持较高浓度.实验还发现,药后5 min即可测得尿中有原形药,12 h尿中累积排泄量为给药量的30.21%,48h尿中累积排泄量为给药量的36.87%.原形药经胆汁及粪排泄量不足1%.药后5 min及15 min血浆蛋白结合率均低于5%.结论普鲁托品在大鼠体内广泛分布,部分经尿排泄,血浆蛋白结合率低.
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普鲁托品对豚鼠离体心房生理特性的影响
目的:观察普鲁托品(protopine,Pro)对豚鼠离体心房生理特性的影响,并探讨其作用机制.方法:利用豚鼠离体心房测定其自动节律、收缩力和功能性不应期,并观察普鲁托品对正阶梯现象和静息后增强的影响.结果:测定右心房自动节律和收缩力作为药前对照,给予普鲁托品(0.1～300μmol.L-1)可浓度依赖性地明显抑制心房的自律性,但较低浓度时Pro对心房收缩力无明显影响,在较高浓度时(大于10μmol.L-1)才明显抑制右心房的收缩力.Pro 300μmol.L-1时对上述两项指标原抑制率为65%±15%和79.56%±9.61%.Pro 50μmol.L-1可使左心房的功能性不应期A(FRP)由药前A(199.50±15.82)ms延长至药后10min的(235.00±20.11)ms(P＜0.01,n=6).实验还发现Pro 50μmol.L-1可在5min内取消Ca2+所致的正性变时作用,1h后心房率降到(119±16)beats.min-1(P＜0.01,n=5).Pro 100、300μmol.L-1能明显抑制正阶梯现象(P＜0.01,n=6),但不能使之翻转.Pro100μmol.L还能明显抑制左心房静息后增强效应.结论:普鲁托品具有降低心房自律性、抑制心房肌收缩力、延长其功能性不应期的作用,其负性变频和负性变力效应可能与该药抑制心肌细胞外钙内流和内钙释放有关.
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生物样品中普鲁托品的HPLC测定方法和普鲁托品在大鼠体内药代动力学
本文建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠血浆、尿、粪、肝组织匀浆中药物浓度的方法.流动相为甲醇、水和10%冰醋酸,以C18柱分离,紫外检测波长为285nm,生物样品在碱性条件下经两次乙醚处理可获得良好分离.血浆样品低检测浓度为
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RP-HPLC法测定十二指肠给予普鲁托品在大鼠体内的药代动力参数
目的十二指肠灌胃测定普鲁托品(protopine,Pro)在大鼠体内的药代动力学参数.方法流动相为甲醇-水-10%乙酸(80:20:2),以ODS-C18柱分离,紫外检测器检测,波长为285nm,血浆在碱性条件下,经两次乙醚处理,可获得良好的分离效果.给大鼠十二指肠灌胃Pro 10mg.kg-1后,测定血药浓度及药代动力学参数.结果给大鼠十二指肠灌注Pro 10mg/kg后,测碍T1/2a,t1/2β,CL,Vd,Tmax,Cmax,Auc和F分别为0.06h,1.25h,5.13L/h,9.28L,0.43h,0.20μg/ml,0.37ug.h/ml和23.87%.结论十二指肠灌注普鲁托品在大鼠体内吸收快,分布快,生物利用度低.
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普鲁托品对豚鼠气管平滑肌的作用
目的观察普鲁托品(Protopine,Pro)对气管平滑肌的影响.方法豚鼠离体气管条法和整体药物引喘法.结果①Pro能明显抑制组织胺、乙酰胆碱引起的豚鼠离体气管收缩,大反应压低呈非竞争性拮抗,与氨茶碱(Ami)作用相似.pD2′分别为3.76和4.16,Pro与Ami合并应对组胺引起豚鼠离体气管条收缩具有协同的抑制作用.②Pro 16mg/kg、32mg/kg、64mg/kg腹腔注射剂量依赖性延长组胺诱发的引喘潜伏期,抽搐动物数亦随剂量增加而减少,与氨茶碱作用相似,但二药合用与一药单用相比,其引喘潜伏期无显著性差异.结论普鲁托品可抑制豚鼠气管平滑肌的收缩并能产生一定的平喘效果,但与氨茶碱合用,其协同作用尚不能肯定.
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普鲁托品对大鼠血压的影响
目的观察比较普鲁托品对实验性高血压大鼠模型和正常大鼠血压的影响,评价其可利用性.方法采用肾动脉双肾双夹(2K2C)法制作大鼠肾血管性高血压模型,分别对高血压和正常大鼠静脉及口服给药,观察大鼠血压和心率的变化.并观察Pro对大鼠胸主动脉条的舒张作用.结果普鲁托品1mg@kg-1及2mg@kg-1静注,均可使肾性高血压大鼠的收缩压(SAP)和舒张压(DAP)明显下降,且随剂量的增加而增加.在正常血压大鼠,普鲁托品1mg@kg-1静脉注射,大鼠血压和心率未见明显变化,但剂量为2mg@kg-1(静脉注射)时可降低SAP和DAP.另一方面,普鲁托品10、20、40mg@kg1灌胃给药,连续观察4h,血压均未受明显影响.Pro 3×10-5mol@L-1及10-4mol@L-1均明显降低去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的动脉条收缩幅度.结论普鲁托品静脉可通过舒张血管平滑肌,降低外周阻力来降低血压,具有作用温和、起效较快、持续时间较短、对高血压状态下的血压比正常血压影响更大的特点.在10～40mg@kg-1的剂量范围内,口服给药对血压无明显影响.
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普鲁托品对大鼠血压的影响及扩血管作用机理研究
目的本实验旨在观察比较普鲁托品(protopine,Pro)对实验性高血压模型和正常大鼠血压的影响,评价其可利用性,并利用大鼠胸主动脉条和培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,探讨其对离体血管条舒张作用的特点、细胞内游离钙浓度和蛋白激酶C活性的影响,进一步阐明其扩血管的作用机理.方法1.采用肾动脉双肾双夹2K2C)法制作大鼠肾血管性高血压模型,分别对高血压和正常大鼠静脉及口服给药,观察大鼠血压的变化;2.应用血管平滑肌等张收缩的方法观察Pro对大鼠胸主动脉条的舒张作用,并采用无Ca2+-复Ca2+的实验法,间接观察Pro对细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的可能影响;3.利用钙荧光指示剂Fura-2/AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的[Ca2+]i的升高的影响;4.采用同位素γ-32P-ATP催化活性测定法检测血管平滑肌细胞的蛋白激酶C(PKC)活性.结果1. Pro 1mg@kg-1及2mg@kg.静注,均可使肾性高血压大鼠的收缩压(SAP)和舒张压(DAP)明显下降,且随剂量的增加而增加(SAP降低幅度分别为10.1%和20.4%),持续时间约15～30min,用药前后心率变化不明显.在正常血压大鼠,Pro1mg@kg-1静脉注射大鼠血压和心率未见明显变化,但剂量为2mg@kg-1(静脉注射)时也可降低SAP和DAP,SAP由原来水平122.5±16.7mmHg降至111.8±18.9mmHg,较原水平降低8%,30min已基本恢复,用药后心率亦无明显改变.另一方面,Pro10、20、40mg@kg-1灌胃给药,连续观察4h,血压均未受明显影响.2.在离体胸主动脉血管条,Pro 3×10-5mol@L-1及10-1mol@L-1均明显降低去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的动脉条收缩幅度,使二者的量效曲线呈非平行右移,大反应压低,PD2值分别为5.06和5.05.在无钙Krebs液中,Pro10-5、3×10-5及10-4mol@L-1对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2+后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用.3.在Fura-2/AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,静息时各浓度的Pro对[Ca2+]i无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 5 × 10-5mol@L-1能降低NA所致[Ca2+]i的升高,对KCl引起的[Ca2+]i升高有降低趋势,但无统计学意义;当Pro的浓度增加到10-4mol@L-1时,对NA和KCl引起的[Ca2+]i升高均有明显的抑制作用,对二者的抑制率分别为21.1%和25.6%,统计学上无显著差异.4.在无激动剂预处理的动脉条,随着Pro剂量的增加,胞浆PKC活性有略微下降趋势,而胞膜PKC活性却有略微上升趋势,但二者均无统计学显著差异,PKC的总活性与空白组比较也未见明显变化;另一方面,在NA预处理组,Pro对被NA所升高的血管平滑肌细胞胞浆内PKC的活性有降低的趋势,(无统计学显著差异),而明显升高胞膜PKC的含量,对PKC的总量亦无明显影响.结论1.Pro静脉可通过舒张血管平滑肌,降低外周阻力来降低血压,具有作用温和、起效较快、持续时间较短、对高血压状态下的血压比正常血压影响更大的特点.在10～40mg的剂量范围内,口服给药对血压无明显影响.2.Pro既非α肾上腺素受体阻断剂,也不是典型的钙通道阻滞剂.3.Pro可通过抑制Ca2+释放和(或)Ca2+内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2+]i的升高.其对通道的可能影响在本文作了讨论.4.Pro似能促使PKC从胞浆向细胞膜转移,其扩血管效应似为其降Ca2+作用、其升高cAMP和cGMP的作用(本室以前的工作)、及其对PKC影响等几方面的综合结果.
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普鲁托品对气管平滑肌的作用及其机理研究
目的观察普鲁托品(Pro)对气管平滑肌的影响,并探讨其作用机理.方法1、离体实验,观察不同浓度Pro、氨茶碱、以及两者合并应用对组织胺、乙酰胆碱预收缩的豚鼠离体气管螺旋条的舒张作用及其量效反应.2、在体实验,以0.1%磷酸组胺雾化吸入1os引喘,记录不同浓度的Pro、氨茶碱及两者合并应用对豚鼠引喘潜伏期的影响.3、放射免疫法测定Pro对家兔气管平滑肌中环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)水平的影响.4、应用高效液相色谱(HPLC)法检测Pro对豚鼠气管平滑肌磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)活性的影响.结果1、Pro能明显抑制组织胺、乙酰胆碱引起的豚鼠离体气管条收缩,与氨茶碱作用相似.Pro使组织胺、乙酰胆碱的量效曲线右移,大反应压低,呈非竞争性拮抗.pD2/分别为3.76、4.16 Pro与氨茶碱合并应用对组胺引起的豚鼠离体气管条收缩具有协同的抑制作用.2、0.1%磷酸组胺10秒雾化吸入引起的豚鼠哮喘模型中,Pro 16mg. kg-1、32mg. kg-1、64mg.kg-1腹腔注射呈剂量依赖性延长组胺诱发的引喘潜伏期,抽搐动物数亦随剂量增加而减少,与氨茶碱作用相似,但二药合用与一药单用相比,其引喘潜伏期无显著性差异.3、Pro能增加家兔气管平滑肌中cAMP、cGMP水平.4、Pro 30μmol/L、100μmol/L能浓度依赖性的抑制PDE活性.结论Pro可抑制豚鼠气管平滑肌的收缩产生一定的平喘效果,但与氨茶碱小剂量合用,其协同作用尚不能肯定.其作用机制之一可能为Pro抑制气管平滑肌PDE活性,提高气管平滑肌细胞中cAMP、cGMP水平,进而松弛气管平滑肌.
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普鲁托品对猫血流动力学的影响
目的观察普鲁托品对麻醉猫血流动力学的影响.方法利用麻醉开胸猫测定血流动力学的各项指标的变化.结果静脉给药1mg/kg及2mg/kg普鲁托品,降低麻醉猫的SAP,DAP,MAP,+dp/dtmax,-dp/dtmax,LVST,LVWI,CI,TPR,且随剂量加大而增强.两个剂量降低心率显著持久.结论普鲁托品通过抑制心肌收缩力及降低外周阻力来降低血压,并通过抑制心脏自律性,减慢心率,终使左心做功降低,心肌耗氧量减少.
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香附四物汤全方及其效应部位中3个生物碱类成分在比格犬体内的药动学比较研究
目的:研究香附四物汤全方水提液(QF)及其效应部位(BW)中3个生物碱类成分经口服给药后药物代谢动力学特征的差异.方法:采集比格犬灌胃QF及BW后不同时间点的血浆样本,采用LC-MS/MS以多反应离子监测(MRM)方式进行正离子检测,测定血浆中普鲁托品、延胡索乙素、四氢非洲防己碱的浓度,DAS软件计算主要药动学参数.结果:普鲁托品在QF与BW中的各项参数除Cmax外差异没有统计学意义,BW中Cmax大于QF(P ＜0.05)；延胡索乙素在体内消除缓慢,QF和BW均出现了双峰现象,QF中Tmax、AUC0～T与BW相比明显增大(P＜0.05)；四氢非洲防己碱达峰较快,BW中Cmax大于QF(P＜0.05).结论:QF和BW药动学参数的差异有统计学意义,提示两者的差异成分会对普鲁托品、延胡索乙素和四氢非洲防己碱的体内过程产生影响.
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普鲁托品对缺氧诱导的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的作用
目的观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响,以卡托普利为对照探讨普鲁托品平滑肌细胞增殖的作用.方法采用析因实验设计,研究普鲁托品和卡托普利在常氧或缺氧条件下对培养兔平滑肌细胞数量、[3H]-TDR、MTT的作用.结果缺氧明显增加平滑肌细胞的数量,促进DNA的合成及细胞超微结构改变;1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L普鲁托品均能逆转缺氧所致的细胞数量、MTT、[3H]-TDR的变化,且随浓度的增加,此抑制作用愈显著.结论缺氧本身可诱导平滑肌细胞增殖,普鲁托品抑制缺氧诱导的平滑肌细胞增殖,可望成为临床抗动脉粥样硬化或PTCA后再狭窄新的有效药物.
