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体外定点突变技术文献资料
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PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体及其功能的研究
目的:用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体,并比较研究FALL-39及其突变肽的功能.方法:采用PCR体外定点突变技术(PCR-SDM),设计一对方向相反的引物,其中一个引物引入一个突变点,应用高保真的Polybest DNA 多聚酶进行含FALL-39肽的PGEXλ1T质粒的PCR扩增,使FALL-39第22位密码子由CAG突变为AAG,将扩增片段自身连接后克隆入工程菌JM109中使其表达其突变肽(FALL-39-lys22),纯化后与FALL-39进行抗菌活性比较.结果:DNA测序结果表明在预期位点发生突变,突变后FALL-39-lys22抗菌活性增强,在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加,较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加.