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卵巢癌患者血清miR-210、miR-126与临床病理特征及预后关系探讨
目的:研究卵巢癌患者血清微小RNA-210(miR-210)和微小RNA-126(miR-126)表达水平及其与患者临床病理特征及预后的关系.方法:选取102例本院确诊的卵巢癌患者作为观察组,另选取同期本院健康体检的女性志愿者102例为对照组.采用qRT-PCR法检测两组血清miR-210、miR-126相对表达量,根据检测中位值将miR-210、miR-126分为高表达组与低表达组,观察其与患者临床病理特征的关系,受试者工作特征曲线(ROC)法分析miR-210、miR-126表达对卵巢癌的预测价值,Kaplan-Meier分析卵巢癌患者生存,logistic多元回归分析影响卵巢癌发生的危险因素.结果:与对照组相比,观察组血清miR-210表达水平升高,miR-126表达水平降低(P＜0.05);miR-210、miR-126均与患者淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及糖类抗原125水平相关,且miR-210与组织类型相关(P＜0.05);miR-210、miR-126的曲线下面积分别为0.789、0.836,敏感度分别为96.6％、67.8％,特异度分别为51.2％、95.4％;miR-210低表达组无生存进展期(PFS)、总体生存时间(OS)均高于高表达组,miR-126高表达组PFS、OS均高于低表达组(P＜0.05);miR-210、miR-126均为影响卵巢癌发生的独立危险因素.结论:卵巢癌患者的血清miR-210上调表达,miR-126下调表达,均与卵巢癌发生发展有关,均可能作为临床诊断、监测病情及评估预后的重要指标.
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miR-126基因敲减对小鼠胸腺淋巴细胞发育的影响
目的 研究miR-126基因敲减对小鼠胸腺细胞发育的影响,并初步探讨其意义.方法 观察miR-126基因敲减(KD)小鼠胸腺的体积、重量和细胞总数;Real-time PCR检测小鼠胸腺miR-126表达水平;HE染色观察小鼠胸腺形态学结构;FACS检测胸腺中淋巴细胞比例、核抗原Ki-67的表达以及细胞凋亡的变化;后,Western blot检测胸腺中磷酸化AKT(p-AKT)和磷酸化ERK1/2 (p-ERK)的表达.结果 WT和miR-126KD小鼠胸腺体积大小、重量以及细胞总数均无明显差异,但miR-126KD小鼠胸腺miRNA-126表达水平显著下调(P＜0.05).miR-126KD小鼠胸腺组织结构出现形态学异常.与WT小鼠相比,miR-126KD小鼠胸腺CD4+ SP细胞比例及细胞绝对数明显增加(P＜0.05),而CD4+ CD8+ (DP)细胞比例及绝对数则显著减少(P＜0.05),miR-126KD小鼠胸腺CD4+ SP细胞核抗原Ki-67表达显著增加(P＜0.05),且细胞凋亡明显减少(P＜0.05),而DP细胞Ki-67表达则明显减少(P＜0.05).后,miR-126 KD小鼠胸腺淋巴细胞中磷酸化AKT和磷酸化ERK1/2的表达水平明显下调(P＜0.05).结论 miR-126基因敲减可显著影响胸腺细胞特别是CD4+ SP细胞的发育,为后续进一步深入探讨miR-126对T淋巴细胞发育以及功能的影响提供重要的实验基础.
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电针水沟穴对大脑中动脉闭塞大鼠脑缺血后微小RNA-126及靶基因的影响
目的 观察电针水沟穴对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠脑缺血后微小RNA-126(miR-126)及其靶基因磷脂酰肌醇-3-激酶调节亚单位(PIK3R2) mRNA、出芽相关蛋白-1(SPRED1) mRNA表达的影响,从血管新生角度探讨电针治疗脑缺血的可能机制.方法 将20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、治疗组,每组5只.参照改良Longa线栓法复制MCAO大鼠模型,假手术组不插入线拴.制模后治疗组于水沟穴(大鼠唇裂鼻尖下1 mm正中处,向上斜刺1 mm)与右耳根部皮肤接G6805-1A型治疗仪进行电针治疗,1 mA电流、2 Hz,持续留针30 min,连续治疗3d;正常组、假手术组、模型组制模后不进行处理.采用Berderson评分评价大鼠神经功能缺损程度;用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-126及PIK3R2、SPRED1的mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠有不同程度的神经功能缺损,Berderson评分明显增高(分:11.20±1.64比0,P＜0.01),治疗后Berderson评分较模型组明显降低(分:7.20±1.48比11.20±1.64,P＜0.01).模型组miR-126、PIK3R2及SPRED1的mRNA表达均较正常组明显升高[miR-126(2-△△Ct):1.13±0.48比0.16±0.12,PIK3R2 mRNA(2-△△Ct):12.03±6.09比0.42±0.33,SPRED1 mRNA(2-△△Ct):8.77±3.85比0.21±0.40,均P＜0.01];治疗组miR-126表达较模型组明显升高(2-△△Ct:1.93±0.81比1.13±0.48),PIK3R2、SPRED1的mRNA表达较模型组明显明显降低[PIK3R2 mRNA (2-△ △Ct):5.78±3.61比12.03±6.09,SPRED1 mRNA (2-△△Ct):3.90±3.24比8.77±3.85,P＜0.05或P＜0.01].结论 电针水沟穴能促大鼠脑缺血后神经功能体征的恢复,其机制可能与其调控miR-126及其靶基因从而促进了脑血管新生有关.
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微小RNA-126与冠心病发生发展关系的研究进展
微小RNA( miRNAs)是一类高度保守的内源性非编码小分子单链RNA,能通过特异性识别靶基因mRNA,在翻译水平调节基因表达,从而调节细胞分化、生长发育、增殖与凋亡、激素分泌等各种过程。现已经发现多种miRNA,其中微小RNA-126(miR-126)主要存在于血管内皮细胞和血小板当中,与血管的生成、发育、修复功能密切相关,与高血压、冠心病、心力衰竭等心血管疾病密切相关。其中,冠心病即将成为危害全人类健康的头号致死杀手,其诊断和治疗备受关注。本文就miR-126在冠心病发生发展过程中的作用进行系统综述。
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miR-126对HL-60细胞系增殖和凋亡等生物学行为的影响
目的 观察转染微小RNA (miR)-126 mimics/inhibitor对人类急性早幼粒细胞白血病细胞系(HL-60)增殖与凋亡的影响.方法 培养HL-60细胞,RT-PCR测定miR-126相对表达水平,利用瞬时质粒转染技术,转染miR-126 mimics/inhibitor,通过CCK-8,流式细胞技术及克隆形成实验检测HL-60细胞增殖、凋亡能力.结果 miR-126 mimics组0h、24 h、48 h、72 h细胞增殖能力显著减低(P＜0.05);G1期、S期、G2期细胞增殖明显受抑制(P＜0.05);晚期凋亡及早期凋亡(UR+LR)凋亡率增高(P＜0.05);平均克隆形成率显著减低(P＜ 0.05);miR-126 inhibitor组0h、24 h、48 h、72 h细胞增殖能力明显增强(P＜0.05);G1期、S期、G2期增殖能力增强(P＜0.05);UR+LR明显减低(P＜0.05);平均克隆形成率显著升高(P＜0.05).结论 miR-126能够抑制HL-60细胞增殖能力,促进细胞凋亡,可能作为抑癌性的微RNA在白血病的发生发展中发挥作用.
关键词： 微小RNA-126 急性白血病 增殖 凋亡 急性早幼粒细胞白血病 -
冠状动脉粥样硬化性心脏病血浆微小RNA-126的表达水平及其临床意义
目的:探讨微小RNA (miRNA)-126在冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血浆中的表达情况及临床意义. 方法:收集2015年2月至2015年6月在山西医科大学第一医院心内科住院的114例冠心病患者(冠心病组)和40例健康者(对照组)的血浆,将冠心病组分为急性心肌梗死组(AMI组,n=40)、不稳定型心绞痛组(UA组,n=38)、稳定型心绞痛组(SA组,n=36)3个亚组,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组血浆miRNA-126的表达水平,并分析各组间的表达差异. 结果:AMI组miR-126的相对表达水平(0.65±0.53)与对照组(1.0)、UA组(0.93±0.68)、SA组(0.96±0.55)相比明显下降,差异有统计学意义(P均＜0.05);UA组、SA组与对照组相比有下降趋势,但差异无统计学意义(P均＞0.05).结论:血浆miR-126在冠心病患者中的表达存在差异,miR-126在AMI患者中表达明显下降,可能成为诊断AMI的新型标志物.
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微小RNA-126在血管内皮细胞中的生物学功能
内皮细胞在维持血管完整性、再生及创伤修复等方面发挥重要作用,微小RNA-126特异地存在于不同来源的内皮细胞内,通过对相应mRNA及蛋白表达发挥调控作用,进而调节心血管的生长发育及损伤修复.
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丹参多酚酸盐对大鼠梗死后心肌组织血管新生的影响及机制研究
目的:观察丹参多酚酸盐对心肌梗死后大鼠血管新生和血管生长因子(VEGF)、微小RNA-126(miR-126)表达的影响. 方法:将55只雄性SD大鼠随机分为丹参多酚酸盐低剂量组(LS组,n=15)、丹参多酚酸盐高剂量组(HS组,n=15)、模型组(M组,n=15)及假手术组(S组,n=10).HS、LS及M组大鼠行冠状动脉左前降支结扎术建立急性心肌梗死(AMI)模型后,分别予腹腔注射丹参多酚酸盐30、15mg/(kg·d)及相应剂量生理盐水.S组只穿线不结扎,予腹腔注射相应剂量生理盐水,每日1次,共7d.4周后,采用免疫组织化学法检测各组大鼠心肌梗死边缘区微血管密度(MVD)和VEGF的表达;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌梗死边缘区miR-126、VEGF mRNA表达水平. 结果:M组MVD、VEGF蛋白以及mRNA表达均高于S组(P＜0.05),M组miR-126表达低于S组(P＜0.05);LS和HS组MVD、VEGF及miR-126表达均高于M组(P＜0.01);HS组MVD、VEGF蛋白、VEGFmRNA及miR-126表达高于LS组(P＜0.01). 结论:丹参多酚酸盐对心肌梗死后大鼠血管新生有促进作用,其作用机制可能与上调心肌miR-126表达、促进VEGF表达有关,且呈剂量依赖性.
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冠心病患者尿miR-126的表达及其与阿司匹林抵抗的关系
目的 探讨冠心病患者尿miR-126的表达及其与阿司匹林抵抗的关系.方法 收集118例冠心病患者作为冠心病组,118例体检健康者作为健康对照组,采用实时荧光定量PCR法检测尿miR-126表达量,并用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-ch)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-ch)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)、三酰甘油(TG)、C-反应蛋白(CRP)、葡萄糖(Glu)水平,通过光透视比浊法检测血小板聚集率,以区分阿司匹林抵抗(AR)和非阿司匹林抵抗(NAR).结果 冠心病组HDL-ch水平明显低于健康对照组(P＜0.05);ApoB、TG和Glu水平则高于健康对照组(P＜0.05).冠心病组的尿miR-126水平低于健康对照组(0.19±0.03 vs 0.28±0.03,t=2.30,P=0.02);但在AR和NAR患者中的表达水平差异无统计学意义(0.19±0.08 vs 0.21±0.09,t=1.80,P＞0.05).冠心病组AR发生率为16.10％(19/118);健康对照组中AR发生率为23.33％(27/118),差异无统计学意义(X2=4.84,P＞0.05).健康对照组中发生AR者尿miR-126的表达水平明显低于NAR者(0.24±0.04 vs 0.29±0.06,t =7.53,P＜0.05);此外,尿miR-126水平降低可导致健康人AR的发生率显著增加(OR=0.50,95％CI:0.03 ～0.96,P＜0.05).结论 冠心病患者尿miR-126表达低于健康对照者,尿miR-126可以作为健康人发生AR的独立危险因素.
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靶向miR-126慢病毒表达载体的构建及意义
目的:检测微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)在CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)中的表达水平,同时构建基于慢病毒的miR-126反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides,ASOs)表达载体.方法:实时定量PCR特异性探针法检测miR-126在Tregs中的表达水平;针对miR-126序列,设计合成其ASOs序列,退火后连接至经Age Ⅰ酶和EcoR Ⅰ酶双酶切的pGCsil-LV-GFP载体上,连接产物转化DH5α感受态细胞,对经PCR鉴定为阳性的载体(命名为pGCsil-miR-126-ASOs)进行测序分析;将构建成功的pGCsil-miR-126-ASOs表达质粒和pHelper l.0、pHelper 2.0质粒共转染293T细胞,浓缩病毒颗粒并测定所获病毒滴度;将制备好的病毒颗粒感染经TGF-β体外诱导培养的小鼠CD4+ CD62L+初始T细胞,72 h后用流式细胞仪检测其Foxp3的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示miR-126在CD4+ CD25+ Tregs中的表达明显高于CD4+ CD25-T细胞(P＜0.01);测序结果证明成功构建pGCsil-miR-126-ASOs重组质粒载体,包装并获得高浓度的慢病毒颗粒,病毒滴度为9×108TU/mL;重组的病毒能明显抑制Tregs的外周诱导(P＜0.05).结论:成功构建miR-126 ASOs的慢病毒表达载体,并获得高浓度的病毒颗粒.
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检测微小RNA-126对于评判小细胞肺癌预后的临床价值
目的 明确检测微小RNA-126对于评判小细胞肺癌(SCLC)预后的临床价值.方法 纳入我院收治的SCLC患者,并进行为期12个月的随访以确认预后,比较不同预后患者组间各项指标的差异性;使用ROC进一步评判相应指标对于不良预后的评判价值.结果 组间资料比较显示:主动吸烟史、肺癌遗传史、病理分型、ProGRP、SCC、miRNA-126存在显著差异性(P均<0.05);其中广泛期SCLC、较高的ProGRP、较高的miRNA-126显著影响其预后;ROC曲线显示上述2项肿瘤标志物评判SCLC患者发生不良预后的临界值分别为42.512 ng/L、1.6012-△△Ct.结论 miRNA-126对于评估SCLC不良预后具有良好的临床价值.
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微小RNA-126和微小RNA-7在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义
目的 探讨微小RNA-126(miR-126)和微小RNA-7(miR-7)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达情况及其与ESCC临床病理特征、预后之间的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测116例ESCC组织和癌旁正常组织中miR-126和miR-7的表达差异,并对miR-126和miR-7表达情况与ESCC患者临床病理特征、预后的相关性进行统计学分析.结果 miR-126不同程度低表达病例数为73(62.9％),正常表达病例数为35 (30.2％),高表达病例数为8(6.9％);miR-7不同程度低表达病例数为52(44.8％),正常表达病例数为35(30.2％),高表达病例数为29 (25.0％).miR-126和miR-7表达降低组无瘤生存期均较非降低组短(x2=4.268,P＜0.05;x2 =4.993,P＜0.05);miR-126低表达与ESCC肿瘤位置、家族史和饮酒相关(x2=14.564,P＜0.05;x2=5.691,P＜0.05;x2 =4.971,P＜0.05),与性别、年龄、分化程度、浸润程度、淋巴转移、吸烟不相关(均P ＞0.05);miR-7低表达与ESCC的临床病理特征均不相关(均P＞0.05).结论 miR-126和miR-7的低表达可能与ESCC患者预后相关,具有一定的临床检测意义.
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血浆miR-126表达与冠心病患者PCI术后炎症反应的关系
目的 探讨血浆微小RNA-126表达与冠心病(CHD)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后炎症反应的关系.方法 选择行PCI术治疗的CHD患者72例,分为急性冠脉综合征(ACS)-PCI组37例、稳定型心绞痛(SAP)-PCI组35例;动脉造影检查结果正常者37例为对照组.统计PCI术中球囊直径、球囊扩张次数和球囊扩张总压力;用实时荧光定量PCR法检测血浆miR-126表达;用酶联免疫吸附法检测各组血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和可溶性血管内皮细胞黏附分子(sVCAM-1);采用Spearman相关分析血浆miR-126表达与其他指标的关系.结果 ACS-PCI组与SAP-PCI组术中球囊直径、球囊扩张次数和球囊扩张总压力比较差异无统计学意义(P均＞0.05).PCI术前ACS-PCI组与SAP-PCI组血浆miR-126表达低于对照组(P＜0.05),血清hs-CRP、sVCAM-1水平高于对照组(P均＜0.05).PCI术后ACS-PCI组与SAP-PCI组血浆miR-126表达较术前下降(P＜0.05),而hs-CRP、sVCAM-1表达较术前升高(P均＜0.05).CHD患者血浆miR-126表达与血清hs-CRP、sVCAM-1水平及球囊扩张次数、球囊扩张压力呈负相关(r分别为-0.433、-0.471、-0.440、-0.393,JP均＜0.05).结论 冠心病患者血浆miR-126呈低表达,miR-126可能参与PCI术后炎症反应.
关键词： 冠心病 经皮冠状动脉介入治疗 微小RNA-126 炎症反应 -
孕晚期子痫前期患者人院时外周血、分娩时脐血及胎盘组织miR-126表达观察
目的 观察孕晚期子痫前期(PE)患者人院时外周血、分娩时脐血及胎盘组织微小RNA-126 (miR-126)表达,并探讨其意义.方法 PE孕晚期孕妇52例(观察组),孕晚期正常孕妇68例(对照组),采用实时荧光定量PCR法检测两组孕妇血清、脐血血清、胎盘组织miR-126,收集两组临床资料,分析观察组孕妇血清miR-126水平与临床指标的相关性.结果 两组孕妇血清、胎盘组织miR-126比较,P均＜0.05;两组年龄、孕次、高收缩压、高舒张压、血肌酐、尿酸、分娩孕周、定期检查比率、新生儿质量、白蛋白比较,P均＜0.05;观察组孕妇血清miR-126水平与年龄呈负相关(-4.02,P＜0.05),而与分娩孕周、收缩压、舒张压、新生儿体质量、白蛋白、血肌酐、尿酸均无相关性(P均＞0.05).结论 PE孕晚期孕妇血清和胎盘组织中niR-126升高,血清miR-126水平与年龄相关,孕晚期对孕妇血清miR-124的检测有助于PE高危人群的筛查.
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子宫颈癌组织中miR-126异常表达的意义
目的 探讨子宫颈癌组织中miR-126表达变化与患者临床病理特征、疗效及预后的关系.方法 采用荧光定量PCR法检测98例子宫颈癌组织中miR-126表达,分析miR-126高表达、低表达与子宫颈癌患者临床病理参数的关系.术后两年内回访患者,评价手术治疗效果,记录复发及生存情况.结果 miR-126的表达与子宫颈癌分化程度、临床分期、病理分级及淋巴结转移等有关(P均<0.05),与年龄、分型、肿瘤直径无关(P均>0.05).术后2年,miR-126高表达41例中治疗有效34例(82.93％)、无效7例(17.07％);低表达57例中治疗有效39例(68.42％)、无效18例(31.58％);二者比较差异有统计学意义(P<0.05).miR-126高表达41例中生存37例(90.24％)、死亡4例(9.76％);低表达57例中生存46例(80.70％)、死亡11例(19.30％),二者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 宫颈癌组织中miR-126异常表达与肿瘤分化程度、临床分期、病理分级、淋巴结转移、疗效及预后存在一定相关性.
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子宫内膜癌组织中 miR－126、EGFL7表达及意义
目的：探讨微小RNA－126（miR－126）、类表皮生长因子域7（EGFL7）在子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法选择子宫内膜癌患者57例、子宫内膜增生症患者43例，分别取子宫内膜癌组织（内膜癌组）、癌旁正常组织（癌旁组）及子宫内膜增生组织（增生组）。采用qRT－PCR法检测各组miR－126、EGFL7 RNA相对表达量，免疫组化SP法检测微血管密度（ MVD）。结果内膜癌组miR－126 RNA相对表达量低于增生组、癌旁组，增生组低于癌旁组（P均＜0．05）；内膜癌组EGFL7 RNA相对表达量、MVD均高于增生组、癌旁组，增生组高于癌旁组（P均＜0．05）。Pearson相关分析显示，内膜癌组miR－126 RNA相对表达量与EGFL7 RNA相对表达量、MVD均呈负相关（ r分别为－0．507、－0．873，P均＜0．05），EGFL7 RNA相对表达量与MVD呈正相关（r＝0．416，P＜0．05）。内膜癌组miR－126、EGFL7 RNA相对表达量均与患者FIGO分期、淋巴结转移有关（P均＜0．05）。结论子宫内膜癌组织中miR－126呈低表达、EGFL7呈高表达；二者可能共同参与了子宫内膜癌的发生、发展及侵袭、转移过程。
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微小RNA-126与布加综合征血管内皮损伤相关性分析
目的 探讨原发性布加综合征(Budd-Chiari syndrome,BCS)患者血浆中微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)的表达及其与血管内皮损伤的相关性.方法 原发性BCS患者75例为BCS组,体检健康者20例为对照组.实时荧光定量qRT-PCR法检测2组血浆miR-126的相对表达水平,ELISA法检测血清内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、可溶性血管细胞黏附分子-1(soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)水平,并进行组间比较.Pearson相关系数分析血浆miR-126相对表达量与血清eNOS、sVCAM-1水平相关性.结果 BCS组患者血浆miR-126相对表达量(0.43±0.14)及血清eNOS水平[(18.3±1.2)u/mL]均低于对照组[0.98±0.22、(21.1±1.3)u/mL](P＜0.05),sVCAM-1水平[(455.1±37.9)μg/L]高于对照组[(376.8±37.3)μg/L](P＜0.05);BCS患者miR-126相对表达量与血清eNOS水平呈正相关(r=0.634,P＜0.001),与sVCAM-1水平呈负相关(r=-0.503,P＜0.001).结论 原发性BCS患者miR-126表达水平降低,可能是BCS血管内皮损伤的影响因素之一.
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微小RNA-126对卡波西肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
目的 探讨卡波西肉瘤细胞系转染微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)后对细胞迁移和侵袭能力影响.方法 卡波西肉瘤细胞株SLK随机分为miR-126模拟物组、阴性对照组、miR-126抑制物组和抑制物阴性对照组,分别将miR-126模拟物25 ng、阴性对照25 ng、miR-126抑制物250 ng和抑制物阴性对照250 ng加入转染试剂3μL,室温孵育10 min形成转染混合物,分别转染到4组细胞悬液中,孵育48 h后行Transwell小室迁移实验和侵袭实验,将Transwell小室基底膜完整切除,行苏木精染色,光学显微镜下计数细胞迁移数目和细胞侵袭数目.结果 miR-126模拟物组细胞迁移数目[(77.33±7.02)个]和细胞侵袭数目[(25.67±2.52)个]较阴性对照组[(96.67±6.11)、(45.67±2.08)个]、miR-126抑制物组[(138.00±8.00)、(76.67±4.16)个]和抑制物阴性对照组[(101.33±9.29)、(47.33±1.53)个]少(P＜0.05);miR-126抑制物组细胞迁移和侵袭数目较阴性对照组和抑制物阴性对照组多(P＜0.05);阴性对照组细胞迁移和侵袭数目与抑制物阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-126对卡波西肉瘤细胞侵袭和迁移起抑制作用,可能成为卡波西肉瘤的潜在治疗靶点.
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微小RNA-126-3p调控大鼠脊髓损伤后炎性反应的作用及其机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-126-3p调控大鼠脊髓损伤后炎性反应的作用及其机制.方法 建立脊髓损伤SD大鼠模型,利用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测大鼠脊髓损伤后3、7、14d脊髓组织中miR-126相对表达量,采用脊髓损伤运动功能(BBB)评分方法评估agomir-126注射对急性脊髓损伤模型大鼠运动功能的影响,采用在线靶基因预测数据库Targetscan预测miR-126-3p的靶基因,并采用双荧光素酶报告基因验证miR-126-3p的靶基因,将NEURO-2A细胞转染150 nmol/L浓度miR-126-3p mimics 24 h后,采用Western blot检测细胞白细胞介素(IL)-7蛋白表达水平变化,采用Western blot检测agomir-126给药组和对照组组大鼠损伤节段脊髓组织炎症相关因子表达水平变化.结果 模型组(2.13±0.44)大鼠3d脊髓组织miR-126-3p表达量低于对照组(3.69 ±0.59,t=2.769,P=0.021).模型组(1.85±0.42)大鼠7d脊髓组织miR-126-3p表达量低于对照组(3.77±0.88,t=2.485,P=0.026).模型组(1.33 ±0.28)大鼠14 d脊髓组织miR-126-3p表达量低于对照组(3.82±0.92,t=3.388,P=0.0l9).agomir-126给药组3d的BBB评分(4.690±0.530)高于对照组(3.650±0.350,t=3.661,P=0.006);agomir-126给药组7d的BBB评分(5.880±0.620)高于对照组(3.690±0.650,t=5.452,P=0.001);agomir-126给药组14d的BBB评分(6.720±0.770)高于对照组(3.770±0.470,t=7.320,P=0.000).IL-7-WT-3'UTR与miR-126-3p mimic共同转染组荧光素酶活性比值(6.920±0.556)显著低于对照组(13.690±0.925,t=10.870,P=0.000).miR-126 mimic转染组(0.23±0.14) NEURO-2A细胞IL-7蛋白表达低于对照组(0.86±0.17,t=4.955,P=0.009).给药组(0.369±0.093) SCI大鼠脊髓炎症指标IL-7蛋白表达量低于对照组(0.956±0.124,t=6.559,P=0.003);给药组(0.572±0.085)SCI大鼠脊髓炎症指标IL-1β蛋白表达量低于对照组(0.764±0.086,t=2.750,P=0.026);给药组(0.133±0.009) SCI大鼠脊髓炎症指标TGF-β蛋白表达量低于对照组(0.257±0.028,t=7.303,P=0.002).结论 miR-126-3p在脊髓损伤中表达降低,而上调miR-126-3p能对脊髓损伤起着保护作用,其机制可能与其关键靶基因IL-7介导的脊髓损伤炎性反应有关.
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微小RNA-126过表达对乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-126过表达对乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制.方法 将miR-126的模拟物(minics)转染入MCF-7和MDA-MB-231细胞,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-126的表达变化;运用Transwell实验检测转染后细胞侵袭能力的改变.采用生物信息学技术预测miR-126的潜在靶基因,然后,使miR-126的过度表达和通过拟表型实验加以证实.结果 与阴性对照组(MCF-7:0.31±0.06;MDA-MB-231:0.29±0.02)比较,转染miR-126 minics组miR-126表达水平(MCF-7:0.79±0.05;MDA-MB-231:0.71±0.03)明显升高(P＜0.01).TransweU侵袭实验结果显示相对于对照组(MCF-7:102.0±6.2;MDA-MB-231:104.0±8.9),转染miR-126 minics组细胞侵袭能力降低(MCF-7:43.0±7.8;MDA-MB-231:63.0±5.8,P＜0.05).通过生物信息学技术预测了整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)为miR-126的潜在靶基因;miR-126的过度表达明显降低ADAM9蛋白水平,进一步抑制体外乳腺癌细胞浸润,同时,小干扰RNA将ADAM9基因沉默也明显抑制乳腺癌浸润.结论 在乳腺癌进展过程中miR-126可能通过使ADAM9表达下调对肿瘤起到抑制作用.
