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肺炎克雷伯菌中qnr基因检测
目的了解质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr在肺炎克雷伯菌中流行及与ESBLs及对环丙沙星耐药的相关性.方法 纸片扩散法检测药物敏感性,双纸片协同试验检测ESBLs.PCR方法检测qnr基因.结果 62株非重复的肺炎克雷伯菌中,ESBLs阳性率为75.8%(47/62),环丙沙星敏感率为45.2%(28/62),qnr总阳性率为53.2%(42/62).单纯qnrA阳性5株(8%),qnrB9株(14.5%),qnrS10株(16.1%).同时2种qnr基因阳性9株(14.5%),qnrA和qnrB基因阳性1株(1.6%),qnrA和qnrS基因3株(4.8%),qnrB和qnrS基因5株(8%).在环丙沙星耐药株和敏感株中,qnr基因的阳性率分别为58.8%(20/34)和46.7%(13/28).在ESBLs阳性菌株和阴性菌中,qnr的阳性率分别为68%(32/47)和6.6%(1/15).结论 qnr基因主要分布在产ESBLs的肺炎克雷伯菌,与环丙沙星耐药与否无相关.
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产CMY型AmpC酶费劳地枸橼酸杆菌的分子学特性研究
目的 对产CMY型AmpC酶费劳地枸橼酸杆菌进行耐药表型及分子学特性进行研究,探讨研制新的酶抑制剂.方法 对临床分离的两株费劳地枸橼酸杆菌所产CMY型AmpC酶用纸片扩散法、三相水解试验进行耐药表型检测,以该菌总基因组DNA和质粒DNA为模板进行PCR扩增、序列分析、质粒接合试验、构建重组表达载体及AmpC酶检测.结果 两株菌株对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗生素均表现为耐药,对呋喃类和碳青霉烯类表现为敏感;三相水解试验结果显示该菌能水解头孢西丁;PCR扩增出大小为1 146 bp的基因片段,与GenBank上多种CMY亚型的基因序列同源性为97%;质粒接合试验证实质粒上含CMY基因,为可转移质粒.结论 两株菌株所产CMY型AmpC酶为新的CMY型头孢菌素酶,它介导了该菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素耐药,其耐药性能水平传播.
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聚合酶链反应检测mecA和mecI及其对葡萄球菌甲氧西林耐药的影响
目的 了解葡萄球菌甲氧西林耐药基因mecA和调节基因mecR中的抑制基因mecI在葡萄球菌中的分布,探讨mecA、mecI和β-内酰胺酶对甲氧西林耐药性的影响.方法 琼脂稀释法测定158株葡萄球菌苯唑西林MIC;聚合酶链反应检测mecA和mecI;用内切酶TrulⅠ进行mecI酶切分型.结果 158株葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌(SA)66株,凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)92株,葡萄球菌对苯唑西林的总耐药率达44.3%(70/158).158株葡萄球菌中,检出mecA阳性70株,其中SA 8株,CNS 62株.70株mecA阳性葡萄球菌中,检出mecI阳性12株,其中SA 7株,CNS 5株;88株mecA阴性葡萄球菌中未检出mecI.对mecA阴性、苯唑西林MIC≥4 μg/mL的菌株进行抑制实验后,再测定苯唑西林MIC,抑制后MIC下降8倍以上.结论 耐甲氧西林葡萄球菌以mecA为其主要的甲氧西林耐药决定子;β-内酰胺酶和mecI基因对葡萄球菌甲氧西林耐药有一定的影响.
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复合转座子ISEcp1B与IS903介导CTX-M ESBLs新基因亚型传播机制的研究
目的 研究肺炎克雷伯菌Kp49,CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)新亚型的基因环境,并分析其传播的分子机制.方法 用K-B药敏法分析肺炎克雷伯菌Kp49的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增CTX-M-G1、TEM、SHV、DHA、ACT、IMP-1、VIM-1、ISEcp1B、IS903及Ⅰ类整合子,PCR扩增ISEcp1B下游的 CTX-M型ESBLs全序列并测序.结果 肺炎克雷伯菌Kp49只对亚胺培南敏感,对其余21种抗菌剂均耐药.检出TEM、SHV、CTX-M-G1及DHA基因Ⅰ类整合子.检出1种新的CTX-M ESBLs基因亚型,全长876 bp,与blaTX-M-14相比有1个核苷酸不同(GenBank登陆号:EF446126).blaCTX-M-like的上游是ISEcp1B的遗传元件,下游是插入序列IS903的保守序列组成复合转座子.可能是ISEcp1B序列通过转座子机制俘获β-内酰胺酶,并提供-35及-10位点2个启动子,对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达起重要的调控作用.结论 插入序列ISEcp1B与IS903组成的复合转座子可能介导了新的CTX-M ESBLs基因亚型的水平传播,并驱使其高度表达,使Kp49对多种抗菌剂耐药.
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多重PCR检测临床产ESBLs阴沟肠杆菌的耐药基因型研究
目的 了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌的耐药性、阳性率及基因分布特点.方法 改良双纸片法检测80株临床分离阴沟肠杆菌对14种抗生素的耐药性及ESBLs表型,多重PCR检测鉴定ESBLs基因型,DNA测序确认DNA序列.结果 80株阴沟肠杆菌中,29株检出ESBLs,阳性率36.3%.80株阴沟肠杆菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的阴沟肠杆菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢菌素类抗生素的耐药率高达96.1%.29株细菌所产ESBLs中,12株为TEM型,6株为SHV型,24株为CTX-M型.其中CTX-M-1组9株,CTX-M-9组15株,未检出CTX-M-2组及CTX-M-8/CTX-M-25组.结论 阴沟肠杆菌ESBLs检出率较高,耐药显著.产ESBLs阴沟肠杆菌的主要基因型为CTX-M型.
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45株副流感嗜血杆菌感染及耐药性调查
目的 了解本地区呼吸道感染中副流感嗜血杆菌的感染情况及耐药性,以便有效地指导临床合理用药.方法 对760例呼吸道感染患者的呼吸道分泌物进行剐流感嗜血杆菌的培养及鉴定,以K-B法进行药物敏感性试验.β-内酰胺酶试验采用Nitrocefin纸片法.结果 共分离出副流感嗜血杆菌45株,分离率为5.92%(45/760).药敏结果显示阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素、亚胺培南、头孢他啶、头孢呋辛的耐药性较低,均小于5%.是治疗的首选药物.β-内酰胺酶阳性率为37.78%(17/45).结论 本地区呼吸道感染副流感嗜血杆菌耐约形势严峻,β-内酰胺酶阳性率较高,应引起重视.
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烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及基因型检测
目的 研究烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性,基因型及菌株的同源性,为监控产酶菌株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据.方法 EDTA纸片复合法和E-test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,PCR扩增耐药基因imp、vim、spm和gim,用MIC法测定产金属β-内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度,用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR方法 )确定菌株之间的同源性.结果 42株耐亚胺培南和头胞他啶铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选出18株金属酶菌株、E-test法15株、PCR法12株;PCR法检测到imp阳性菌株4株,vim阳性菌株8株;产金属β-内酰胺酶菌株呈多重耐药,且PCR法阳性产金属酶菌株呈现为高水平耐药;ERIC-PCR结果 显示,18株产金属β-内酰胺酶菌株呈现7种基因模型,其中10株为同一基因模型.结论 经济简便快捷的EDTA纸片复合法可作为首选方法 来对产金属酶铜绿假单胞菌进行筛选,烟台地区临床分离的铜绿假单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因型以vim型为主,阿米卡星、环丙沙星具有较好的抗菌活性,某医院在一定时期曾出现爆发流行.
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烧伤病区产金属酶铜绿假单胞菌的筛选及分析
目的 比较烧伤病区和其他病区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的情况并分析其耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据.方法 采用细菌鉴定药敏分析仪进行铜绿假单胞菌的鉴定及药敏试验.同时采用纸片协同法筛选产金属酶的菌株.结果 在检测的68株铜绿假单胞菌中,产金属酶的有9株,占13.2%.烧伤病区产金属酶的有7株(7/32),占21.9%;其他病区产金属酶的有2株(2/36),占5.6%.产酶株对头孢他啶、头孢噻肟、亚胺培南、环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林、氨曲南的耐药率分别为100%、100%、88.9%、66.7%、88.9%、100%、100%、88.9%,远远高于不产金属酶的铜绿假单胞菌.结论 烧伤病区的铜绿假单胞菌的产酶率比其他病区的高,产金属酶的铜绿假单胞菌对临床常用的多种抗生素具有较高的耐药率,临床必须依据药敏实验结果 使用抗生素.
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志贺菌产ESBLs酶的检测及其耐药性分析
目的 了解本地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)志贺菌的检出率以及耐药情况,为临床治疗菌痢提供试验依据.方法 E-test试验进行ESBLs志贺菌的检测,改良三维试验检测AmpC酶,K-B纸片扩散法进行药敏试验,用WHONET5.4软件进行数据分析.结果 275株志贺菌中,产ESBLs志贺菌12株,检出率为4.4%,未检测出产AmpC酶菌株.产ESBLs组对第1代、第2代、第3代头孢菌素和氨曲南耐约性均明显高于非产ESBLs组,氨苄西林、氯霉素、四环素、复方新诺明耐药率在两组均有较高水平.对亚胺培南、头孢西丁、环丙沙星、庆大霉素较敏感.结论 本地区ESBLs志贺菌检出率虽然较低,但已经有院内感染向社区感染转化的趋势,应引起重视,合理使用抗菌药物至关重要.
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鲍曼不动杆菌ESBLs和金属酶的基因型分析
目的 了解天津地区鲍曼不动杆菌中超广谱β-内酰胺酶和金属酶基因的分布情况.方法 对天津地区6所三级甲等医院临床分离的72株鲍曼不动杆菌,以K-B法进行抗生素敏感试验;用双纸片增效法对亚胺培南耐药菌株进行金属酶表型筛选,并以PCR方法 检测IMP-1、IMP-2、VIM-2型金属酶基因;用三维试验对第三代头孢菌株进行ESBLs表型初筛,并以PCR方法 检测ESBLs基因.结果 8株(8/72)耐药亚胺培南鲍曼不动杆菌中,4株金属酶表型阳性.以PCR方法 检测,1株IMP-1阳性,3株出现IMP-1+IMP-2+VIM-2型金属酶基因同时阳性;30株(30/72)耐第三代头孢鲍曼不动杆菌中,11株产TEM型ESBLs,4株产PER型ESBLs,1株产VEB-1型ESBLs.结论 天津地区鲍曼不动杆菌主要以携带TEM型ESBLS为主,在耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中发现IMP-1、IMP-2和VIM-2型金属酶,并且VEB-1型ESBLs和VIM-2型金属酶为天津地区首次报道.
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产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌对氨基糖甙类药物耐药性及耐药基因研究
目的 研究产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药特性及耐药基因表达.方法 用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、奈替米星和新霉素6种药物对37株产ESBLs大肠埃希菌的低抑菌浓度.用PCR法检测5种氨基糖甙类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实.结果 庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素和奈替米星对37株大肠埃希菌MIC50、MIC90.均大于256 mg/L,其耐药率分别为78.4%、45.9%、72.9%、83.8%和64.9%,而新霉素仍具有较高的抗菌活性.从37株菌中检出5种修饰酶基因,aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ b、aac(6′)-Ⅱ、ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ阳性率分别为56.8%、27.0%、2.7%、5.4%和13:5%,未发现aac(3)-Ⅰ基因.结论 产ESBLs的大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药与修饰酶基因的表达有关.
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产AmpC酶和ESBLs阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性分析
目的 了解阴沟肠杆菌的耐药特性及其产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况.方法 对2005年4月-2007年7月的各类标本进行阴沟肠杆菌的分离培养,用VITEK32全自动微生物分析系统进行细菌鉴定及药敏试验.ESBLs检测采用NCCLS纸片确证试验,用酶提取三维试验检测AmpC酶.结果 在63株阴沟肠杆菌中,20.6%的菌株单产AmpC酶;38.1%的菌株单产ESBLs;9.5%的菌株同时产生AmpC酶和ESBLs;31.8%的菌株均不产AmpC酶和ESBLs.产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同时产生AmpC酶和ESBLs的菌株中尤为严重.结论 本地区阴沟肠杆菌产AmpC酶和ESBLs的流行处于一个相对较高的水平.产AmpC酶及ESBLs的细菌耐药性不完全相同,产酶类型不同,需选用不同类型的抗菌药物.
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医院感染脑膜炎败血性金黄杆菌的分布及耐药性分析
目的 了解我院脑膜炎败血性金黄杆菌的分布和耐药性.方法 统计分析我院近5年来分离的73株脑膜炎败血性金黄杆菌的耐药情况;用双纸片协同试验筛选金属β-内酰胺酶.结果 脑膜炎败血性金黄杆菌产金属β-内酰胺酶为37.0%,主要分布在重症监护(ICU)病房,哌拉西林/他唑巴坦、万古霉素和利福平耐药率较低,分别为45.2%、40.6%和28.5%.结论 脑膜炎败血性金黄杆菌表现为多重耐药,临床医师应根据药敏试验合理选择抗菌药物.
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铜绿假单胞菌β-内酰胺酶和膜孔蛋白基因研究
目的 了解多重耐药铜绿假单胞菌中β-内酰胺酶基因及膜孔蛋白基因存在状况,为临床合理使用抗菌药物提供理论依据.方法 收集本院临床分离的铜绿假单胞菌共30株,采用纸片扩散法进行药敏试验;用聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法,分析20种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、OXA-1群、OXA-2群、PXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、IMP、VIM、SPM、GIM、SIM、DHA)和膜孔蛋白基因(OprD2).结果 30株多重耐药铜绿假单胞菌中TEM基因阳性28株,阳性率93.3%.CARB基因阳性1株,阳性率3.3%;膜孔蛋白编码基因OprD2缺失29株,阳件率96.7%.末检m其他β-内酰胺酶基因.结论 烟台地区铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因(TEM)和膜孔蛋白编码基因OprDz缺失株检出率均在90%以上.
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鲍曼不动杆菌的高产AmpC酶、ESBLs及其耐药性分析
目的 了解鲍曼不动杆菌高产AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生情况及其耐药谱.方法 用K-B法进行药物敏感性检测,按表型确证试验检测ESBLs,按表型筛选法检测高产AmpC酶.结果 93株鲍曼不动杆菌主要分离自呼吸内科、神经外科,以痰或咽拭子、创面或伤口分泌物、尿3类标本多见,检测到15株(16.1%)产高产AmpC酶菌株,10株(10.8%)产ESBLs菌株,产酶株均呈多重耐药,对第3代头孢菌素、青霉素类及氨曲南耐药率明显高于非产酶菌株,未发现亚胺培南耐药株.结论 产高产AmpC酶、产ESBLs酶是鲍曼不动杆菌多重耐药的原因之一,应加强对产酶株的检测,以指导临床合理应用抗生素,防止其暴发流行.
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产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性监测分析
目的 监测并分析该医院2004年1～12月间产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性变化,为临床合理使用抗菌药物提供指导.方法 对2004年1～12月从该院临床送检的各类标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,采用纸片琼脂扩散法(K-B法)与Vitek-AMS的GNS卡Mic法相结合进行药敏试验,并严格按照CLSI/NCCLS(美国临床实验室标准化研究所/美国临床实验室标准化委员会)推荐的标准方法检测ESBLs菌株.结果 分离的498株大肠埃希菌中,产ESBLs的有196株,占39.4%;311株肺炎克雷伯菌中,产ESBLs的有91株,占29.3%.产ESBLs菌株对青霉素类、头孢菌素类、单环β-内酰胺类、氨基糖甙类、氟喹诺酮类等抗菌药物产生多重耐药性;ESBLs菌株的耐药性显著高于非ESBLs菌株(P＜0.05),但对亚胺培南都显示高度敏感性.结论 产ESBLs菌株的感染已成为临床抗感染治疗的难题,临床在抗感染治疗过程中,应严格掌握抗菌药物的应用指标,特别加强对产ESBLs菌株的耐药性监测,合理使用各种抗菌药物,以防止ESBLs菌株的增长、扩散与流行.
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产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析
目的了解临床分离菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率,分析其耐药表型,探讨其ESBLs基因类别.方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法,对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验,并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证.按照NCCLS文件标准,用Kirby-Bauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验.用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因.结果(1)大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46.7%和32.4%.(2)产ESBLs菌对青霉素类100%耐药;对第1、2代头孢菌素耐药率达85%～100%;对除头孢他定以外的第3代头孢菌素,产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80%以上,产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65%～75%以上;产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75%～85%;产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80%～90%、庆大霉素耐药率为50%～75%;产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性(80%～90%以上).(3)产ESBLs大肠埃希菌中,blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为93.9%、7.4%和53.4%.51.4%的菌株同时携带2种耐药基因,2.7%的菌株同时携带3种耐药基因.产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM-1、blasHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为50.0%、95.0%和20.0%.同时携带2种耐药基因的菌株占35.0%,同时携带3种耐药基因的菌株占15.0%.两种细菌中均未检出TOHO-1组基因.结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高,大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势.产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定,且多数菌株对青霉素类,第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药.大肠埃希菌中以TEM型和CTX-M型基因为主.肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主,同时存在TEM型和CTX-M型基因.
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阴沟肠杆菌β-内酰胺酶的检测与分型
目的：了解该地区临床细菌感染分离的标本中阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药性以及细菌产β-内酰胺酶的类型。方法在该地区医院通过细菌培养分离阴沟肠杆菌88例，用纸片扩散法进行药敏测定；通过改良三维实验检测临床耐药菌高产β-内酰胺酶及其分型。结果在研究菌株中，有17例菌株单产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），占19．32％。有20例菌株单产AmpC酶，占22．73％。有5例菌株同时产AmpC酶和ESBLs ，占5．68％。有47例菌株AmpC酶和ESBLs均不产生，占52．27％。结论该地区临床分离的阴沟肠杆菌存在普遍耐药，将近一半的耐药菌产AmpC酶或/和ESBLs ，尚有52．27％的菌产生其他β-内酰胺酶。
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高原地区常见肠杆菌耐药性的监测
目的 了解高原地区常见肠杆菌的耐药性以及大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株的耐药率.方法 收集高原地区住院患者临床标本中分离的293株肠杆菌菌株,采用纸片扩散法按美国临床实验室标准化协会(CLSI)2011年标准进行判读,质控菌为ATCC25922大肠埃希菌,ESBL阳性株为ATCC700603肺炎克雷伯菌.结果 293株肠杆菌中有137株产ESBL,其中,大肠埃希菌76株,肺炎克雷伯菌21株.大肠埃希菌的耐药率高于肺炎克雷伯菌,二者对阿莫西林/克拉维酸、庆大霉素、阿米卡星、复方黄胺甲噁唑耐药率的差异明显,而对亚胺培南、哌拉西林/三唑巴坦、强力霉素的耐药率无显著差异.ESBL菌株对头孢他啶的体外敏感率为14.90%.结论 肠杆菌产ESBL菌株以大肠埃希菌多见,其次为肺炎克雷伯菌.
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阴沟肠杆菌高产AmpC酶和ESBLs的检测及其多重耐药研究
目的 了解该地区阴沟肠杆菌高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行状况及其耐药机制.方法 收集该院2009年10月至2011年9月分离出的170株阴沟肠杆菌,通过改良三维实验检测AmpC酶和ESBLs,用K-B法进行药物敏感性试验.结果 170株阴沟肠杆菌中,产AmpC酶的检出率为21株(12.35％),产ESBLs为45株(26.47％),同时产2种酶的占19株(11.18％),2种酶均不产的占85株(50.00％).药敏结果显示阴沟肠杆菌对亚胺培南敏感性高,耐药率低于0％～7.1％,产酶菌株对其他抗菌药物的耐药率明显高于不产酶菌株.结论 高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶是阴沟肠杆菌的主要耐药机制,临床应合理使用抗菌药物,应加强对阴沟肠杆菌的耐药性监测,碳青霉烯类是治疗产AmpC酶或ESBLs酶阴沟肠杆菌严重感染的首选药物.
