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细菌耐药机制的研究进展
随着细菌耐药机制研究的深入,发现了许多新的耐药机制和耐药基因.细菌整合子系统可捕获外源基因并进行水平和垂直传播;超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、碳青霉烯酶又有多种耐药型别被发现;细菌主动外排泵出系统由耐药基因编码并完成调控;药物作用靶位改变的研究从耐甲氧西林葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌、大环内酯类耐药菌、喹诺酮类耐药菌等几方面都有新进展;带生物膜细菌比浮游菌更具有抗药性.细菌的耐药基因和耐药机制不是相互孤立的,一种细菌对一种抗菌药物的耐药水平可能为几种耐药机制或耐药基因共同作用的结果.
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产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌分子流行病学研究进展
产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是导致肺炎克雷伯菌耐药的主要原因.现对其基因分型、检测方法及产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌分子流行病学研究作一综述.
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超广谱β-内酰胺酶研究进展
超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是由质粒介导的能赋予细菌对多种β-内酰胺类抗生素耐药的一类酶,它主要由革兰阴性杆菌产生.自从ESBLs和产 ESBLs的细菌被报道以来,产ESBLs菌株在世界各地引起了广泛感染、传播和流行,由其产生的耐药问题已成为当前全球重要的耐药问题之一,受到国内外学者广泛关注.现就有关ESBLs的类型、耐药机制、检测方法以及防治等研究进展作一简要综述.
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儿童医院重症监护室分离肺炎克雷伯菌株的耐药性分析
目的 了解儿童医院重症监护室(ICU)分离肺炎克雷伯菌及耐药情况,为临床治疗及ICU感染的控制提供依据.方法 对儿童医院2007年4月至2008年5月临床检出菌,用法国生物梅里埃系统鉴定及药敏分析,并用双纸片法对ICU分离的肺炎克甫伯菌进行超广谱β-内酰胺酶(extend-spectrum β-lactamases,ESBLs)检测,同时对产ESBLs及非产ESBLs菌株进行耐药性分析.结果 ICU病房总共检出肺炎克雷伯菌108株,其中检出ESBLs阳性菌株73株,产酶率为67.59%.对12种抗生素进行药敏试验,耐药率低的是亚胺堵南,其次是环丙沙星.结论 ICU病房等免疫力低下的患者是肺炎克雷伯菌的易感人群,且以呼吸道感染为主.治疗感染产ESBLs肺炎克雷伯菌的有效药物为抗生素与酶抑制的复方制剂和亚胺培南.
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产ESBLs大肠埃希菌与非产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因检测
目的 了解大肠埃希菌(E.coli)耐消毒剂基因(qacE△1-sul1)在产ESBLs组及非产ESBLs E.coli组该基因携带情况.方法 PCR法对54株E.coli进行qacE△1-sul1基因的检测.结果 54株E.coli qacE△1-sul1基因扩增结果,38株阳性,其中产ESBLs组携带qaeE△1-sul1基因有20株,不产ESBLs组携带qacE△1-sul1基因有18株.结论 qacE△1-sul1基因在E.coli携带率较高,且产ESBLs组与非产ESBLs组E.coli qacE△1-sul1基因携带情况差异无统计学意义.
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2013年广州医科大学附属第一医院细菌耐药性监测
目的：了解该院2013年临床常见分离菌的分布及对各种常用抗菌药物的耐药情况。方法药敏试验采用自动化仪器 MIC 法及纸片扩散法，按 CLSI 2013年版标准判断结果，采用 WHONET 5．6软件进行数据分析。结果2013年该院临床分离菌共4168株，其中革兰阳性菌907株，占21．8％，革兰阴性菌3261株，占78．2％。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林株的检出率分别为48．7％和80．9％，未出现对万古霉素和利奈唑胺中介和耐药的葡萄球菌。未发现青霉素耐药肺炎链球菌株。出现了1株耐万古霉素屎肠球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产 ESBLs 株检出率分别为58．8％和35．8％。非发酵菌占总分离菌的37．5％，铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为19．3％、14．2％，鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为68．9％、67．0％。结论非发酵菌分离率上升，铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的耐药率较2012年有所下降。加强医院的细菌耐药性监测，对指导临床合理选择抗菌药物有重要的意义。
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2010~2012年安徽池州地区TEM、SHV、CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶分布特征
目的 研究池州地区分离的大肠埃希菌(E.coli)、肺炎克雷伯菌(K.pn)质粒编码的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分子流行病学特征.方法 收集2010年9月至2012年4月期间从临床标本中分离的菌株,采用法国生物梅里埃(Bio-Merieus)全自动细菌分析系统鉴定,大肠埃希菌294株,肺炎克雷伯菌178株,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定的ESBLs表型筛选和确证试验,确定该地区ESBLs的发生率,并用质粒提取试剂盒提取ESBLs阳性菌株的质粒DNA,通过特异性引物,聚合酶链反应(PCR)及核酸电泳分析上述菌株所携带的耐药基因并进行基因分型.结果 该地区17.3%的大肠埃希菌和19.7%肺炎克雷伯菌产ESBLs,其中大肠埃希菌耐药质粒编码TEM型、SHV型和CTX-M型基因的百分率分别为49.0%、37.2%、39.2%,肺炎克雷伯菌分别为48.6%、25.7%、42.8%.结论 该地区产ESBLs菌株已经达到一定的比例,并且出现有些菌株同时携带两种或两种以上应的耐药基因,临床上严格控制,合理使用抗菌药物已经刻不容缓.
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临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性分析
目的 分析该院产ESBLs大肠埃希菌(ECO)和肺炎克雷伯菌(KPN)临床分离株耐药性.方法 采用法国生物梅里埃公司的VITEK2-COMPACT全自动微生物分析仪对菌株进行鉴定和药物敏感性分析.结果 466株ECO临床分离菌株中,产ESBLs菌株297株,占63.73%;ESBLs阴性菌株169株,占36.27%.对3类以上抗菌药物耐药ECO357株,占76.61%,其中,产ESBLs菌株287株,占61.59%.329株KPN临床分离菌株中,产ESBLs菌株81株,占24.62%,ESBLs阴性菌株248株,占75.38%.对3类以上抗菌药物耐药KPN157株,占47.72%,其中,产ESBLs菌株79株,占总菌株数的24.01%,占产ESBLs菌株数的97.53%.已出现亚胺培南耐药ECO和KPN.对于临床常用的青霉素类、头孢菌素类、氟喹诺酮类、单酰胺类抗菌药物和部分氨基糖苷类,与ESBLs阴性菌株相比,产ESBLs菌株的MIC值显著升高,耐药率显著升高(P<0.05).而对头霉素类、含酶抑制剂的哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类药物的敏感性ESBLs阳性组与ESBLs阴性组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 该院产ESBLs菌株检出率高,对多种抗菌药物耐药,及时监测ESBLs菌株的发生率及耐药趋势,对于指导临床用药至关重要.
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痰热清注射液对产ESBLs肺炎克雷伯菌的体外抑制作用
目的 观察产ESBLs肺炎克雷伯菌在体外对中药痰热清注射液以及其与特治星(哌拉西林/他唑巴坦)联合应用的效果,为耐药菌株的治疗提供新的思路.方法 采用临床和实验室标准化协会(CLSI)推荐的肉汤稀释法,中药及中西药联合应用对产ESBLs肺炎克雷伯菌进行抑菌试验.结果 痰热清注射液对产ESBLs的肺炎克雷伯菌的小抑菌浓度(MIC)值为750tL/mL;特治星对产ESBLs的肺炎克雷伯菌的MIC值为28.125 μg/mL,当痰热清注射液与特治星同时作用于产ESBLs的肺炎克雷伯菌,痰热清注射液浓度为0.001～1.758 μL/mL时,可以使特治星的用量比单用时减少1～2倍.结论 中西药联合应用具有明显的抑菌效果,可以显著的减少抗菌药物的用量,这对于耐药菌的临床治疗以及减少耐药菌株的产生具有一定的意义.
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改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的诊断价值的系统评价
目的 系统评价改良Hodge试验(MHT)检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的准确性.方法 计算机检索PubMed、中国生物医学文献数据库等数据库(CBM),收集用MHT检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的实验研究,依据QUADAS质量评价标准评价纳入研究的质量后,进行Meta分析.结果 共纳入8个研究,合计1 254份无重复标本.Meta分析显示:MHT检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的合并敏感度、特异度、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比和SROC曲线下面积分别为0.96、0.94、10.01、0.06、168.98和0.989.结论 MHT对于产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的表型检测具有很高的敏感度、特异度和准确性.
关键词： β内酰胺酶类 聚合酶链反应 肠杆菌属 Meta分析(主题) -
ICU多药耐药鲍曼不动杆菌耐药监测分析
目的 分析重症监护病房(ICU)多药耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)耐药性及耐药基因.方法 对分离自ICU送检痰标本的5株鲍曼不动杆菌进行药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术进行耐药基因分析.结果 5株鲍曼不动杆菌对对β-内酰胺类、喹诺酮类药物耐药,均检出C、D类β-内酰胺酶基因ADC和OXA-23,及外膜蛋白CarO突变.结论应采取有效措施控制鲍曼不动杆菌的传播,加强耐药性监测,防止鲍曼不动杆菌院内扩散及耐药性变迁.
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2012年四川省肿瘤医院细菌耐药性监测
目的 了解2012年四川省肿瘤医院临床分离株对常用抗菌药物的耐药性.方法 采用MIC法对1 259株临床非重复分离株进行药敏试验.按CLSI 2009版判读结果及采用WHONET5.5软件进行统计分析.结果 1 259株临床分离株中革兰阳性球菌占23.9％(301/1 259),革兰阴性杆菌占76.1％(958/1 259).金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株占34.1％和78.4％.葡萄球菌中甲氧西林耐药株对β内酰胺类抗生素和其他测试药的耐药率明显高于甲氧西林敏感株,未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株.肠球菌属中屎肠球菌对多数测试药物的耐药率高于粪肠球菌,未发现万古霉素及利奈唑胺耐药株.革兰阴性肠杆菌中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检出率在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中分别是54.3％和14.3％.产ESBLs菌株对大多β内酰胺类抗生素高度耐药.亚安培南对肠杆菌科细菌抗菌活性强.结论 该院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及大肠埃希菌中产ESBLs菌株检出率不高,抗菌药物对革兰阴性肠杆菌科细菌的抗菌活性较非发酵革兰阴性杆菌好.
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多重耐药定植菌快速检测方法及结果分析
目的 开展多重耐药定植菌快速检测,为临床快速诊断多重耐药菌定植提供依据.方法 应用法国生物梅里埃公司提供的产色平板进行快速鉴定,根据细菌菌落颜色判定多重耐药细菌种类.结果 2012年2月14日至2012年8月13日共接收重症医学科采集的鼻前庭拭子标本452份、直肠拭子452份,452份鼻前庭拭子标本检测到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)10株,452份直肠拭子标本中检测到产ESBLs大肠埃希菌154株、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌12株、鲍曼不动杆菌1株、荧光假单胞菌1株.结论 该院ICU患者体内多重耐药菌定植菌以产ESBLs大肠埃希菌为主,鼻前庭MRSA定植率低.应引起临床医生的高度重视,加强多重耐药菌预防和控制工作,避免多重耐药菌在医院内暴发流行.
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铜绿假单胞菌的临床分布及β-内酰胺酶耐药表型研究
目的 了解医院分离铜绿假单胞菌院内感染临床分布、产酶情况及其耐药性.方法 采用手工法及法国生物梅里埃鉴定系统对菌种进行鉴定,用琼脂扩散法进行药敏试验,采用双纸片扩散法、三维试验、协同法分别对细菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、β-内酰胺酶(AmpC酶)、金属酶进行检测.结果 铜绿假单胞菌分布于呼吸科、ICU、外科,其中呼吸科和ICU检出率高,分别占总分离菌株的50.7%和18.7%; 临床标本以痰标本为主,分离率为80.6%,其次是脓汁和伤口分泌物;产AmpC酶71株,单产ESBLs酶27株,产金属酶16株,其中同时产ESBLs和AmpC酶菌株17株,产AmpC酶菌株检出率高.结论 多重耐药铜绿假单胞菌以产AmpC酶为主,临床治疗应合理用药,减少耐药菌株产生和控制医院感染.
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多重耐药肺炎克雷伯菌基因型和整合子的分析
目的 了解多重耐药肺炎克雷伯菌的基因型和整合子存在情况.方法 设计TEM、SHV和CTX-M型及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基凶特异性引物,并将聚合酶链反应(PCR)扩增获得β-内酰胺酶编码基因,分别克隆入pMD18-T载体后测定其核苷酸序列,分析其基因亚型.结果 该多重耐药株与TEM-1、SHV-12及CTX-M-3型编码基因序列的同源性为100%,Ⅰ类整合酶基因检测阳性,Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因检测阴性.结论 Ⅰ类整合子存在产ESBLs肺炎克雷伯菌中.
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某院2005～2007年临床常见病原菌的分布及耐药性分析
目的 了解临床常见病原菌的流行分布及耐药情况的变化趋势,为临床合理选用抗生素提供依据.方法 对2005～2007年住院患者送检培养阳性的标本进行细菌鉴定及药敏结果分析.结果 分离细菌2418株,革兰阴性杆菌1564株,占64.68%;革兰阳性球菌626株,占25.89%;真菌205株,占8.48%.葡萄球菌对万古霉素的耐药率为0.00%,对肠球菌的耐药率为2.38%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的发牛率为49.02%.肠杆菌对亚胺培南的耐药率为0.00%,大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)发生率分别为37.77%和30.30%.铜绿假单胞菌耐药情况严重,仪亚胺培南略低,为39.50%,其余抗牛索耐药毕均50.00%以上.结论 3年间临床常见病原菌以革兰阴性杆菌为主,铜绿假单胞菌比例大.细菌的耐药性增强,多重耐药菌增多,故应重视医院感染的控制,加强耐药监测,合理使用抗生素.
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142株大肠埃希菌耐药性分析
目的 监测142株临床分离大肠埃希菌对常用抗生素的耐药性,以指导临床合理选用抗大肠埃希菌药物.方法 采用美国DADE公司Walkaway-40自动细菌鉴定仪鉴定菌种及测定抗生素低抑菌浓度,利用WHONET5.0软件对结果进行统计和分析.结果 检出142株大肠埃希菌,大部分菌株耐青霉素类药物;对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟的耐药率较高,均超过50.0%;对亚胺培南耐药的菌株仅占0.7%;对阿米卡星的耐药率仅次于亚胺培南,为4.2%;对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为4.9%;对环丙沙星的耐药率较高,达69.0%.结论 在治疗大肠埃希菌引起的感染中,亚胺培南、阿米卡星以及哌拉西林/他唑巴坦的敏感性高.临床医生对抗生素的选用好依据药敏结果而定.
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阴沟肠杆菌染色质ampD基因的研究
目的 研究阴沟肠杆菌染色质ampD基因及其高概率突变位点.方法 从医院感染患者临床标本中分离阴沟肠杆菌,经头孢西丁初筛试验和头孢西丁三维试验确定是否产AmpC β-内酰胺酶及其产酶类型,抽提产酶菌株染色质DNA,PCR扩增ampD基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后与同种非突变标准菌株的ampD基因序列比对,并得到高概率突变位点.结果 大部分产酶阴沟肠杆菌含有ampD基因,其中18株产持续高产型酶菌株的染色质中均扩增出ampD基因;阴沟肠杆菌ampD基因上有62个突变率高于50%的位点.结论 产AmpC β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌染色质上均含有ampD基因;阴沟肠杆菌染色质ampD基因的高慨率突变位点可能成为致持续高产酶的关键位点.
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阴沟肠杆菌染色质ampD基因定点突变致AmpCβ-内酰胺酶由非持续高产型转变为持续高产型
目的 了解ampD基因特异突变对阴沟肠杆菌AmpCβ-内酰胺酶由非持续高产型转变为持续高产型的影响因素.方法 筛选染色质介导的持续高产型AmpCβ-内酰胺酶的阴沟肠杆菌,扩增其ampD基因并测序,确定其有义突变位点.采用定点突变的方法对野生型阴沟肠杆菌进行上述特异位点的突变,用头孢西丁三维试验测定突变前后菌株产酶类型的改变.结果 121株阴沟肠杆菌中15株为染色质介导的持续高产型,共筛选出8个有义突变化点.形成7株定点突变菌株.Ecl MA(274位插入A)、Ecl MC(327位缺失C)和Ecl MF(27位插入G)由非持续高产型转变为持续高产型,而Ecl MB(371化插入T)、Ecl MD(515位缺失c)、Ecl ME(324C→A)、Ecl MG(两点同时的突变,238C→A,302T→A)的产酶类型未发生变化.结论 能够引起产酶类型发生改变的ampD基因特异突变均为可造成大片段氨基酸改变的框移突变,并且该改变至少从124位之前的氨基酸开始.但并不排除部分持续高产型AmpCβ-内酰胺酶的产生存在其他调控机制.
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小儿肺炎克雷伯菌临床感染及耐药性分析
目的 分析住院患儿肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性,以指导临床合理用药.方法对2009年10月至2010年12月儿科送检标本分离出的肺炎克雷伯菌的临床分布特点及耐药情况进行总结分析.结果 共分离出肺炎克雷伯菌172株,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌41株,占23.84%;主要来源于咽拭子、血液和痰液等,分别占70.93%、9.88%和8.14%;肺炎克雷伯菌对亚胺培南、厄它培南、丁氨卡那霉素和哌拉西林/他唑巴坦敏感性高.结论小儿肺炎克雷伯菌主要引起下呼吸道感染;对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦及头孢类抗菌药物耐药率高,哌拉西林/他唑巴坦和亚胺培南可作为治疗儿童产ESBLs肺炎克雷伯菌感染或非产ESBLs菌严重感染的首选用药.
