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佛波醇酯对MES23.5细胞铁调节蛋白1表达的影响
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)激动剂佛波醇酯(PMA)对MES 23.5细胞中铁调节蛋白1(IRP1)的激活作用.方法 采用MTT法观察细胞的存活率,Western Blot法检测IRP1和铁转出蛋白(Fpn1)的表达变化.结果 0.01～2.00μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,细胞存活率无明显变化(F=3.050,P＞0.05).0.20μmol/L的PMA作用MES 23.5细胞24 h后,IRP1表达明显上调(t=4.501,P＜0.01),Fpn1表达明显下调(t=5.174,P＜0.01).结论 PMA在多巴胺能神经细胞系MES 23.5细胞中能明显激活IRP1.
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nNOS在6-OHDA诱导MES23.5细胞铁调节蛋白上调中作用
目的 观察经6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的MES23.5细胞神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的变化,以及其在6-OHDA诱导的铁调节蛋白(1PR1) mRNA上调中的作用.方法 应用10 μmol/L的6-OHDA处理MES23.5细胞24 h,制备帕金森病(PD)细胞模型,采用Western blots方法检测细胞中nNOS蛋白的表达,采用实时荧光定量PCR方法检测细胞中IRP1 mRNA的表达.结果 10 μmol/L 6-OHDA处理的MES23.5细胞nNOS蛋白的表达水平较对照组明显增高,差异有显著性(t=16.72,P＜0.001);6-OHDA处理组IRP1 mRNA的表达水平较对照组明显增高,差异有显著性(F=6.07,q =4.84,P＜0.0),而100 μmol/L的nNOS抑制剂盐酸亚精胺预处理组IRP1表达较6-OHDA组明显降低,差异有显著性(q=4.02,P＜0.05);盐酸亚精胺单独作用不影响IRP1 mRNA的表达.结论 nNOS在6OHDA制备的PD细胞模型中表达增高,且nNOS抑制剂盐酸亚精胺能明显抑制6-OHDA引起的IRP1上调.
