您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
DⅢ结构域文献资料
-
登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ区的表达及其免疫反应性鉴定
目的 在大肠埃希菌中表达登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ结构域,并进行免疫反应性鉴定.方法 用C6/36细胞培养病毒,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增获得目的基因片段D2E-DⅢ.双酶切D2E-DⅢ和表达质粒pET-30a(+),经回收纯化后连接构建重组质粒pET30a-D2E-DⅢ.筛选阳性菌落,提取质粒转化BL21 (DE3)感受态细胞,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析和Western blot鉴定.结果 RT-PCR扩增得到约300 bp的目的基因片段D2E-DⅢ,双酶切鉴定重组质粒pET30a-D2E-DⅢ位置正确,经测序分析表明插入序列及开放读码框正确.经15％分离胶SDS-PAGE电泳分析,重组菌在相对分子质量为10×10 3附近有明显的诱导表达带,其大小与预测值一致；Western blot结果显示重组蛋白与确诊登革热Ⅱ型阳性血清存在特异性反应.结论 成功地在大肠埃希菌中表达登革Ⅱ型病毒E蛋白DⅢ区,并进行免疫反应性鉴定,结果显示其具有良好的免疫活性.
