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晚期糖基化终产物对体外培养人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响
目的 建立晚期糖基化终产物(AGEs)诱导体外培养人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(Epithelial-to-Mesenchymal Transition,EMT)的模型.方法 体外培养的人腹膜间皮细胞经含40mM、80mM AGEs的M199培养基分别培养48、72小时;以正常M199培养基和含80mM BSA的M199培养基为对照.采用相差显微镜观察细胞形态学改变,运用实时荧光定量PCR法检测mRNA的表达情况;运用Western印迹法检测蛋白的表达情况.结果 (1)AGEs刺激后人腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞;(2)AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞胶原蛋白I(CollagenI)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和α-SMA蛋白表达水平显著增加(P<0.05);(3)AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞E-钙粘蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05).结论 AGEs能上调体外培养人腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT.
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流式细胞术观察晚期糖基化终产物导致的血管内皮细胞氧化应激
目的:研究晚期糖基化终产物(AGE)修饰蛋白引起内皮细胞氧化应激的作用.方法:内皮细胞来自培养的人脐静咏内皮细胞(HUVEC).将内皮细胞与不同浓度的AGE修饰人血清白蛋白(AGE-HSA)共同培养,以二氢二氯荧光素标记细胞,流式细胞仪检测细胞的荧光强度.结果:AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式刺激内皮细胞氧化水平增高,此作用可被抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)抑制.结论:AGE修饰蛋白能够引起血管内皮细胞的细胞内氧化水平增高,这一作用可能参与了AGE相关性疾病血管病变的发生、发展.
