首页 > 文献资料
-
厄贝沙坦灌服对早期糖尿病肾病大鼠血清、肾组织AGEs表达水平及肾功能的影响
目的 观察厄贝沙坦对早期糖尿病肾病(DN)大鼠血清、肾组织终末糖基化产物(AGEs)和肾功能的影响,并探讨其意义.方法 应用链脲佐菌素(STZ)腹腔注射法建立大鼠DN模型,将其随机分为模型组和厄贝沙坦组各16只,厄贝沙坦组预厄贝沙坦50 mg/(kg·d)灌服,连续8周.另设正常对照组(9只大鼠).8周后收集各组大鼠24h尿液,测定24h尿量、尿蛋白.大鼠麻醉后股静脉采血,分离血清,测定糖化血红蛋白(GHb)、血尿素氮(BUN)及内生肌酐清除率(Ccr).用考马斯亮蓝法检测血清及肾组织AGEs.结果 模型组24h尿蛋白定量、GHb、BUN、Ccr均明显高于正常对照组(P均＜0.01),厄贝沙坦组24h尿蛋白定量、GHb、BUN、Ccr均明显低于模型组(P均＜0.05).模型组大鼠血清及肾组织AGEs均明显高于正常对照组(P均＜0.01),厄贝沙坦组大鼠血清及肾组织AGEs均明显低于模型组(P均＜0.05).模型组和厄贝沙坦组大鼠肾组织AGEs与24h尿蛋白定量、GHb、BNU呈正相关(r分别为0.781、0.753、0.820,P均＜0.01),与Ccr呈负相关(r为-0.665,P＜0.01).结论 厄贝沙坦可以减少AGEs的生成,抑制AGEs在肾脏的聚集,改善肾功能,延缓DN的发展.
-
高通量血液透析对慢性肾衰竭血清晚期糖基化终产物的影响
目的:探讨慢性肾功能衰竭患者血清晚期糖基化终产物水平的变化及高通量血透对其清除效果.方法:应用竞争性ELISA法检测慢性肾功能衰竭患者(非血液透析组及血液透析组)血清晚期糖基化终产物水平. 结果: 慢性肾功能衰竭患者无论血液透析与否,血清晚期糖基化终产物均明显高于健康组(P均＜0.01),非血液透析与血液透析组晚期糖基化终产物水平差异无显著性(P＞0.05),晚期糖基化终产物水平与血Cr呈明显正相关(r=0.5974,P＜0.01),与血糖无相关性;常规血液透析组,透析前后血清晚期糖基化终产物水平差异无统计学意义(P＞0.05),而高通量血液透析组透析后血清晚期糖基化终产物水平明显降低(P＜0.01).结论: 慢性肾功能衰竭时,因肾功能受损致晚期糖基化终产物清除障碍,是血清晚期糖基化终产物水平升高的主要原因,高通量血液透析可以有效清除血清晚期糖基化终产物.
-
RAGE及其基因多态性与2型糖尿病微血管病变相关关系的研究进展
微血管病变是2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus, T2DM)的主要并发症,其发病机制和治疗方案是医学研究的难点和热点。大量科学实验证实,长期高血糖状态可激活晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End Products,AGEs)及其受体(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE),启动 AGEs-RAGE 信号传导通路,终导致全身微血管不可逆损害及相关脏器功能的丧失。目前研究已初步证实 RAGE基因序列的变异可改变 AGEs-RAGE的相互作用而影响 T2DM微血管并发症的发生[1]；调控 RAGE对T2DM微血管并发症的防治有重要作用[2]。但 RAGE在T2DM微血管并发症发病过程中的具体机制仍在进一步研究中。本文对 RAGE及其基因多态性与 T2DM微血管并发症的相关性研究作如下综述。
-
有氧运动对2型糖尿病大鼠血浆晚期糖基化终产物的影响
目的 探讨有氧运动对2型糖尿病大鼠血浆晚期糖基化终产物(AGEs)的影响.方法 将52只8周龄健康雄性SD大鼠分为正常对照组10只和2型糖尿病造模组42只.造模组大鼠用高糖、高脂和高能量饲料喂养4周后,予以一次性腹腔注射链脲佐菌素(30 ms/kg体重),以建立2型糖尿病大鼠模型.取30只成功造模的2型糖尿病大鼠,分为糖尿病对照组、小强度运动组和中强度运动组,每组10只.小、中强度运动组实施运动方案.结果 与正常对照组比较,糖尿病对照组、中强度运动组AGEs水平显著升高(P<0.01);与糖尿病对照组比较,小强度运动组AGEs水平显著降低(P<0.05).结论 有氧运动可降低2型糖尿病大鼠血浆AGEs水平,其作用与血糖降低和运动强度有关.
-
国产新型血液灌流器清除蛋白结合类毒素的临床疗效研究
目的 研究国产新型血液灌流器MG150对蛋白结合类毒素晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)和硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)的清除效果.方法 选择上海长征医院和佛山市第一人民医院长期血液透析(hemodialysis,HD)患者共88例,根据南方医科大学统计研究室提供随机化数据表分配,使用二阶段交叉实验对照研究方法,选用广泛使用的健帆HA130灌流器作为对照,A组患者先使用HA130血液灌流(hemoperfusion,HP)+HD串联治疗一次,中间经过洗脱期1周,再使用MG150 HP串联治疗一次;B组患者先使用MG150 HP+HD串联治疗一次,洗脱期后1周再使用HA130 HP+HD串联治疗.分别在2次治疗前后检测血清AGEs和IS浓度,并记录不良事件发生情况,观察比较新型血液灌流器对蛋白结合类毒素的清除效果及安全性.结果①2个医院各入组44例患者;A组(n=44)和B组(n=44)两组患者治疗前除了AGEs[(285.77±107.03) ng/L比(456.89±129.10) ng/L)]和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)[(2.67±2.58) mg/L比(6.38±8.83) mg/L)]差异有统计学意义(P均<0.01),其他基线资料如性别、年龄、体质量、收缩压、舒张压、尿素清除指数(Kt/V)、β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、IS、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血白蛋白(albumin,Alb)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的比较差异均无统计学意义.②MG150和HA130 HP联合HD治疗2 h后血AGEs下降率分别26.0%为4.7%,差异有统计学意义(F=14.323,P<0.01);IS的下降率分别为51.7%和9.6%,差异有统计学意义(F=117.247,P<0.01);β2-MG下降率分别14.9%、2.7%,差异有统计学意义(F=45.190,P<0.01).③共7例发生轻度不良事件,在2种灌流器治疗过程中发生的概率差异无统计学意义.结论 使用国产新型血液灌流器MG150 HP联合HD治疗能够有效清除蛋白结合类毒素,疗效安全确切,值得临床推广应用.
-
维持性血液透析患者透析相关性淀粉样变的相关危险因素分析
目的 分析维持性血液透析患者晚期糖基化终产物、自由基代谢与透析相关性淀粉样变(dialysis-relatedamyloidosis,DRA)的相关性.方法 将46例肩关节B超检查有DRA的患者按透析时间分为短期透析组(16例)和长期透析组(30例),另选择10名健康志愿者为对照组.观察所有患者血清晚期糖基化终产物(the advanced glycation end prodvcts,AGE)及生物学指标Nε-羧甲基赖氨酸(Nε-carboxymethyllysin,CML)的变化,自由基代谢相关的超氧化物歧化酶(superoxide dismu-tas,SOD)、脂质过氧化物(peroxidativelipi,LPO)值的变化,与β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的相关性.结果 DRA患者AGE、CML、LPO、β2-MG、CRP水平较正常对照组明显提高,SOD水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).随着透析龄的延长,肩袖周围增强回声阳性率明显增加,DRA病变程度加重.长期透析组与短期透析组比较,AGE、CML、LPO、β2-MG、CRP升高的水平和SOD水平降低幅度明显增大,2组相比有统计学差异(P＜0.05).透析龄与肩关节淀粉样变程度正相关,与AGE、CML、LPO、β2-MG、CRP水平呈正相关(P＜0.05),与SOD水平呈负相关(P＜0.05).提示维持性血液透析患者AGE、β2-MG、CML水平增高可能是DRA形成早期病变的物质基础,氧化应激反应增强、慢性炎症反应增强可能参与DRA早期形成过程.结论 预防DRA或延缓其发展应从降低循环β2-MG水平和抑制关节炎症入手,抑制β2-MG的AGE修饰,清除AGE修饰蛋白或阻断AGE-β2-MG与细胞表面AGE受体的相互作用,可能是预防或延缓DRA发展的途径.
-
二甲双胍对骨质疏松大鼠晚期糖基化终产物影响的研究
目的:探讨通过应用二甲双胍干预双侧卵巢摘除大鼠血清中晚期糖基化终产物变化从而调控骨代谢的可行性.方法:使用SD雌鼠通过行双侧卵巢摘除术或假手术建立停经后骨质疏松症模型(OVX组)及对照组模型(Sham组),3月后给予不同剂量二甲双胍灌胃,分为4组,分别是Sham组,OVX组,OVX+50 mg/kg/d二甲双胍组,OVX+100 mg/kg/d二甲双胍组,3月后处死大鼠,应用组织学方法检测不同组别大鼠骨质差异,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较晚期糖基化终产物(AGEs)在血清中的表达差异.结果:与Sham组相比,OVX组大鼠的胫骨骨质明显呈现疏松多孔样,血清中AGEs含量明显升高;灌胃二甲双胍后,胫骨骨质量改善,骨小梁分布较OVX组密集,同时血清中AGEs含量较OVX组显著降低,但尚未达到Sham组水平,而OVX+ 50 mg/kg/d二甲双胍组与OVX+100mg/kg/d二甲双胍组大鼠血清中AGEs含量无明显差异.结论:二甲双胍可能通过降低绝经后骨质疏松大鼠血清中的AGEs含量进而改善骨代谢.
-
晚期糖基化终产物对肾小球系膜细胞表达Fractalkine的诱导作用
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGE)对肾小球系膜细胞表达Fractalkine(Fkn)的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验设AGE组:加入AGE-BSA(100 mg·L-1);对照组:加入牛血清清蛋白(BSA)(100mg·L-1);PDTC组:先加入PDTC100 μmol·L-1孵育1 h,再加入AGE-BSA(100mg·L-1);AGE抗体组:先加入抗AGE抗体(100mg·L-1 IgG)孵育2 h后,再加入AGE-BSA(100mg·L-1).培养所需时间收集细胞,检测Fkn mRNA及蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NF-κB活化.结果 AGE诱导体外培养的大鼠系膜细胞大量表达Fkn-mRNA及蛋白,PDTC和AGE抗体显著抑制AGE诱导系膜细胞表达Fkn mRNA及蛋白.经AGE刺激后NF-κB/P65迅速核转位,30 min达高峰.结论 AGE通过活化NF-κB诱导肾小球系膜细胞表达Fkn.
关键词： 晚期糖基化终产物 肾小球系膜细胞 糖尿病肾病 Fractalkine -
鸡矢藤提取物对STZ致糖尿病小鼠肾脏的氧化应激作用和晚期糖基化终产物的影响
目的:研究鸡矢藤提取物(EPS)对链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病肾病小鼠的疗效观察.方法:雄性昆明小鼠适应性喂养后尾静脉注射150 mg·kg-1 STZ,72 h后检测小鼠空腹血糖(FBG)以建立糖尿病模型.糖尿病小鼠随机分为5组:模型对照组,二甲双胍阳性对照组,EPS低、中、高剂量组(2.5,5,10 g·kg-1).另设空白对照组.各组小鼠连续灌胃给药4周,空白和模型对照组给予等量生理盐水.末次给药后测定小鼠FBG,收集尿液,检测24 h尿蛋白含量;测定血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和总胆固醇(TC)的含量;检测肾脏组织中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及晚期糖基化终产物(AGE)水平;HE染色法观察肾脏病理学变化.结果:与模型对照组比较,EPS能显著降低糖尿病小鼠的FBG,并明显降低血清生化指标,降低肾脏组织中MDA、AGE含量和增强SOD、GSH-Px活性,改善肾小管空泡变性和肾小球萎缩.结论:鸡矢藤提取物能有效降低糖尿病肾病小鼠血糖,改善肾功能状态,对STZ所致糖尿病小鼠的肾脏保护作用可能与其能降低AGE的积聚、改善组织的氧化应激状态有关.
-
PPARα对糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞的作用
目的:观察氯贝特对糖基化终产物(AGEs)刺激下的离体大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用以及对过氧化物酶体增牛物激活受体α(PPAR α)基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPAR α在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用.方法:体外培养大鼠VSMCs,应用不同浓度的AGEs分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较,采用MTT法观察不同浓度的AGEs对VSMCs增殖的影响及氯贝特与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用,并用流式细胞仪检测细胞周期.RT-PCR检测PPAR α的mRNA表达,Western blotting分析PPAR α的蛋白表达.结果:AGEs增加DNA的合成促进平滑肌细胞的增殖,氯贝特激活PPAR α,使PPAR α的表达量增加,抑制AGEs诱导的细胞增殖和DNA合成.结论:AGEs诱导平滑肌细胞增殖与平滑肌细胞PPAR α表达相关,PPAR α表达下调可能是产生糖尿病动脉粥样硬化的重要原因之一.
-
罗格列酮对动脉粥样硬化大鼠血清晚期糖基化终产物的影响及可能机制
目的:观察晚期糖基化终产物在动脉粥样硬化大鼠血清中的水平,以及应用胰岛素增敏剂罗格列酮对其的影响,并探讨其可能机制.方法:通过一次性维生素D3注射+高脂喂养法建立动脉粥样硬化模型.动物分组:A组:动脉粥样硬化模型组,B组:罗格列酮治疗组,C组:正常对照组,24周后处死全部大鼠,测定大鼠血清晚期糖基化终产物(AGE)、丙二醛(MDA)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平.计算血浆致动脉硬化指数(AIP).取主动脉全段,HE染色分析大鼠主动脉病变,PHOTOSHOP系统测定粥样斑块面积占内膜面积的百分比. 免疫组化法观察主动脉丙二醛修饰低密度脂蛋白(MDA-LDL)的沉积.结果:大鼠血清AGE水平A组＞B组＞C组(P均＜0.01).MDA血清水平亦有A组＞B组＞C组(P值分别＜0.05和0.01).AIP数值A组＞B组＞C组(P均＜0.01).TC、LDL血清水平A组和B组均高于C组(P均＜0.01),A组和B组之间无统计学差异.除C组外,其他两组大鼠主动脉均见粥样斑块形成,A组动脉粥样斑块面积/内膜面积百分比(38%±6%)高于B组(26%±8%)(P＜0.05),A组粥样斑块病变部位MDA-PLDL的沉积面积较B组大(P＜0.01,AGE与AIP值呈正相关(r=0.698,P＜0.01),AGE与血清MDA呈正相关(r=0.514 ,P＜0.05).结论:血清AGE增高是动脉粥样硬化的危险因素之一.应用罗格列酮可以降低AGE水平,改善动脉损伤.AGE导致动脉粥样硬化的机制可能与增加氧化应激和增高血浆致动脉硬化指数有关.
-
丹参酮ⅡA磺酸钠对腹膜透析大鼠氧化应激状态影响观察
目的:探讨在腹膜透析液中添加丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对大鼠腹膜的局部保护作用及对其全身氧化应激状态的影响.方法:将40只SD雄性大鼠(180～200g)随机分为四组,每组10只.A组为正常对照组,每日腹腔注射生理盐水20mL;B组为腹膜透析液组,每日腹腔注射4.25％腹膜透析液20mL;C、D组为丹参酮ⅡA磺酸钠低、高浓度组,每日分别腹腔注射含丹参酮ⅡA磺酸钠50mg·L-1和100mg·L1的4.25％腹膜透析液20mL,于实验第30天于腹腔注射药液2h后杀检动物,取腹主动脉血2mL和透出液1mL,测定并比较四组大鼠血清及透出液的晚期糖基化终产物(AGEs)水平和氧化应激指标:谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及总超氧化物岐化酶(T-SOD)活性.结果:与A组正常对照组比较,B组腹膜透析液组大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平显著降低(P＜0.05),MDA、AGEs水平显著升高(P＜0.05).与B组腹膜透析液组比较,透析液添加丹参酮ⅡA磺酸钠治疗组(C组、D组)大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平显著升高(P＜0.05),MDA、AGEs水平显著降低(P＜0.05).使用丹参酮ⅡA磺酸钠组大鼠血清及透出液GSH、T-SOD水平与丹参酮ⅡA磺酸钠浓度呈正相关,MDA、AGEs水平与丹参酮ⅡA磺酸钠浓度呈负相关.结论:高浓度葡萄糖透析液可引发透析大鼠腹腔局部及全身高氧化应激状态,并可能导致透析大鼠腹膜纤维化.在透析液中加入丹参酮ⅡA磺酸钠对体外腹膜透析液中糖基化终产物的形成和腹膜纤维化有明显抑制作用,且丹参酮ⅡA磺酸钠的此种抑制作用呈现剂量依赖性,提示丹参酮ⅡA磺酸钠具有潜在的延缓腹膜透析伴发性腹膜纤维化的作用.
关键词： 腹膜透析 丹参酮ⅡA磺酸钠(丹参酮ⅡA) 氧化应激 晚期糖基化终产物 腹膜纤维化 -
表没食子儿茶素没食子酸酯对晚期糖基化终产物诱导HUVEC凋亡的影响及可能的作用机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对晚期糖基化终产物(AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及可能的作用机制.方法 用200 mg/L AGE培养HUVEC24h;以50、100 μmol/L EGCG预处理8h后再用200 mg/L AGE作用于HUVEC;对照组用200 mg/L牛血清白蛋白作用于HUVEC24h.噻唑蓝比色法测定细胞活性,Hoechst-33258染色观察HUVEC形态变化,Annexin V-FITC/PI双标记法流式细胞仪检测细胞凋亡,活性氧检测以反映HUVEC内氧化应激水平.结果 与对照组相比,AGE组HUVEC发生染色质固缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学改变,细胞活性降低(P＜0.01),细胞凋亡率升高(P＜0.01),细胞内活性氧水平增加(P＜0.01).EGCG预处理后能够使细胞凋亡的形态学改变明显减轻,细胞活性升高(P＜0.01),细胞凋亡率减低(P＜0.01),活性氧水平降低(P ＜0.01);EGCG作用呈浓度依赖性.结论 EGCG呈浓度依赖性抑制AGE诱导的HUVEC凋亡,这一作用可能通过抑制HUVEC内氧化应激反应而实现.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 晚期糖基化终产物 人脐静脉内皮细胞 细胞凋亡 氧化应激 -
晚期糖基化终产物通过氧化应激引起人骨髓间充质干细胞凋亡
目的 观察不同剂量晚期糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)对体外分离培养的人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及氧化应激的影响,为临床上提高干细胞移植治疗糖尿病心肌病后供体干细胞的存活率提供新的依据.方法 采用全骨髓法从人的骨髓标本中分离培养骨髓间充质干细胞,以含10%FCS的L-DMEM 培养细胞,0.25%的胰酶消化后按1:2 比例传代接种培养,对第3代细胞应用流式细胞仪检测细胞表面标志CD44、CD105和CD34.在骨髓间充质干细胞中加入不同浓度的AGE-BSA,作用24 h后加入CCK-8溶液,37℃5%CO2培养箱培养1 h,用酶标仪在450 nm处测定吸光度值.采用Annexin V/PI 双染法进行染色,避光作用20 min后,将细胞置于流式细胞仪上检测细胞凋亡率.同时对细胞内活性氧水平进行测定,并且测定细胞内的丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性.结果 传代后的骨髓间充质干细胞呈鱼群样或漩涡状排列,细胞为长梭形,贴壁紧密,形态较为一致.细胞表面标志CD105(间充质干细胞相对特异性标志)及CD44(黏附分子,基质细胞表达)呈阳性表达,阳性率分别为98.9%、97.8%;CD34(造血干细胞/祖细胞及内皮细胞阳性)呈阴性表达,表达百分率为0.8%.与对照组相比,20、50、100和200 mg/L AGE-BSA均不同程度地抑制骨髓间充质干细胞的增殖,促进其凋亡,随着作用浓度的增加,细胞内活性氧含量、丙二醛含量明显增加,而细胞匀浆中超氧化物歧化酶的活性却受到了抑制,具有剂量依赖效应.结论 晚期糖基化终产物通过促进骨髓间充质干细胞内活性氧生成、减少抗氧化酶生成,增强氧化应激,破坏细胞内环境稳定性,从而抑制骨髓间充质干细胞增殖,促进细胞凋亡.
-
晚期糖基化终产物对人内皮细胞表达MCP-1和VCAM-1的影响及阿托伐他汀的干预
目的 观察晚期糖基化终产物对体外培养人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1的影响及阿托伐他汀的干预作用,探讨晚期糖基化终产物诱发动脉粥样硬化形成的机制和阿托伐他汀治疗的机制.方法 胶原酶消化法分离获取人脐静脉内皮细胞;倒置相差显微镜形态观察法及免疫细胞化学染色法鉴定人脐静脉内皮细胞;逆转录聚合酶链反应法对单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及晚期糖基化终产物受体基因表达进行分析;活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧产生量,倒置荧光显微镜下观察细胞内活性氧荧光强度.结果 倒置相差显微镜下可见培养的细胞呈卵圆形或多角形,典型的铺路石样排列,经CD31、CD34染色,细胞浆内有棕黄色颗粒沉着(CD31、CD34 阳性).与空白对照组相比,晚期糖基化终产物(10-4～10-1 g/L)呈浓度依赖性增强人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1基因表达,10-4 g/L晚期糖基化终产物组人内皮细胞单核细胞趋化蛋1和血管细胞黏附分子1基因表达水平开始显著增高(0.26±0.02比0.17±0.04;0.22±0.02比0.08±0.01,P＜0.01);与晚期糖基化终产物组相比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1基因的表达,1 μmol/L阿托伐他汀组人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1基因表达水平开始显著降低(0.63±0.11比1.03±0.07;0.21±0.03比0.83±0.10,P＜0.01);晚期糖基化终产物组人内皮细胞内活性氧荧光强度显著增强,阿托伐他汀干预后细胞内活性氧荧光强度明显降低,且0.1 μmol/L阿托伐他汀组人内皮细胞晚期糖基化终产物受体基因表达水平显著降低(0.63±0.05比1.19±0.12,P＜0.01).结论 晚期糖基化终产物显著增强人内皮细胞单核细胞趋化蛋白1和血管细胞黏附分子1表达;阿托伐他汀可能通过下调晚期糖基化终产物受体表达来抑制晚期糖基化终产物诱导的人内皮氧化应激和炎性反应.
-
联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附因子1 mRNA表达及机制
目的 探讨联合运用晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响和氧化应激的机制.方法 酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应检测血管细胞黏附分子1基因的表达.活性氧检测试剂盒检测细胞内氧自由基的荧光信号强度.结果 晚期糖基化终产物(10-4～10-1g/L)和同型半胱氨酸(1.35×10-3～1.35 g/L)组呈浓度依赖性诱导人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1的表达,晚期糖基化终产物(10-4g/L)和同型半胱氨酸(1.35 × 10-3 g/L)联合作用能进一步增加人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1基因的表达(1.09±0.18),与单独晚期糖基化终产物(0.14±0.07)和同型半胱氨酸组(0.18±0.06)相比其表迭分别增加了7.78倍和6.05倍(P<0.01);还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶特异性抑制剂二亚苯基碘能显著抑制晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合诱导的血管细胞黏附分子1基因的表达(0.20±0.09比1.19±0.23,P<0.01);晚期糖基化终产物组和同型半胱氨酸组均能增加人脐静脉内皮细胞内氧自由基的荧光信号强度,晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸联合作用时,细胞内氧自由基的荧光信号强度水平进一步升高,且二亚苯基碘能明显抑制上述效应.结论 晚期糖基化终产物和同型半胱氨酸能增加细胞内氧自由基的荧光信号水平,使血管细胞黏附分子1基因的表达上调,且两者存在协同效应;氧自由基水平的增加是导致血管细胞黏附分子1基因表达升高的重要因素;血管细胞黏附分子1可能是通过还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶途径实现的.
-
晚期糖基化终产物诱导ECV304细胞株氧化增强的可能机制
目的 探讨晚期糖基化终产物诱导细胞株ECV304氧化增强的机制.方法 取ECV304细胞培养,与不同浓度的晚期糖基化终产物一人血清白蛋白共孵育,或分别经NADPH氧化酶抑制剂Apocynin或蛋白激酶C抑制剂GF109203或酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein预孵育0.5 h后,再与晚期糖基化终产物-人血清白蛋白共孵育,1h后收集细胞.用细胞色素C法检测O2-·,ThioGlo-1试剂检测还原型谷胱甘肽.结果 12.5 mg/L、50 mg/L和200mg/L晚期糖基化终产物-人血清白蛋白可导致ECV304细胞内O2-·从1.37±0.67 nmol/(107·h)增加到3.44±0.40、10.67±0.67和10.93±0.67 mmol/(107·h),使还原型谷胱甘肽从9.54±0.41 mmol/106降低到9.02±0.21、8.41±0.34和8.02±0.18 nmol/106,两者均呈剂量依赖性.Apocynin、GF109203及Genistein均可抑制O2-·的增加及还原型谷胱甘肽的降低.结论 晚期糖基化终产物-人血清白蛋白可通过蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶途径激活NADPH氧化酶,引起ECV304细胞内O2-·产生及还原型谷胱甘肽降低,导致细胞内氧化增强.
-
晚期糖基化终产物诱导内皮细胞黏附连接改变及其机制
目的 观察不同浓度和时间修饰的糖基化人血清白蛋白作用下,人脐静脉内皮细胞内黏附连接蛋白钙黏着蛋白的形态结构变化,并初步探讨其机制.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞,分别用不同浓度和时间修饰的糖基化人血清白蛋白处理,用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察钙黏着蛋白在内皮细胞的形态和分布变化.分别用可溶性的修饰的糖基化人血清白蛋白受体的抗体、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂或转染重组腺病毒突变体转染预处理后再观察晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白对内皮细胞形态的影响.结果 修饰的糖基化人血清白蛋白以时间和剂量依赖方式引起内皮细胞黏附连接钙黏着蛋白形态结构的改变;丝裂原活化蛋白激酶通路抑制剂(SB203580、PD98059、SP600125)和Rho激酶抑制剂Y27632均可减轻晚期糖基化终产物对钙黏蛋白的影响;转染显性失活的细胞外信号调节激酶上游激酶加MEK1和p38丝裂原活化蛋白激酶上游激酶MKK6b及p38显性失活的p38a和p38β重组腺病毒突变体,均可减轻晚期糖基化终产物对钙黏蛋白形态结构的影响,而转染组成性激活的加MEK1和MKK6b的重组腺病毒本身即可引起钙黏蛋白形态结构的变化.结论 晚期糖基化终产物刺激可以引起钙黏蛋白分布和形态的变化,这一作用可能是丝裂原活化蛋白激酶通路细胞外信号调节激酶、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路和c-jun氨基末端激酶(JNK),应激激活的蛋白激酶(SAPK)介导的,Rho激酶可能参与此过程.
关键词： 病理学与病理生理学 钙黏蛋白 晚期糖基化终产物 通透性 丝裂原活化的蛋白激酶 -
体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响
目的 观察体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响.方法 人血清白蛋白与葡萄糖共同孵育90 d后,行Bradford检测法蛋白定量和荧光值测定.从正常成人外周血中分离提取单个核细胞,培养7 d后,流式细胞仪鉴定细胞表型,分别加入浓度为2 mg/L、20 mg/L和200 mg/L的晚期糖基化终产物并设置对照组,干预不同的时间(0 h、24 h、48 h和72 h),200倍光学显微镜下随机取10个视野计数.结果 该方法制备的晚期糖基化终产物具有荧光性.细胞培养7 d,CD34/CD133/KDR单克隆抗体流式细胞仪鉴定细胞,结果发现表达KDR达78.60%±2.20%、CD34为8.60%±2.00%和CD133 2.80%±0.60%,提示大部分细胞为内皮祖细胞.以不同时间(0 h、24 h、48 h和72 h)和浓度(2 mg/L、20 mg/L和200 mg/L)晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞生长,对比0 h组每个视野下细胞数量(186.0±6.7),干预24 h细胞数量减少(146.67±4.98),72 h降至低(73.67±3.76)(P<0.001),呈现明显的时间效应(r=0.9658, P<0.01);终浓度为2 mg/L或20 mg/L晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞72 h后,与同时培养72 h的对照组无显著差异(P>0.05),但随着浓度加大,浓度效明显(r=0.9988, P<0.01).结论 此方法制备的晚期糖基化终产物符合文献所述的特性,晚期糖基化终产物能抑制内皮祖细胞生长,具有时间效应和浓度效应.
-
晚期糖基化终产物诱导血管内皮细胞环氧合酶2表达
目的探讨晚期糖基化终产物对人血管内皮细胞环氧合酶2表达的影响.方法取人脐静脉内皮细胞ECV304与人血清白蛋白修饰的晚期糖基化终产物体外共同培养,然后用Western blot检测环氧合酶2的表达水平.结果内皮细胞环氧合酶2基础表达水平极低,人血清白蛋白修饰的晚期糖基化终产物可诱导环氧合酶2的表达,呈时间与剂量依赖关系;抑制核因子κB的活性可抑制环氧合酶2的表达.结论人血清白蛋白修饰的晚期糖基化终产物可通过激活核因子κB,而引起环氧合酶2的表达.这一作用机制可能参与血管损伤反应.
