晚期糖基化终产物修饰的低密度脂蛋白下调小鼠骨髓来源肥大细胞白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α释放

目的 观察晚期糖基化终产物(AGE)修饰的低密度脂蛋白(LDL,AGE LDL)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠骨髓来源肥大细胞(mBMMCs)释放IL-6和TNF-α的影响,并探讨血红素加氧酶(HO)-1对mBMMCs释放IL-6和TNF-α的影响.方法 从C57BL/6小鼠骨髓分离、培养mBMMCs,经鉴定后,以2×106/孔接种于12孔细胞培养板中,分别加入不含糖的反应液孵育LDL(n-LDL) 50 μg/mL(n-LDL组)、AGE-LDL50 μg/mL(AGE LDL组)、LPS 100 ng/mL(LPS组)、LPS 100 ng/mL+n-LDL 50 μg/mL(LPS+ n-LDL组)、LPS 100 ng/mL+ AGE-LDL 50 μg/mL(LPS+ AGE-LDL组),LPS 100 ng/mL+锌原卟啉(Znpp) 10 μmol/L(LPS+ Znpp组)、LPS 100 ng/mL+ n-LDL 50 μg/mL+ Znpp 10 μmol/L(LPS+n-LDL+Znpp组)、LPS100 ng/mL+AGE-LDL 50 μg/mL+Znpp 10 μmol/L(LPS+ AGE-LDL+Znpp组),调节培养基终体积为1 mL,于37℃培养90 min.采用ELISA法检测IL-6和TNF-α水平,RT-PCR检测mBMMCs HO-1 mRNA表达水平,Western印迹法检测抗小鼠丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化P38(p-P38)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)1/2和NF-κB磷酸化P65(p-P65)蛋白表达水平.结果 LPS+ AGE-LDL组的IL-6水平显著低于LPS组和LPS+ n-LDL组(P值均＜0.01),TNF-α水平显著低于LPS组(P＜0.05).LPS+ AGE-LDL+Znpp组的IL-6和TNF-α表达水平均高于LPS+ AGE-LDL组(P值均＜0.01).AGE LDL组的HO-1 mRNA相对表达量为2.404±0.576,显著高于n-LDL组的1(P＜0.05).AGE-LDL组的p-P38、p-ERK2和p-P65蛋白表达率均显著高于对照组(P值分别＜0.01、0.05),LPS组与LPS+ AGE LDL组间的差异无统计学意义(P值均＞0.05).结论 AGE-LDL可下调LPS诱导mBMMCs释放的IL-6和TNF-α水平,此下调可能通过升高HO-1表达而起作用.AGE-LDL可激活MAPK P38、ERK和NF-κB信号通路.AGE-LDL可能通过MAPK下游通路影响HO-1的表达,进而下调炎性细胞因子表达水平.

罗格列酮改善晚期糖基化终产物导致的皮祖细胞功能损伤

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂能否改善由于晚期糖基化终产物(AGEs)导致的内皮祖细胞(EPCs)功能损伤.方法 将培养的健康成人外周血EPCs置于含有不同质量浓度的糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA)的培养基中培养,分别为人血清白蛋白(HSA,对照组),AGE-HSA 50 mg/L(AGE-HSA 50 mg/L组)、AGE-HSA 100 mg/L(AGE-HSA 100 mg/L组),AGE-HSA 200 mg/L(AGE-HSA 200 mg/L组),AGE-HSA 200 mg/L+罗格列酮10 nmol/L(AGE-HSA+罗格列酮组),AGE-HSA 200 mg/L+抗AGEs受体(RAGE)抗体50 mg/L(AGE-HsA+RAGE组).另设立一个空白对照组.检测EPCs的增殖、黏附、迁移、NO分泌能力、凋亡和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的分泌情况.结果 AGE-HSA 200 mg/L组的EPCs增殖率较空白对照组显著下降(37.7±6.3)%(P<0.05),显著低于AGE-HSA+罗格列酮组的(89.3±5.9)%(P<0.05).AGE-HSA 200 mg/L的黏附细胞数、迁移细胞数分别为(20.2±1.3)、(15.0±2.1)个/高倍视野,均显著低于空白对照组的(35.6±1.5)、(28.6±2.8)个/高倍视野(P值均<0.05).AGE-HSA 200 mg/L组的凋亡率为(15.2±1.0)%,显著高于空白对照组的(4.6±0.8)%(P<0.05).AGE-HSA+罗格列酮组的黏附细胞数为(31.2±2.6)个/高倍视野,迁移细胞数为(21.6±3.1)个/高倍视野,凋亡率为(6.1±0.9)%,与AGE-HSA 200 mg/L组的差异均有统计学意义(P值均<0.05).AGE-HSA+罗格列酮组的EPCs培养上清液中的NO含量为(16.2±1.0)μmol/L,显著高于AGE-HSA 200 mg/L组的(10.2±0.5)μmol/L(P<0.05),VCAM-1为(5.2±0.04)μg/L,显著低于AGE-HSA 200 mg/L组的(6.2±0.1)μg/L(P<0.05).结论 PPARγ激动剂罗格列酮能够改善AGEs导致的EPCs功能损伤.

晚期糖基化终产物促进血管外膜成纤维细胞炎性反应机制及坎地沙坦对其干预作用

目的 观察晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)炎性反应的影响及其机制,以及坎地沙坦对该影响的干预作用.方法 用组织贴块法培养Sprague-Dawley大鼠的AF,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测AGEs受体(RAGE)的表达.应用RT-PCR检测单核细胞趋化因子(MCP)-1、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA表达,应用酶联免疫吸附试验检测培养上清液中MCP-1、IL-6、VCAM-1蛋白表达.应用Western印迹法及免疫电泳迁移率分析检测核因子(NF)-кB和NF-кB抑制蛋白α(Ⅰ-кB-α).结果 不同浓度糖基化人血清白蛋白(AGE-HSA,50、100、150、200、300 mg/L)可呈浓度依赖性地上调RAGE mRNA和蛋白的表达,与对照组和人血清白蛋白(HSA)组的差异均有统计学意义(P值均<0.05),200 mg/L时达到峰值.AGE-HSA 200 mg/L作用AF后0.5、1.0、2.0 h,细胞核内NF-кB均激活,作用后0.5、1.0、2.0 h活性均显著高于作用后0 h(P值均<0.05).AGE-HSA 200 mg/L作用后细胞质内Ⅰ-кB-α磷酸化激活,1.0 h达峰值,0.5和1.0 h均显著高于0 h(P值均<0.05).3、30 nmol/L坎地沙坦均能抑制AGE-HSA 200 mg/L作用后Ⅰ-кB-α的磷酸化激活及NF-кB核内移,以30 nmol/L更显著.不同质量浓度AGE-HSA(50、100、200、300 mg/L)均可使AF IL-6、VCAM-1、MCP-1 mRNA表达较对照组显著上调(P值分别<0.05、0.01),且呈剂量依赖性.用RAGE中和抗体、NF-кB抑制剂MG-132、坎地沙坦预处理可减少由AGE-HSA所致的IL-6、VCAM-1、MCP-1 mRNA表达及上清液中蛋白表达量(P值分别<0.01、0.05).结论 AGE-HSA通过RAGE、NF-кB途径促使炎性因子表达上调.坎地沙坦可有效抑制Ⅰ-кB-α磷酸化、NF-кB核内移及炎性因子的表达,提示坎地沙坦可通过抑制AGEs引起的AF炎性反应起到延缓糖尿病血管并发症的作用.

通心络对晚期糖基化终产物诱导的内皮祖细胞存活的影响及其机制

目的 探讨通心络对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导的内皮祖细胞(EPCs)存活的影响及相关的分子机制. 方法 分离出入外周血单个核细胞后经体外诱导分化为EPCs,采用Western印迹法检测通心络对糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)刺激的EPCs的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路以及AGEs受体(RAGE)表达的影响,同时观察不同浓度通心络对AGE-HAS刺激的EPCs增殖及凋亡的影响. 结果 通心络超微粉溶液可抑制由AGE-HAS诱导的EPCs MAPK信号通路的激活,其中以100 mg/L的通心络对p38和细胞外信号调节酶(ERK)MAPK信号通路的抑制作用为显著(P值均<0.01). 结论 通心络主要通过抑制AGE-HAS诱导EPCs MAPK(主要是p38和ERK)信号通路的激活,下调EPCs RAGE的表达,进而抑制EPCs的凋亡并促进其增殖.

晚期糖基化终产物调节内皮祖细胞功能及其机制研究

晚期糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的影响

糖尿病和长期高血糖会导致血管内皮上晚期糖基化终产物的形成.晚期糖基化终产物在血管内皮上的聚集则进一步引起氧化应激和血管的损伤.而葡萄糖-6-磷酸脱氢酶是机体内NADPH的主要来源之一,对于维持机体内的氧化还原平衡非常重要.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性不足会导致血管内皮细胞氧化应激.本研究的主要目的是研究晚期糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性和表达的影响.结果显示,晚期糖基化终产物修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA,100 μg/mL)孵育24 h可以显著提高人脐静脉内皮细胞内自由基的量[(48.89±5.28)％],同时显著降低葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性[(61.25±11.2)％].而AGE-BSA孵育8h可降低葡萄糖-6-磷酸脱氢酶mRNA的表达[(27.92±6.73)％],AGE-BSA孵育24 h则可降低葡萄糖-6-磷酸脱氢酶蛋白的表达[(23.72±2.44)％].这些结果说明,晚期糖基化终产物会导致人脐静脉内皮细胞内氧化应激增加,同时导致内皮细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性降低、蛋白表达下降.

Rho/ROCK信号通路参与晚期糖基化终产物诱导的人皮肤微血管内皮细胞骨架结构改变

本文旨在探讨Rho信号转导通路在晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导的人皮肤微血管内皮细胞(human dermal microvascular endothelial cells,HMVECs)形态及功能改变中的作用及机制.体外培养HMVECs细胞株,分别以不同浓度的AGEs修饰的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)处理不同时间,并设立对照组进行比较.用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构及分布:用Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制剂Y-27632或H-1152预处理细胞30 min后,与前者进行对比,同时用免疫印迹法检测Rho、ROCK及其磷酸化水平的变化;用FITC荧光标记蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数(apparent permeability coefficient,PA)值.结果显示,AGEs-HSA以剂量和时间依赖的方式引起HMVECs细胞骨架蛋白F-actin结构和分布的改变,未经修饰的HSA无此作用;ROCK特异性抑制剂Y-27632和H-1152均可抑制AGEs对细胞骨架的影响.AGEs-HSA引起Rho、ROCK磷酸化水平的增加(P<0.05),但对总蛋白没有明显影响.与对照组相比,AGEs-HSA使内皮细胞的通透性升高(P<0.01),Y-27632和H-1152均能抑制这种改变(P<0.01).以上结果提示,Rho信号通路在AGEs介导的HMVECs形态和功能改变中发挥了重要作用.

重组人白介素-10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞和血管新生内膜的增殖

研究观察了重组人白介素10 (rhIL-10)对晚期糖基化终产物(AGE) 刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖及对SD大鼠血管损伤后新生内膜增殖的影响. 体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞, 采用 MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态; 应用流式细胞术测定细胞周期; 利用 p44/42 磷酸化抗 MAPK抗体的蛋白免疫印迹法测定p44/42 MAPK磷酸化蛋白表达. 利用大鼠颈动脉血管损伤模型, 观察 rhIL-10对新生内膜增殖的影响.结果显示: (1) AGE处理组与对照组相比, AGE对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用(P<0.05). rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P>0.05).在AGE刺激下, 低至100 ng/ml的rhIL-10可抑制血管平滑肌细胞的生长(P<0.05). (2) 流式细胞术测定的结果显示, rhIL-10可以使AGE作用下的VSMC大部分处于G0/G1期, 与对照组相比有明显差异(P<0.01).(3) AGE对p44/p42 MAPK磷酸化蛋白表达有显著的增强作用, 此作用可被rhIL-10抑制(P<0.001). (4) 大鼠颈动脉损伤后, rhIL-10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45% (P<0.01).表明抗炎细胞因子rhIL-10可抑制AGE诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管新生内膜的增殖.

microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用

目的 探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮·间叶转化(EMT)的调控作用.方法 人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 mM BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况.结果 在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白Ⅰ (CollagenI) mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA和蛋白表达水平显著上升(P＜0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen Ⅰ mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05),而E-cad-herin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P＜0.05).结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT.miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT.miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用.

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的 探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响.方法 晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)、转化生长因子β1(TGF-31)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达；应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达；应用ELISA法检测间皮细胞TGF-31、VEGF蛋白表达水平.结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P＜0.05).BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-31、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下凋α-SMA、Collagen Ⅰ、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT.

晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化

目的 探讨晚期糖基化终产物对大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响,建立大鼠腹膜间皮细胞EMT模型.方法 体外培养的大鼠腹膜间皮细胞经含40 mmol/L晚期糖基化终产物(AGEs)、80 mmol/L AGEs的M199培养基分别培养48、72 h；以正常M199培养基和含80 mmol/L BSA的M199培养基为对照.采用相差显微镜观察细胞形态学改变,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA的表达；应用Western blot检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达；应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平.结果 ①AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞由典型的上皮细胞形态逐渐变为梭形及不规则形,类似肌成纤维细胞；②AGEs (40 mmol/L、80mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGF mRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著增加(P＜0.05)；③AGEs(40 mmol/L、80 mmol/L)刺激后,大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著下降(P＜0.05).结论 AGEs能上调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达和下调E-cadherin表达,AGEs诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT.

D-半乳糖诱导心肌细胞非酶糖基化对钙调节蛋白的影响

目的 研究D-半乳糖诱导衰老的心肌细胞中的非酶糖基化反应,及其对心肌细胞内钙调节蛋白水平的影响. 方法 实验用5 g/L D-半乳糖干预培养心肌细胞建立衰老模型.显微镜下观察心肌细胞的形态和搏动情况.以β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老,ELISA法检测心肌细胞晚期糖基化终产物(AGEs)的含量,采用western blot检测肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA,心脏主要是SERCA2a)及受磷蛋白(PLN)的含量. 结果 D-半乳糖诱导的心肌细胞内β-半乳糖苷酶染色阳性率显著高于正常对照组[(75.6±4.9)%和(17.15±2.9)%,P＜0.01)];细胞内AGEs较正常对照组明显增高[(702.58±32.16)pg/ml和(93.22±26.14)pg/ml,P＜0.01];SERCA2a含量明显下降与正常对照组比值为0.39±0.05(P＜0.01);PLN含量明显下降与正常对照组比值为0.27±0.03(P＜0.01);同时伴有心肌细胞形态和搏动的异常. 结论 D-半乳糖可通过心肌细胞的非酶糖基化诱导的心肌细胞老化,同时降低心肌细胞内的SERCA2a、PLN蛋白含量,影响心肌细胞的舒缩活动.

非酶糖基化作用与衰老的关系

非酶糖基化(nonenzymatic glycation,NEG),是以还原糖和生物大分子如蛋白质、脂质、核酸为核心反应物,不需要酶催化的一类复杂反应,终生成不可逆的晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs).非酶糖基化反应又称为Maillard反应.近年来的研究发现,非酶糖基化作用及其终产物的广泛生理病理意义远远超出了人们原先的估计.AGEs与衰老和疾病的关系日益受到关注,并逐渐成为研究热点.

晚期糖基化终产物对血管通透性的影响和作用机制

血管通透性的增高是糖尿病血管并发症的一个标志性事件[1],是其发生的初表现和导致其他后续改变的病理基础.随着对晚期糖基化终产物(advanc-ed glycation end products,AGEs)及其特异性受体(rece-ptor for advanced glycation end products,RAGE)的结构及其病理机制研究的深入,AGEs在血管通透性增高中所起的重要作用引起了广泛的关注,我们就此作一综述.

透析相关性淀粉样变发病机制的新认识

透析相关性淀粉样变(DRA)是透析患者常见的致残性并发症.这种淀粉样沉积中的主要蛋白成份是β2微球蛋白(β2m),因此又称之为β2微球蛋白淀粉样变.淀粉样沉积主要发生于骨、关节组织,导致破坏性骨、关节病变.

晚期糖基化终产物及其受体对大鼠阴茎海绵体组织中内皮素-1活性的影响

目的:通过观察大鼠阴茎海绵体组织中晚期糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)的变化对内皮素1(ET-1)活性的影响,探讨AGEs在糖尿病性勃起功能障碍(DMED)发生发展中的作用.方法:成年雄性sD大鼠60只,随机取40只用于制作糖尿病模型,造模后共27只大鼠成模,将其分为两组:糖尿病(DM)组15只和糖尿病+氨基胍给药(DM+AG)组12只;另20只大鼠平分为两组:正常对照(NC)组和正常对照+氨基胍给药(NC+AG)组;两组氨基胍(AG)给药组大鼠造模后即在其饮水中按1 g/L剂量加入AG.饲养8周后取各组大鼠阴茎海绵体组织,一部分用于免疫组化法观察分析AGEs及其受体的分布和表达,剩余部分匀浆后检测AGE-肽(AGE-P)含量和ET-1活性.结果:DM组阴茎海绵体组织中AGEs和RAGE的表达、AGE-P含量及ET-1活性明显高于正常对照组(P＜0.05);正常对照组与NC+AG组间比较在各项指标上则无明显差异(P＞0.05).结论:糖尿病状态下AGEs与RAGE的结合效应可以引起大鼠阴茎海绵体组织中ET-1活性的增强,从而促进DMED的发生发展.

晚期糖基化终产物诱导人主动脉内皮细胞氧化应激损伤及线粒体功能紊乱

目的:观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对内皮细胞氧化应激水平和线粒体功能的影响,以探讨糖尿病血管内皮细胞功能障碍可能的发生机制.方法:以不同质量浓度(50,100 μg/mL)的AGE修饰的牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumin,AGE-BSA)作用于人主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs) 48 h,CCK-8法测定HAECs的增殖能力,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,应用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;JC-1法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),荧光素-荧光素酶法和Clark氧电极法测定细胞中ATP含量及细胞耗氧率.结果:AGE-BSA能显著性地抑制HAECs增殖,增加细胞内ROS水平,降低SOD活力,且高质量浓度作用更加明显.同时,AGE-BSA还能使MMP下降、ATP生成及耗氧减少.结论:AGE-BSA诱导HAECs产生氧化应激损伤,其机制与其造成线粒体功能紊乱相关.

晚期糖基化终产物对人肝癌细胞 HepG2耐药性的影响

目的：探讨晚期糖基化终产物（ advanced glycation end products ，AGEs）对肝癌细胞耐药性的影响及其机制。方法：体外培养人肝癌细胞HepG2，以终浓度分别为100、200、400μg· ml-1的AGEs联合2000 nmol· L-1盐酸阿霉素（ adramycin ，ADM）处理细胞24 h，并设空白对照和ADM组进行比较。应用倒置显微镜观察不同浓度AGEs联合ADM孵育下HepG2形态学变化，流式细胞术（ flow cytometry，FCM）检测细胞周期的改变，应用细胞计数试剂盒（ cell counting kit-8，CCK-8）检测细胞株活性，蛋白质免疫印迹法（ Western blotting ）测定不同浓度AGEs作用下，HepG2细胞多药耐药基因（ multidrug resistance-1，MDR1）蛋白表达情况。结果：在2000 nmol · L-1 ADM作用下，HepG2细胞生长停滞或死亡，而AGEs能促进细胞生长，抑制其死亡。细胞周期和细胞活性实验表明，与ADM组相比，随着AGEs浓度增加，G1期细胞百分率显著下降，S期及G2期细胞增加，细胞活性有上升趋势。 Western blotting检测表明AGEs能增加MDR1的蛋白表达。结论：AGEs能通过促进MDR1基因的表达，降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

生地黄-山茱萸对AGEs致HUVEC细胞损伤的保护作用

目的 观察生地黄、山莱萸对晚期糖基化终产物(AGEs)作用下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用.方法 体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、AGEs组、生地黄组、山茱萸组、生地黄-山茱萸分煎及合煎组,加入终浓度为0.125、0.062 5、0.031 25 g/L的药物预孵lh后,加入200 mg/L的AGEs作为刺激物,继续培养24h后,用CCK-8测定并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率；取各组细胞上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、乳酸脱氲酶(LDH),ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β.结果 生地黄、山茱萸、生地黄-山茱萸(0.125、0.062 5、0.031 25 g/L)对AGEs致HUVEC损伤均有保护作用.AGEs组细胞上清液中SOD活性、NO含量降低(P＜0.05～0.01),MDA、LDH含量增加(P＜0.05～0.01),TNF-α、IL-1β分泌增加(P＜0.05～0.01).而各给药组能提高SOD活性、NO含量,降低LDH、MDA,减少TNF-α和IL-lβ分泌,与AGEs组比较有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论 生地黄、山茱萸、生地黄-山茱萸通过增加内皮细胞NO生成量、抑制氧化应激、调节细胞分泌功能来保护血管肉皮细胞的,尤以生地黄-山茱萸保护HUNEC为明显.

生地环烯醚萜苷类成分对AGEs损伤HUVEC的保护作用

目的 观察生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷对晚期糖基化终产物(AGEs)损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用.方法 体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、模型组、梓醇组及毛蕊花糖苷组,并设氨基胍组作为阳性对照.加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L的药物分别预孵1h后,加入200 mg/L的AGEs作为刺激物继续培养,24h后用MTT法检测并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率.体外培养HUVEC,加入氨基胍及梓醇、毛蕊花糖苷(终浓度分别为1、10、100μmol/L)预孵1h后,加入终浓度为200 mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,24h后取各组细胞培养上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和NO; ELISA法测定内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子-β(TGF-β)及白介素1β(IL-1β).结果 生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷(0.05、0.1、0.5、1、5、10、100 μmol/L)可减轻AGEs致HUVEC的损伤.与空白对照组比较,模型组细胞上清液中ROS、AngⅡ、MDA含量增加(P＜0.05～0.01),SOD活力和NO水平降低(P＜0.05～0.01),TGF-β、IL-1β分泌增加(P＜0.05～0.01).而梓醇、毛蕊花糖苷给药组(1、10、100μmol/L)能不同程度的降低ROS、AngⅡ、MDA含量,升高SOD活力和NO水平,减少TGF-β、IL-1β分泌,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05～0.01).结论 生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷可通过抑制氧化应激、调节内皮细胞分泌功能、抑制炎症因子及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞.