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从神经科学角度分析脱髓性疾病-免疫细胞，神经胶质细胞，神经细胞三者之间的相互作用
小胶质细胞（Microglia ）对炎症性脱髓鞘性病变-多发性硬化症（MS）的发展起到至关重要的作用。作为抗原呈递细胞，小胶质细胞会对炎性淋巴细胞发挥作用，并产生炎性细胞因子，谷氨酸和活性氧。现在大家普遍认为神经退行性疾病是一种脱髓鞘病变，它会影响到多发性硬化症的预后表现。在神经退行性疾病-多发性硬化症的早期阶段，神经树突和轴突的串珠状肿胀的出现是神经病理学的标志。由小胶质细胞产生的谷氨酸和活性氧能启动串珠形成。近我们的研究表明，当多发性硬化症发症时，小神经胶质细胞能减少细胞死亡及诱导神经营养因子分泌，而且产生抗炎症细胞因子和抗氧化剂酶来发挥神经保护作用。神经细胞被认为是小胶质细胞的被动目标，同时它也能够通过各种通路来控制小胶质细胞的活性，包括：细胞因子和趋化因子。受损的神经细胞一方面能分泌可溶性不规则趋化因子（sFKN；CX3CR1）并促进小胶质细胞吞噬神经细胞的碎片，同时也诱导小胶质细胞产生抗氧化血红素加氧酶-1（HO-1）。另外，我们还发现神经细胞分泌的 IL-34可以诱导小胶质细胞的神经保护作用，同时也发现星形细胞也具有神经保护作用。由星形细胞产生的IL-33能诱导小胶质细胞的活化，但是，星形细胞的受体-Toll样受体却会诱导神经毒性分子分泌。因此，进一步探讨神经胶质细胞和神经细胞之间的良性互动的平衡关系，将来对于探讨神经退行性疾病的治疗策略来说是至关重要的。
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多发性硬化症的治疗展望
多发性硬化症(MS)的发病原因到目前为止尚不清楚,同时也没有发现行之有效的治疗方法.但是,有几个关于它的发病机理已被阐明,围绕这些机理研发一些治疗方法.目前,国际上已被公认有效的药物仅仅有干扰素β (IFN-β)一种.近,在我们的研究中,T细胞入侵时与重要的α-整合蛋白相对应的单克隆抗体,和与B细胞上抗原CD52相对应的单克隆抗体,阿仑单抗等等都作为新型药物来用于治疗.我们期待这些药物能使预期复发次数变少,以减少患者的门诊复诊次数[1].这种治疗方法,是从根本上起到治疗的效果,用于抑制多发性硬化症(MS)的发病机制,这些正是我们所期待的.另外,近多发性硬化症(MS)可以引起轴突损伤的研究也被关注,与炎症性脱髓鞘相比较,如何抑制轴突变性显得更为重要.在本次讨论中,调节性自体免疫功能的T细胞在免疫系统中具有很强的防御功能,它将作为一种新的尝试,抑制多发性硬化症(MS)疾病的发生,同时我们还要讨论如何抑制轴突变性来尝试开发多发性硬化症(MS)的药物治疗.
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小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎性别差异研究
目的探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)性别差异的原因.方法应用髓鞘脂质蛋白139-151(PLP139-151)免疫诱导建立EAE模型,观察雌雄小鼠病情的差异,采用MTT、ELISA法,检测外周淋巴细胞对自身抗原反应的性别差异.结果雌性小鼠的平均发病时间(15±2.1)d,早于雄性的(22±4.3)d,病程有复发-缓解的特点,而雄性则多呈一过性发病;EAE雌雄小鼠的特异性淋巴细胞增殖反应和γ-干扰素分泌无显著性差异(P>0.05),雄性小鼠白细胞介素-4(IL-4)分泌明显高于雌性小鼠(P<0.01).结论PLP139-151诱发小鼠EAE性别差异可能与雄性小鼠外周淋巴细胞分泌IL-4水平较高,具有保护作用有关.
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VCAM-1核心表位的噬菌体短肽用于EAE的实验性治疗
目的获得VCAM-1的拮抗物,用其对EAE进行实验性治疗. 方法用鼠抗人VCAM-1单抗筛选噬菌体15肽库,经4轮亲和筛选后进行ELISA鉴定,对得到的两株强阳性克隆进行测序,用其免疫豚鼠制备抗血清,观察对EAE发病临床级别的影响. 结果强阳性克隆小肽顺序为IRRNPIPKTIKTI(M)LI,并获得了VCAM-1的抗血清,该克隆可延缓EAE发病,且可降低临床分类级别. 结论此噬菌体短肽可作为VCAM-1的拮抗物延缓EAE模型鼠的发病.
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Irgm1基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠CD4＋T细胞亚群的影响
目的：探讨免疫相关GTP酶1（Irgm1）基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune en-cephalomyelitis，EAE）小鼠CD4＋T细胞的影响。方法：C57BL／6纯系小鼠与Irgm1基因敲除杂合小鼠（Irgm1＋／－）回交十代繁殖C57BL／6背景下Irgm1＋／－小鼠，用C57BL／6 Irgm1＋／－小鼠杂交获取Irgm1－／－、Irgm1＋／－、Irgm1＋／＋三种基因型小鼠，PCR扩增DNA检测基因型。用髓鞘少突胶质糖蛋白（ Myelin oligodendrocyte glycoprotein ，MOG33-55）多肽与弗氏完全佐剂等量混合制成乳剂，免疫C57BL／6野生型（Wt.）和Irgm1基因敲除（Irgm1－／－）小鼠，建立EAE模型，并进行临床评分。 MTT法测定MOG33-55免疫后7 d的EAE小鼠淋巴结细胞中MOG33-55特异性T细胞增殖分化水平。取MOG33-55免疫后14 d EAE小鼠脊髓切片，HE染色检测炎细胞浸润情况。取MOG33-55免疫后16 d的EAE-小鼠淋巴结、脊髓和脑组织，提取单个核细胞，用MOG33-55（20μg／ml）体外刺激培养7 d，收集细胞，用流式细胞仪分析EAE小鼠淋巴结、中枢神经系统浸润细胞中Th1、Th17的改变。结果：成功诱导了EAE小鼠模型；HE染色结果显示Wt.小鼠脊髓周围出现明显炎细胞浸润，而 Irgm1－／－小鼠则无明显变化；MTT实验表明Irgm1－／－小鼠与Wt.小鼠相比，淋巴结中T细胞对MOG33-55特异性增殖能力降低；流式细胞分析表明相对于Wt.小鼠，Irgm1－／－小鼠EAE模型在淋巴结及中枢神经系统浸润细胞中Th1细胞亚群比例明显增高而Th17细胞亚群比例下降。结论：Irgm1基因敲除可部分保护EAE小鼠的脊髓功能及临床症状。在EAE发病早期，Irgm1可能起到了关键性的作用，因此Irgm1有可能成为EAE治疗的重要分子靶点。
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小鼠视神经炎视同模型的建立及评估
目的 建立以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)多肽诱发的视神经炎(ON)小鼠模型并观察其自然病程中视神经形态结构的变化.方法 应用MOG35-55多肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠(50只)建立ON模型、对照组和EAE模型组小鼠于免疫当天,免疫后第7、14、20、30天,采用HE染色、Luxol fast blue染色、Bielschowsky银染分别评估炎性细胞浸润、髓鞘脱失和轴突损害;并在电镜下观察视神经超微结构的变化.结果 本实验应用MOG335-55多肽皮下注射免疫C57BL/6小鼠,以眼计算,ON发病率为57.5％(病理诊断).在免疫后第7天,光镜下观察EAE模型组小鼠视神经HE染色和Bielschowsky银染与对照组无明显改变;Luxol fast blue染色可见髓鞘排列紊乱；电镜下可见髓鞘断裂分层,与轴突分离；在免疫后第14天,视神经呈现不同程度的炎性浸润、髓鞘脱失和轴突损害；电镜下可见不同程度的髓鞘板层状分离、变薄、脱失,轴索水肿,线粒体明显肿胀;在免疫后的第20天和免疫后的第30天时,光镜下视神经的脱髓鞘程度并没有减轻.结论 以MOG35-55为抗原诱发的ON模型可作为目前研究特发性脱髓鞘性视神经炎(IDON)的理想模型.形态学检查发现视神经脱髓鞘的同时伴有不同程度轴突的损伤,提示人们早期对IDON进行神经保护治疗是很必要的.
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可溶性髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠免疫耐受的机制
目的 探讨可溶性髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠免疫耐受的机制.方法 将EAE小鼠随机分为MOG肽治疗组、卵清蛋白(OVA)处理组和对照组,分别于EAE诱导的第6～16天腹腔注射MOG肽、OVA肽和同等剂量的PBS,通过比较各组小鼠临床评分,脾脏(SP)大小,脾脏和中枢神经系统(CNS)的脑和脊髓浸润淋巴细胞数,流式细胞术分析T细胞表型及其功能,探讨T细胞迁移在可溶性MOG肽诱导的EAE免疫耐受中的作用;流式细胞术分析脾脏、CNS浸润CDllb+抗原提呈细胞(APC)的成熟,免疫荧光技术分析成熟APC与效应性CD4+T细胞的相互作用,研究成熟APC在T细胞迁移中的作用.结果 腹腔注射可溶性MOG肽可抑制脾脏内的效应性T细胞向CNS迁移,并诱导脾脏APC成熟,抑制CNS浸润APC成熟;MOG肽诱导的成熟APC可与MOG反应性CD4+T细胞相互作用并聚集在一起,进而抑制效应性T细胞的迁移.结论 可溶性MOG肽通过诱导脾脏APC成熟,成熟APC与MOG-T细胞相互作用,抑制脾脏MOG-T细胞向CNS迁移,诱导EAE免疫耐受.
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血管活性肠肽对自身免疫性脑脊髓炎大鼠CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例及TGF-β1表达的影响
目的 探讨血管活性肠肽(VIP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 健康雌性Wistar大鼠随机分成EAE模型对照组和VIP低剂量防治组、VIP高剂量防治组,利用髓鞘碱性蛋白(MBP)+完全福氏佐剂(CFA)诱导建立EAE模型,另设正常对照组.自造模当日起,每隔1 d分别对VIP低、高剂量防治组大鼠腹腔注射VIP 4 nmol/kg(0.2 mL)、16 nmol/kg(0.8 mL),正常对照组及EAE对照组腹腔注射0.8 mL生理盐水,连续10 d.观察各组大鼠发病高峰期神经功能障碍评分情况;HE染色观察脑组织基本病理改变;免疫组化技术检测脑组织中星形胶质细胞活化情况;流式细胞术及ELISA法检测脾组织中CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例及脑组织匀浆中TGF-β1含量变化.结果 VIP各剂量防治组大鼠发病高峰期神经功能障碍评分(NDS)降低,脑组织中炎细胞浸润程度明显下降、活化的星形胶质细胞数量减少、脾组织中CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例升高、脑组织匀浆中TGF-β1含量升高,且各低、高剂量组间存在一定剂量依赖关系.结论 VIP通过提高脾组织中CD4+CD25+Treg/CD4+T细胞比例、增加脑组织匀浆中TGF-β1含量,从而减轻脑组织炎症细胞的浸润程度,抑制星形胶质细胞活化,发挥对EAE的防治作用.
