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蛋白结合类尿毒症毒素蛋白结合率方法测定
目的 建立蛋白结合类尿毒症毒素蛋白结合率的检测方法,测定慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血清马尿酸(hippuric acid,HA)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)、硫酸对甲酚(p-cresyl sulfate,PCS)及3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furan-propionic acid,CMPF)4种蛋白结合类尿毒症毒素的蛋白结合率.方法 通过对方法的专属性、线性关系、精密度等考察,验证超滤法联合高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatagraphy-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)测定蛋白结合类尿毒症毒素的游离浓度的可行性,并采用该方法测定CKD患者血清HA、IS、PCS、CMPF的蛋白结合率.结果 内源性干扰物质在待测物的出峰位置基本不干扰HA、IS、PCS、CMPF的测定;本方法在10～1 000 ng/ml (IS、PCS、CMPF)、50～5 000 ng/ml (HA)范围内线性良好;日内精密度为0.84％,日间精密度为l18％;超滤膜回收率均＞95％;健康对照组HA、IS、PCS及CMPF的蛋白结合率为(83.44±3.04)％、(98.73土0.55)％、(98.42土0.95)％、(96.66士2.65)％;CKD 3～5期HA、IS、PCS及CMPF的蛋白结合率依次为3期(79.72±3.82)％、(99.18±0.45)％、(98.64±0.64)％、(95.89±3.52)％;4期(71.09±7.66)％、(98.24±0.95)％、(98.26±0.73)％、(91.82土5.10)％;5期(61.22±7.62)％、(97.41±1.10)％、(96.85±1.51)％、(97.51±1.52)％.结论 所建立的方法灵敏度高,专属性和重复性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求.HA蛋白结合率均＞60％,与HSA之间具有中等强度结合,IS、PCS及CMPF的蛋白结合率均＞90％,与HSA之间具有高强度结合.
关键词： 慢性肾脏病 蛋白结合类尿毒症毒素 蛋白结合率 超滤法 -
超滤法提取六味地黄汤活性多糖的工艺研究
建立用超滤法快速分离六味地黄汤中免疫活性多糖的工艺。方法利用两支不同孔径中空纤维超滤柱截留活性多糖部位；采用凝胶柱层析结合硫酸-苯酚显色法，测定多糖的分子量；利用酸水解和TLC测定多糖的主要糖组成。结果得到相对分子量3万左右的多糖组分。结论超滤法分离多糖是一种有效的方法。工艺简单，生产周期短。
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超滤法测定伏立康唑的血浆蛋白结合率
目的 建立一种测定伏立康唑游离型药物浓度和蛋白结合率的方法 .方法以卡马西平为内标,用超滤法处理样品,结合高效液相色谱(HPLC)法测定人血浆中伏立康唑游离型药物浓度(Cu)和总药物浓度(Ct),并计算蛋白结合率.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与准确度、超滤膜回收率、稳定性.结果 伏立康唑游离型药物浓度在0.32～10.00μg·mL-1内线性良好,标准曲线方程为y=0.47x-8.16×10-2(r=0.9997),定量下限为0.32μg·mL-1.精密度小于15％,准确度为85％ ～115％,超滤膜回收率均大于95％.患者的伏立康唑血浆蛋白结合率为(50.34±10.98)％.结论 本研究所建立的测定方法特异性强,准确度高,可以用于测定伏立康唑的血浆蛋白结合率.
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奥扎格雷纳米结构脂质载体包封率的测定方法
目的:建立奥扎格雷纳米结构脂质载体(ozagrel-loaded nanostructured lipid carriers,OZ-NLC)包封率的测定方法.方法:分别采用超滤法、葡聚糖凝胶柱层析法、超速离心法分离游离药物,以紫外分光光度法测定奥扎格雷的含量,计算包封率.结果:超滤法和葡聚糖凝胶柱层析法可有效分离OZ-NLC与游离药物,两种方法的平均回收率分别为98.31％和97.15％,平均包封率为59.21％和61.11％.结论:葡聚糖凝胶柱层析法操作简便,结果可靠,重现性好,故选择该方法测定OZ-NLC的包封率.
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乳香没药挥发油固体脂质纳米粒包封率的评价
目的:建立乳香没药挥发油固体脂质纳米粒(FMO-SLN)包封率的评价方法.方法:建立了乳香没药挥发油气相色谱(GC)分析方法,并对方法学进行了考察；利用超滤法结合指纹图谱测定了FMO-SLN的包封率.结果:所建立的GC方法专属性、精密度、稳定性、重复性及准确性均良好；FMO-SLN的包封率为(80.60±1.11)％,超滤管截留部分与FMO-SLN原液指纹图谱的相似度为(98.68±0.57)％.结论:超滤法结合指纹图谱可以更准确、更全面的评价FMO-SLN的包封率,该方法能为中药有效部位新型给药系统的质量评价提供良好的借鉴.
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奥沙利铂纳米结构脂质载体中主药含量及包封率测定
目的:建立奥沙利铂纳米结构脂质载体(oxaliplatin-loaded nanostuetured lipid carriers,OP-NLC)包封率和含量的测定方法.方法:分别采用葡聚糖凝胶色谱法和超滤法分离OP-NLC中游离药物,高效液相色谱法测定包封率及药物含量.结果:超滤法测得药物包封率略高于葡聚糖凝胶色谱法,平均药物回收率和平均加样回收率分别为(99.3 ±0.6)%和(99.1 ±2.2)%.OP-NLC平均包封率为(74.2±1.8)%,药物含量为(0.76±0.03)mg·mL-1.结论:超滤法操作简便、准确,可以用于OP-NLC含量和包封率的测定.
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超滤法测定水不溶性药物香豆素-6 PLGA纳米粒的包封率
目的:建立超滤法测定水不溶性药物香豆素-6纳米粒包封率的方法.方法:采用HPLC法测定香豆素-6,色谱柱:Merck RP-18柱(15 cm ×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(95∶5),检测波长:448 nm.选用不同溶剂稀释纳米混悬液,超滤法分离纳米粒和游离药物,辅以扫描电镜法观察溶剂对纳米粒表面形态的影响,以及游离药物与纳米粒的分离效果,建立测定香豆素-6纳米粒包封率的方法.结果:建立了香豆素正的分析方法并应用于包封率的测定.选用1％ TPGs稀释纳米混悬液,通过超滤法可以有效分离游离香豆素-6,游离药物测定的回收率为98.47％ ～99.38％.结论:以1％ TPGs为溶媒稀释纳米混悬液,采用超滤法可以有效、准确地测定香豆素-6纳米粒包封率.
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超滤法测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率
目的:建立大鼠血浆中冬凌草乙素的高效液相色谱(HPLC)分析方法,测定冬凌草乙素的血浆蛋白结合率,为临床安全用药提供参考.方法:采用超滤法结合HPLC法测定冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白的结合率.结果:当冬凌草乙素在大鼠血浆中浓度为100,600,3 200 ng·mL-1时,冬凌草乙素与大鼠血浆的蛋白结合率分别为(70.9±3.4)％,(71.0±3.0)％,(69.6±2.9)％.结论:冬凌草乙素与大鼠血浆蛋白具有中等强度的结合,并且在考察浓度范围内血浆蛋白结合率无浓度依赖性.
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超滤-HPLC法测定盐酸拓扑替康脂质体包封率
目的:对盐酸拓扑替康脂质体进行质量评价,测定盐酸拓扑替康脂质体的包封率.方法:采用超滤法分离脂质体与游离药物;采用HPLC测定药物含量,计算包封率.结果:超滤法能很好地将脂质体与游离药物分离,游离药物的平均回收率在96.9%～102.3%之间,超滤加样回收率在96.7%～101.6%之间,脂质体不能透过截留相对分子质量为50 000的超滤膜.在所选色谱条件下,盐酸拓扑替康得到良好分离,辅料不干扰测定,盐酸拓扑替康在1.0～40.0 mg·L-1内线性关系良好(r=0.999 8),日内和日间RSD均＜3.0%(n=5),加样回收率在98.5%～100.3%之间,RSD为1.4%.用此方法测定3份盐酸拓朴替康脂质体的包封率为92.41%～95.14%,RSD在1.26%～2.03%.结论:该方法可用于盐酸拓扑替康脂质体包封率的测定.
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Caspase抑制剂F1013血浆蛋白结合率的测定
目的:测定新Caspase抑制剂F1013的血浆蛋白结合率.方法:采用超滤法和高效液相色谱法测定F1013的血浆蛋白结合率.结果:F1013与Wistar大鼠血浆和正常人血浆的蛋白结合率分别为(49.19±10.84)％和(51.96±1O.OO)％.结论:F1013与血浆蛋白具有中等强度的结合.
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生物制品内毒素的祛除方法研究进展
内毒素主要是G-菌细胞壁外表层结构成分,而且分子比较稳定,而生物制品如重组蛋白多由G-菌Escherichia coli.表达生产.内毒素进入人体后会引起休克、组织损伤、死亡等反应,因此控制生物制品中的内毒素十分重要.文中介绍了生物制品内毒素的祛除方法包括超滤法、离子交换法、色谱法和两相胶束系统等,并详细说明了各种方法的原理、特点、应用范围以及各种方法选择原则等.
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超滤-紫外可见分光光度法测定钙黄绿素囊泡包封率
目的:建立携载钙黄绿素的胆固醇琥珀酸酯三羟基氨基甲烷盐囊泡包封率的测定方法.方法:采用超滤法分离囊泡与钙黄绿素;紫外可见分光光度法测定钙黄绿素的含量,检测波长为484 nm,计算包封率.结果:钙黄绿素在1.11-11.1 mg·L-1范围内线性良好(r＝0.999 8);不同截留分子量的超滤膜对钙黄绿素的膜透过率没有影响;利用超滤法可以使囊泡与钙黄绿素得到良好的分离,钙黄绿素的膜透过率在96.7%～97.0%,回收率在96.2%～97.0%,囊泡不能够通过超滤膜.利用该方法测得的钙黄绿素包封率为(37.1 4-2.4)%.结论:超滤.紫外可见分光光度法可以作为钙黄绿素囊泡包封率的测定方法,胆固醇琥珀酸酯三羟基氨基甲烷盐制备的囊泡可以作为水溶性药物的优良载体.
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超滤法测定表没食子儿茶素没食子酸酯人血浆蛋白结合率
目的 测定表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)的人血浆蛋白结合率.方法 采用超滤法对EGCG的血浆蛋白结合率进行测定.结果 当质量浓度为5.0,10.0,20.0 mg·L-1时,EGCG平均血浆蛋白结合率分别为86.1%,91.4%,94.9%.结论 EGCG与人血浆蛋白具有较强的结合.
关键词： 表没食子儿荼素没食子酸酯 血浆蛋白结合率 超滤法 高效液相色谱法 -
超滤法测定辣椒素对辛伐他汀血浆蛋白结合率的影响
目的 研究辣椒素对辛伐他汀血浆蛋白结合率的影响.方法 采用超滤法结合液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS),对未加和加入辣椒素后辛伐他汀与大鼠及健康人血浆的蛋白结合率进行测定.结果 在0.2,0.5,1μg·mL-质量浓度下辛伐他汀与大鼠血浆的蛋白结合率分别为:(97.73 ±0.24)％,(96.75±2.58)和(96.23±0.81)％;与健康人血浆的蛋白结合率分别为:(97.05±1.74)％,(97.68±0.65)％和(97.20±1.00)％.当合并加入辣椒素(1μg·mL－1)后,血浆蛋白结合率分别下降至:(93.97±0.96)％,(92.76±1.89)％,(92.05±0.58)％和(91.71±2.51)％,(91.73±1.88)％,(91.41±2.48)％;同时游离的药物浓度分别增加了1.66,1.23,1.11倍和1.81,2.56,2.07倍.结论 辣椒素能够使辛伐他汀的血浆蛋白结合率显著降低,使其游离型药物浓度显著升高(P＜0.01).临床运用辛伐他汀时,应注意联用含有辣椒素的药物/食物对其血浆蛋白结合率的影响.
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超滤-分光光度法分离测定聚乙二醇单甲醚-2000
目的 利用超滤法分离聚乙二醇单甲醚-2000(mPEG-2000),建立mPEG-2000的含量测定方法.方法 采用分光光度法测定mPEG-2000的含量,检测波长为567.8nm,并考察了利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜分离不同浓度mPEG 2000溶液时的膜透过率以及超滤膜重复利用的情况.结果 mPEG-2000在1～10mg·L-1内线性良好(r=0.9990);随着mPEG-2000溶液浓度的增加,3种不同截留相对分子质量(10000,50000,100000)的超滤膜的膜透过率呈下降趋势;100000截留相对分子质量的超滤膜对4种浓度mPEG-2000溶液的膜透过率高;超滤次数增加,质量浓度为0.002和0.02 g·L-1的mPEG-2000溶液膜透过率降低,质量浓度为0.2g·L-1的mPEG-2000溶液的膜透过率在较小范围内波动.结论 可见分光光度法作为测定mPEG-2000的含量测定方法操作简单,准确易行;100000截留相对分子质量的超滤膜可以对mPEG-2000溶液(质量浓度＜0.2 g·L-1)进行良好的分离.
关键词： 超滤法 分光光度法 聚乙二醇单甲醚-2000 超滤膜 -
液质联用超滤法测定注射用复方荭草中原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷的血浆蛋白结合率
目的 测定注射用复方荭草中原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷的血浆蛋白结合率,为临床安全用药提供参考.方法 以超高效液相色谱-质谱联用为检测手段,结合超滤离心法,由于基质背景的差异分别建立血浆样本及超滤液中的含量测定方法考察原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷与血浆蛋白的结合情况.结果 注射用复方荭草在人血浆中浓度为5～100 μg· mL-1时,原儿茶酸、异荭草素及野黄芩苷与血浆蛋白的平均结合率分别为(65.33±0.61)％+(85.97±0.43)％,(90.09±0.28)％.结论 原儿茶酸与血浆具有中等强度的结合,异荭草素及野黄芩苷与血浆结合力较强,它们与血浆蛋白结合能力在考察的浓度范围内无浓度依赖性.建立的方法灵敏度高,重现性好,操作简单,能够满足定量分析测试要求.
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超滤法测定不同种属血浆中促性腺激素释放激素拮抗剂十肽化合物的蛋白结合率
目的 测定促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂十肽化合物(十肽)在不同种属血浆中的体外、体内血浆蛋白结合率.方法 超滤法分离结合型药物和游离型药物,用乙腈沉淀蛋白后,以HPLC-MS/MS测定药物的浓度.结果 GnRH拮抗剂十肽化合物体外在低、中、高(50.0,200.0和800.0 ng· mL-1)3个浓度下与大鼠血浆的蛋白结合率分别是(95.9±1.1)％、(97.40±0.7)％和(94.9±0.6)％,与比格犬血浆的蛋白结合率分别是(96.8±0.8)％、(97.8±0.2)％和(96.9±0.5)％;与人血浆的蛋白结合率分别是(97.3±1.0)％、(98.6±0.2)％和(96.2±0.9)％;SD大鼠皮下给药(200 μg· kg-1)体内平均血浆蛋白结合率为96.2％,比格犬肌内注射(320 μg· kg-1)体内平均血浆蛋白结合率为97.1％.结论 GnRH拮抗剂十肽化合物在实验浓度范围内与大鼠、比格犬和人血浆中蛋白结合率均大于95.0％,属于高蛋白结合率.相同浓度GnRH拮抗剂十肽化合物与不同种属血浆蛋白结合率无统计学差异,各种属血浆蛋白结合率与药物浓度无明显依赖关系.
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超滤法测定龙胆苦苷的血浆蛋白结合率
龙胆苦苷(gentiopicroside,GPS)系裂环稀醚萜苷类化合物,是常用中药龙胆和秦艽的主要有效成分之一,具有保肝、解痉、利胆、清热、及抗菌消炎等作用.
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超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率
目的 测定冬凌草甲素在健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆中的蛋白结合率,为设计合理的给药方案提供依据.方法 采用超滤法结合高效液相色谱法(HPLC)对冬凌草甲素与大鼠、家兔和健康人血浆的蛋白结合率进行测定.结果 冬凌草甲素在覆盖临床给药范围的5.4,21.6和108.0 μg/mL下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为80.6％,78.3％,76.2％,与大鼠的血浆蛋白结合率分别为69.3％,67.5％,68.1％,与家兔的血浆蛋白结合率分别为65.2％,66.7％,64.3％.覆盖临床给药浓度的3个浓度的冬凌草甲素在同种血浆中血浆蛋白结合率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 结果表明本法简便快速、灵敏度高、专属性好,能够满足测试生物样品的要求,超滤法结合高效液相色谱法可用于冬凌草甲素血浆蛋白结合率的检测.在本研究试验浓度范围内,冬凌草甲素的血浆蛋白结合率与药物浓度无显著相关性,不同种血浆的蛋白结合率试验结果表明,冬凌草甲素与健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆蛋白均具有中等强度的结合.
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猴头菇多糖脂质体包封率的测定方法及其稳定性研究
目的 对猴头菇多糖脂质体进行质量和稳定性评价,测定猴头菇多糖脂质体包封率和进行脂质体稳定性考察.方法 采用超滤法分离脂质体与游离药物;采用紫外分光光度法,大吸收波长为(625±1)nm,测定药物含量,计算包封率;分别在40、60、80℃下对脂质体的化学稳定性和物理稳定性进行考察.结果 超滤法能很好的将脂质体与游离药物分离,游离药物的平均回收率为96.3％,加样回收率为95.9％,脂质体不能透过超滤膜;加速试验中40、60℃下稳定性较好.结论 该方法可用于猴头菇多糖脂质体的质量控制.
