首页 > 文献资料
-
芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响及其作用机制研究
目的 观察芒果苷对L6细胞葡萄糖消耗的影响,并探讨其分子机制.方法 以芒果苷干预L6肌管细胞,葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量,western-blot方法检测葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达量及其急性转位作用,免疫共沉淀(IP)联合western-blot方法检测AKT激酶活性.结果 芒果苷处理可激活L6细胞的AKT激酶(与对照组比,P=0.001),提高L6细胞的葡萄糖消耗(P=0.011或P=0.000)且呈剂量-反应关系(P=0.000),上调GLUT4的蛋白表达量(P=0.001或P=0.000)并促进GLUT4在细胞内发生急性转位(P=0.005,P=0.001或P=0.026),使该蛋白由胞浆经细胞骨架转位至细胞膜.结论 芒果苷可促进L6细胞的葡萄糖消耗量,调节GLUT4的表达及其在细胞内的急性转位,激活AKT激酶活性,因此,芒果苷具有潜在的辅助降血糖作用.
-
H2O2及PTEN在肽类生长因子活化Akt激酶中的作用
目的 研究H2O2、PTEN与肽类生长因子(胰岛素等)在调控Akt激酶活性中的作用及其相互关系.方法 Western Blot检测对照小鼠胚胎成纤维细胞PTEN MEFs和PTEN基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞PTEN MEFs中PTEN蛋白表达的差异.用胰岛素及NADPH氧化酶(NOX)抑制剂--DPI作用PTEN MEFs和PTEN MEFs细胞,Western Blot检测Akt激酶蛋白磷酸化水平的变化.将细胞接种于96孔板,加入胰岛素及DPI,96h后MTT法检测细胞增殖的变化.结果 在对照PTEN MEFs细胞内,加入胰岛素(100mU/ml)15min后Akt激酶磷酸化水平明显上调,加入10μmol/L DPI处理30min后,Akt激酶磷酸化恢复到基础水平,在PTEN MEFs细胞中未观察到上述变化.经胰岛素作用后PTEN MEFs细胞增殖加快(P＜0.05),加入DPI作用后可减缓细胞的增殖(P＜0.05),胰岛素和DPI同时作用对其增殖无明显影响(P＞0.05);各种处理因素对PTEN MEFs细胞增殖均无明显影响(P均＞0.05).结论 肽类生长因子可以通过磷酸化激活Akt激酶,这一过程依赖于H2O2的产生和抑癌基因PTEN的存在.
-
PTEN基因敲除降低辐射敏感性及其机制
目的 探讨PTEN基因敲除对辐射敏感性的影响及机制.方法 采用流式细胞术检测MEF1和MEF1/PTEN-/-细胞内ROS水平;采用Western blot方法,检测H2O2和DPI预处理后AKT激酶的表达变化;采用细胞克隆形成率试验分析细胞对60Co γ射线的敏感性.结果 PTEN基因敲除后细胞ROS水平增加,辐射敏感性降低.H2O2和DPI预处理后影响MEF1细胞AKT激酶活性,但对MEF1/Pten-/-细胞无影响.结论 PTEN基因敲除阻断了ROS对AKT的介导,AKT激酶持续活化,可能是辐射敏感性降低的重要原因.
-
汉防己甲素对MCF-7细胞Akt激酶活性影响的研究
目的 探讨汉防己甲素诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的分子机制.方法 采用流式细胞法测定不同浓度汉防己甲素(1、5、10 μmol· L-1)诱导MCF-7凋亡率;免疫印迹法检测汉防己甲素对MCF-7细胞总Akt及p-Akt ser437、p-Akt Thr308表达的影响;Akt激酶活性检测试剂盒检测Akt激酶活性的改变.结果 不同浓度的Tet(1、5、10 μmol· L-1)对培养的乳腺癌细胞MCF-7可有效的诱导凋亡;同时Tet可以有效的抑制p-Akt”r437、p-Akt Thr308蛋白表达,但对总Akt蛋白的表达没有影响.Akt激酶活性的分析显示:不同浓度的Tet处理MCF-7细胞48 h后,磷酸化的GSK3α/β蛋白浓度逐渐下降,间接提示Akt激酶活性下降.结论 汉防己碱可能通过抑制Akt激酶活性并影响其下游的信号途径诱导乳腺癌细胞凋亡.
-
疏肝益阳胶囊对动脉性勃起功能障碍大鼠VEGF、IGF及Akt1激酶表达的影响
目的:血管内皮生长因子( VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)等在维持血管内皮功能中起到重要的作用,蛋白激酶B(Akt1)是细胞内信号转导通路的重要分子.本研究通过检测动脉性勃起功能障碍(AED)大鼠VEGF、IGF及Akt1激酶表达和磷酸化,探讨中药疏肝益阳胶囊治疗AED的分子机制. 方法:选取3月龄成年雄性SD大鼠60只,采用双侧髂内动脉结扎法制造阴茎勃起障碍模型.设假手术对照组、模型组、西地那非组[10.5 mg/(kg·d)]、疏肝益阳小剂量治疗组[0.5g/(kg·d)]、大剂量治疗组[1g/(kg·d)],灌胃给药疗程30 d.疗程结束后取海绵体组织,荧光定量PCR法检测VEGF、IGF表达,Western印迹法检测Akt1蛋白表达和磷酸化.颈动脉取血,ELISA法检测血浆VEGF、IGF含量. 结果:大剂量治疗组VEGF、IGF mRNA相对表达量分别为0.77 ±0.04和0.78 ±0.05,血浆VEGF、IGF含量分别为(95.83±37.34) pg/ml和(20.45±3.83) ng/ml,p-Akt1/Akt1表达量为1.43 ±0.50；模型组VEGF、IGF mRNA相对表达量分别0.41 ±0.06和0.42 ±0.06,血浆VEGF、IGF含量分别为(28.59±24.97) pg/ml和(15.82±4.37) ng/ml,p-Akt1/Akt1表达量为0.93±0.14.大剂量治疗组以上指标均较模型组明显升高(P＜0.05).小剂量治疗组除血浆IGF含量外,也较模型组明显升高(P＜0.05).结论:疏肝益阳胶囊可显著增加AED大鼠阴茎海绵体组织VEGF、IGF和Akt1表达,对血管内皮功能具有改善作用.这可能是其治疗动脉性ED的重要机制.
-
慢性氟中毒大鼠学习记忆损害与AKT激酶表达
目的:观察实验性慢性氟中毒大鼠脑组织中AKT激酶(AKT)表达及其学习记忆能力损害,探讨氟中毒大鼠脑组织中AKT蛋白表达水平与其学习记忆能力降低的关系.方法:SD大鼠72只,随机分为对照组、低剂量染氟组、高剂量染氟组,每组24只,雌雄各半,实验期6个月;观察氟中毒表现,Morris水迷宫检测实验大鼠学习记忆能力;分别用蛋白印迹(Western-blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠脑组织中AKT蛋白与AKT mRNA的表达.结果:经6个月饲养,低剂量及高剂量染氟组大鼠出现不同程度慢性氟中毒表现;Morris水迷宫实验中定向航行实验结果显示,高剂量染氟大鼠找台时间较对照组延长,空间探索实验显示氟中毒大鼠平台区停留时间较对照组减少(P＜0.05);与正常对照组相比,高剂量及低剂量染氟组大鼠脑组织中AKT蛋白表达量增加(P＜0.05),但脑组织中AKT mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:慢性氟中毒可导致大鼠学习记忆能力的降低,其机制可能与大鼠脑组织中AKT蛋白表达量增加有关.
-
蛋白激酶Akt在肝组织再生过程中的作用
目的 探讨蛋白激酶PI3K/Akt信号途径在肝组织再生中的作用.方法 采用切除小鼠肝组织2/3的部分切除法,制成小鼠肝再生模型;小鼠体内肝组织P13K的活性用腹腔注射Wortmannin来抑制.分别采用westem blot和RT-RCR方法 检测Akt磷酸化水平和增殖细胞核抗原PCNA mRNA表达.结果小鼠肝组织部分切除48 h后,PCNA基因表达显著升高,表明肝组织再生发生.小鼠肝组织部分切除24 h后,Akt磷酸化水平明显升高.PI3K特异性抑制剂wortmannin显著抑制Akt磷酸化水平和PCNA基因表达.结论 PI3K/Akt信号途径在小鼠肝组织再生过程中起重要作用.
-
激动型抗4-1BB抗体3H3交联促进CD8+T细胞中Akt激酶活性
目的:研究4-1BB信号促进CD8+ T细胞增殖、存活及Akt活性的变化.方法:利用小鼠CD8α+ T细胞磁珠负性分选试剂盒制备高纯度CD8+ T细胞, 并通过体外抗CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化CD8+ T细胞.再通过流式细胞术(FCM)分析3H3交联与否, 四唑盐(WST-1)/ECS检测CD8+ T细胞的增殖程度, Annexin V检测抗凋亡能力, 免疫印迹法分析胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性.结果:3H3交联可以明显促进活化的CD8+ T细胞增殖和存活, 并且3H3介导的4-1BB信号可明显促进CD8+ T细胞内Akt磷酸化水平及Akt激酶活性.结论:Akt途径可能参与了3H3交联介导的4-1BB信号对CD8+ T细胞增殖与存活的调节效应.
