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重组乙型肝炎表面抗原(汉逊酵母菌表达)免疫小鼠后不同细胞免疫测定方法的比较研究
目的 探讨不同细胞免疫测定方法 对小鼠免疫乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 后细胞免疫应答测定的影响.方法 小鼠皮下接种 HBsAg,于免疫后 4、7、10、14 和 25 d 分离脾单个核细胞(MNC),应用酶联斑点法(ELISPOT) 测定 MNC 细胞体外刺激后所产生的细胞因子 IFN-γ斑点形成细胞计数(SFC),其中刺激物选择多肽和 HBsAg;流式荧光检测技术(Luminex)测定 MNC 体外经 HBsAg 刺激后所产生的细胞因子 IFN-γ、IL-4、IL-5 和 IL-10 含量;小鼠血清检测抗-HBs.结果 小鼠接种 HBsAg 后,应用 ELISPOT 法测定, 7 d 和 14 d 小鼠 IFN-γ阳转率分别为 60% 和 80%;而应用 Luminex 方法 测定,7 d 和 14 d 小鼠 IFN-γ阳转率均为 80%;IL-4、IL-5、IL-10 阳转率分别为 60%,80%;100%,100%;80%,100%;25d 时,IFN-γ与 14 d 比较统计学上差异有统计学意义( P25,14 d=0.030,＜0.05),而 IL-5、IL-10 和 IL-4 与 14 d 比较差异均无统计学意义 ( P＞0.05 ).抗-HBs 水平随时间而呈上升趋势.结论 Elispot 和 Luminex 法测定小鼠 IFN-γ应答符合率高,小鼠接种单针 HBsAg 后细胞免疫应答高峰为免疫后 7～14 d.25 d 时 IFN-γ分泌水平随抗-HBs 抗体水平升高而下降,而 IL-4、IL-5、IL-10 分泌继续保持较高水平.
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Luminex法检测肾移植受者体内抗HLA抗体的方法学分析
目的 比较Luminex技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法对肾移植受者血清中抗人类组织相容性抗原(HLA)抗体的检测差异及其与移植术后排斥反应的关系.方法 对2017年1-10月接受肾移植的120例受者中,同时应用Luminex和ELISA两种方法检测肾移植患者血清中的抗HLA抗体,并记录术后发生排斥反应的情况.结果 用Luminex技术检测抗HLA-Ⅰ类抗体阳性率为20.8％(25/120),检测抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率为32.5％(39/120);用ELISA法检测抗HLA-Ⅰ类抗体阳性率为8.3％(10/120),检测抗HLA-Ⅱ类抗体阳性率为15.0％(18/120);两种方法检测抗HLA-Ⅰ类、Ⅱ类抗体阳性率的差异有统计学意义(P＜0.05).用Luminex技术检测51例术前抗HLA抗体阳性者有12例术后发生排斥反应,69例术前抗HLA抗体阴性者有5例术后发生排斥反应;用ELISA法检测20例术前抗HLA抗体阳性者有3例术后发生排斥反应,100例术前抗HLA抗体阴性者有14例术后发生排斥反应,两种方法检测的抗体阳性中排斥反应发生率差异有统计学意义(P＜0.05),两种方法检测的抗体阴性中排斥反应发生率差异也有统计学意义(P＜0.05).结论 Luminex技术与ELISA法相比,检测肾移植受者体内抗HLA抗体的检出率高,而且对移植后排斥反应的监测有重要的诊断意义.
