北京市门头沟区2015—2016年Victoria系乙型流感病毒HA1基因特征分析

目的 了解北京市门头沟区2015—2016年分离的Victoria系乙型流感病毒血凝素HA1基因变异特征,分析流行株与我国疫苗株的匹配情况,为乙型流感防控提供依据.方法 对狗肾传代细胞(MDCK)培养分离得到的14株Victoria系乙型流感病毒进行核酸提取,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒HA1基因后进行核苷酸序列测定,采用邻接法进行遗传进化树分析.结果 2015—2016年北京市门头沟区流行的乙型流感病毒以Victoria系为主.分离并测序的14株Victoria系乙型流感病毒HA1基因与WHO推荐的2016—2017年流感疫苗株B/Brisbane/60/2008(FJ766842)和国内代表株B/JilinNanguan/1223/2016(EPI768805)亲缘性更近.与B/Brisbane/60/2008和B/JilinNanguan/1223/2016(EPI768805)的HA1区的氨基酸相比,所有毒株都在2个位点发生氨基酸替换,个别毒株也会在其他个别位点发生点突变,变异涉及1个抗原决定簇.而与WHO推荐的2015—2016年Yamagata系疫苗株B/Phuket/3073/2013(EPI608074)亲缘关系稍远一些.结论 在2015—2016年流感监测季中,北京市门头沟区乙型流感病毒以Victoria系为优势流行株.而WHO推荐的乙型流感疫苗株为Yamagata系,可见疫苗株与本区流行株匹配性不佳.

2012-2013流感监测年度中国大陆B型流感病毒抗原性及基因特性分析

目的 了解2012-2013流感监测年度中国大陆地区B型流感的流行状况,分析B型流感病毒的抗原性和基因变异情况.方法 选择2012-2013年我国分离的B型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析.利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用Neighbor-Joining方法进行种系进化分析,通过基因进化树比较国内流行株与疫苗株的差异.结果 2012-2013监测年度内,B型流感病毒占所有流感病毒的9.93％,其中以B型Victoria系流感病毒为主.B型Victoria系流感病毒的抗原性与上一年度WHO推荐的疫苗株B/Brisbane/60/2008(83.5％)以及我国代表株B/Chongqing-Yuzhong/1384/2010(94.7％)的抗原性类似;而B型Yamagata系流感病毒绝大多数为WHO疫苗株B/Wisconsin/01/2010(99.3％)、WHO疫苗种子株B/Hubei-Wujiagang/158/2009 (98.0％)的类似株;基因特性分析显示有l株B-Victoria系病毒发生了HA与NA基因分支间的重配,有1株B-Yamagata系病毒B/Sichuan-Gaoxin/1110/2012的NA基因位于Victoria系病毒的NA进化分支,也表明发生了种系间的基因重配.结论 2012-2013流感监测年度我国B型流感病毒活动水平较低,主要以Victoria系为主,而WHO推荐的疫苗组分是B-Yamagata系病毒,可见部分B型流感流行株与疫苗株并不匹配.

2009-2012年浙江省湖州市甲3亚型流行株基因特性分析

目的 分析2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒主要抗原基因血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)的分子变异特征.方法 选择浙江省湖州市2009-2012年流感流行期间分离的甲3亚型代表株11株,提取病毒RNA,扩增HA1和NA基因,进行序列测定,用MegAlign软件分析处理.结果 湖州市近几年甲3亚型流感流行株在HA1区的核苷酸长度均为987 bp,编码329个氨基酸；在NA区的核苷酸长度为1362 bp,编码454个氨基酸.2009-2012年甲3亚型流感病毒分离株HA1区与NA区的氨基酸同源性分别在94.7％～99.9％与96.2％～ 100.0％之间,HA1区的变异较NA区更大.4个流感流行期分离的甲3亚型流感毒株相比HA和NA发生了多个氨基酸位点的替换.此外,近几年来世界卫生组织推荐的甲3亚型流感疫苗株与当年的流感流行株之间存在一定的差异.结论 2009-2012年湖州市甲3亚型流感病毒流行株发生明显变异,基因重配和抗原漂移是病毒发生变异的主要机制.

描述麻疹野病毒基因特性的命名

流感大流行的威胁及中国的应对

流感大流行是指在人群中出现流感病毒血凝素新亚型的毒株,它的抗原性及基因特性与当时人群中流行的流感病毒株毫无相关,即不是由当时人群中流行的甲型流感病毒通过基因突变而来;大部分人群对新亚型毒株缺乏免疫力;新亚型毒株具有较强的人传人能力,有较高的感染率、发病率和死亡率;传播速度快,超出国界和洲界,在一年内波及全球.

长沙市2009年甲型H1N1流感病毒血凝素基因特性分析

2009年4月21日,美国疾病预防控制中心(CDC)检出2名儿童感染新甲型H1N1流感病毒~[1],该病毒属于正黏病毒科(orthomyxoviridae),甲型流感病毒属(influenza virus A),单股负链RNA病毒,由大小不等的8个独立片段组成,共编码11种蛋白,主要通过飞沫或气溶胶经呼吸道传播,极易造成流行.

湖南省2006-2009年人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)分子特征研究

目的 分析湖南省2006-2009年4例人感染高致病性禽流感病例感染病毒的可能来源、基因重配情况以及分子特征.方法 鸡胚分离核酸检测H5N1病毒阳性标本,获得高致病性H5N1病毒,对病毒进行全基因组序列测定,采用BLAST和MEGA4.0进行同源性比对、基因进化分析和各基因分子特征分析.结果 4株病毒的基因片段均为禽源,并未发现与人季节性流感病毒之间发生重配,且与当地禽类中分离的病毒高度同源.全基因组进化树分析显示,4株病毒在分支2.3.4中,2株为基因型V、2株为新的基因型.分子特征分析显示,4株病毒的血凝素(HA)分子裂解位点均为PLRERRKR/G,均出现A160T位点突变,神经氨酸酶(NA)分子49～68位均出现20个氨基酸(aa)缺失,非结构蛋白1(NSI)分子80～84位均出现5个aa的缺失.在HA分子大部分位点,4株病毒仍然表现出与禽类受体的亲和性,HN/1/09和HN/2/09出现可能使病毒对α-2,6连接的唾液酸人类受体的亲和性增强的T192I突变.HN/1/08的PB2基因出现增加小鼠致病力的D701N改变.耐药性基因片段分析显示,4株病毒对金刚烷胺和奥司他韦均敏感.结论 2006-2009年湖南省4株人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)为禽源,但存在多种基因型,而且发生了部分位点的突变.

浙江省2002-2006年禽流感H5N1病毒基因特性与进化重组分析

目的 对近年来浙江省禽流感病毒H5N1分离株的基因特性与进化重组特征进行分析.方法 通过对2002-2006年浙江省禽与人的H5N1病毒株进行全基因序列测定,采用Mega 3.0生物信息学软件分析病毒株基因特性并与相关基因型标准病毒株进行系统进化分析.结果 2002-2006年浙江省HSNl病毒株HA序列裂解位点序列含多个碱性氨基酸,符合高致病性禽流感病毒特征;与Gs/Guangdong/1/96相比,除Dk/Zhejiang/2/02和Ck/Zhejiang/8/03株外其他病毒株均在NA蛋白茎区缺失20个氨基酸.全基因系统进化分析表明,2002-2003年的分离株遗传基因基本属于当年流行的B、W、X、Y、z等基因型,但部分病毒株不同基因片段属于不同基因型.结论 浙江省禽类中也广泛存在H5N1的基因片段重组现象,2005年后的Ck/Zhejiang/24/05株及人H5N1 Zhejiang/16/06株各遗传基因基本上稳定于近年大陆流行的FJ-like基因型.

浙江省1998-2005年甲3亚型流感病毒株HA1区和NA区基因特性分析

目的 分析近几年浙江省甲3亚型流行性感冒(流感)流行株血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因的特性、变异与流感流行的关系.方法 选择浙江省1998-2005年流感流行期间分离的甲3亚型代表株25株,提取病毒RNA,扩增HA1和NA基因,进行序列测定,用BioEdit软件分析处理.结果 浙江省近几年甲3亚型流感流行株在HA1区的核苷酸长度均为987 bp,编码329个氨基酸;在NA区的核苷酸长度为1362 bp,编码454个氨基酸.1998-2005年甲3亚型流感病毒HA1区与NA区的氨基酸同源性分别在90.9%～99.3%与95.2%～99.5%之间,HA1区的变异较NA区更大.这8年间在HA1区共发生了 30个氨基酸的替代,其中14个氨基酸位点涉及HA1区的4个抗原决定簇;NA区发生了21个氨基酸替代,其中5个氨基酸位点涉及NA区的3个抗原决定簇.在1998与2002年无论是HA1区还是NA区,均产生了较大的变异,在氨基酸进化树上也形成了独立的分支.近年的甲3亚型毒株HA1区有11个糖基化位点,较早期毒株A/Aichi/2/68增加了5个,仅1998年至今的8年中就增加了3个.结论 浙江省1998与2002年的二次较大规模的甲3亚型流感流行均与病毒的抗原性漂移有关.

浙江省人禽流感病毒Zhejiang/16/2006株的基因特性分析

目的 分析浙江省首例报道的人禽流感H5N1病毒株A/Zhejiang/16/2006的基因特性与系统进化关系.方法 对A/Zhejiang/16/2006病毒株的全序列8个基因片段作序列测定,并与国内外相关病毒株进行同源性与系统进化比较.结果 A/zhejiang/16/2006的HA序列,与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在11个氨基酸的差异,但这些差异并未影响到相关糖基化位点的稳定;在NA区,1997年以后的毒株均缺少第49～68位的20个氨基酸.总体上中国大陆近年H5N1毒株的8个基因片段与周边国家和地区毒株相比形成另一个分支,并与1996-1997年香港及广东的H5N1毒株之间存在较大差异,但有个别毒株的基因片段在系统进化树上远离当前的毒株而更接近1997年的病毒株.结论 A/zhejiang/16/2006与中国大陆近年的病毒株自成一个体系,与周边国家和地区的H5N1病毒株之间存在一定差异.

2005～2006年湖南省人感染高致病性禽流感(H5N1)实验室诊断及病毒基因特性研究

为了对2005～2006年湖南省2例不明原因肺炎病例进行实验室诊断,确定病因以及对其进行病原学研究,采集病例呼吸道标本和血清标本,对呼吸道标本采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Real-time RT-PCR)和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测H5亚型禽流感病毒核酸,对血清标本采用血凝抑制试验检测特异性抗体,并对其中1例死亡病例(病例2)的肺穿刺物标本进行病毒分离,所获毒株予以测序及同源性分析.结果显示,2例病例H5亚型禽流感病毒核酸检测均为阳性,病例1恢复期血清H5N1特异性抗体阳性,并且较急性期血清呈4倍以上增长;病例2急性期血清特异性抗体阴性,2例均为人感染高致病性禽流感病毒(H5N1)确诊病例.从病例2分离得到毒株A/Hunan/1/2006,测序及分子特性分析表明,其8个基因片段均为禽源,且与湖南本地禽类分离的病毒相似,并未与人流感病毒发生基因重组或产生显著变异.

湖南省2009～2011年甲型H1N1流感哨点监测病原学结果及病毒基因特性分析

了解和掌握2009～2011年湖南省甲型H1N1流感流行动态和变化规律,掌握甲型H1N1流感流行株基因特性及耐药性情况.收集哨点医院采集的流感样病例咽拭子标本,通过荧光PCR法或病毒分离法对流感病毒进行检测,选取部分阳性毒株进行基因序列测定,序列使用MEGA 5.05软件完成进化分析.2009年第20周至2011年52周,共检测标本17773份,检出流感阳性标本3831份,检测阳性率为21.6％,其中甲型H1N1流感阳性标本1794份,占流感阳性的比例为46.8％.甲型H1N1流感共有2个流行高峰,分别出现在2009年第41～53周和2011年第1～12周.测序的23株毒株HA基因亲缘关系较近,病毒在基因进化树中基本上按照时间顺序分布.全基因组序列分析显示7株毒株的所有8个基因片段均与疫苗株同源,并未发现基因重配.23株毒株的HA氨基酸位点相对于疫苗株高度相似(同源性为98.2％～100％),但均有P83S、S203T和I321V的突变.在A/Hunan/YQ30/2009毒株中发现了可能导致病毒毒力增强的222位点突变,突变为D222E.所有检出毒株均未发现对奥斯他韦耐药性的突变.2009～2011年湖南省甲型H1N1流感流行呈双峰分布,未发现病毒基因发生大规模变异,临床上使用奥斯他韦仍然是有效的.

2013～2014年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析

为分析2013～2014流感监测年度中国大陆地区H3N2亚型流感病毒的抗原性和基因变异情况,本文选择了本监测年度中国分离的H3N2亚型流感病毒,利用标准雪貂抗血清进行抗原性分析,利用Sanger测序法进行病毒基因测序,采用邻位相临法(Neighbor-Joining,N-J)方法进行种系进化分析,分析我国H3N2亚型流感病毒的变异情况,进一步比较其与疫苗株的匹配性.抗原分析显示,本监测年度H3N2亚型流感病毒大部分为疫苗株A/Vie-toria/361/2011细胞株的类似株(99.6％),但以A/Texas/50/2012鸡胚株为参考抗原,只有15.1％为类似株,仅有11.9％与中国流行株的鸡胚分离株A/Shanghai-Changning/1507/2012抗原性类似.HA基因特性分析显示我国毒株均位于同一大分支,NA基因没有发现与耐药性相关的氨基酸位点突变.总之,2013～2014流感监测年度我国H3N2亚型流感病毒在流行过程中未发生明显变异,但病毒在鸡胚中传代会导致关键氨基酸位点变异.应及时分析并发现我国病毒的抗原性和基因特性变异情况,推选出更适合我国的疫苗株.

Vero 细胞流感疫苗应用前景

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其病毒基因组为单股负链分节段的RNA,外有包膜.根据病毒核壳蛋白(NP)和膜蛋白(MP)抗原特性及其基因特性的不同,分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型,甲型根据其表面(HA、NA)结构及其基因特性的不同又分为许多亚型,乙和丙型没有亚型,其中甲型和乙型流感病毒与人类有密切关联[1],如1918～1919年暴发的西班牙流感(H1N1)、1957年的亚洲流感(H2N2)、1968年的香港流感(H3N2)和1977年俄国流感(H1N1),每次大流行都造成了巨大的人力资源和物力资源的损失,在美国,每年平均20,000人死于流感.自1968年起大多数流感病毒的新变种都首发于中国,并且近来的研究表明,历史上的4次流感暴发,后3次出现的新亚型流感病毒均首发于中国.

药物基因组学和药物基因组计划

药物基因组学(Pharmacogenomics)和药物基因组计划(Pharmacogenomics prcoject,PGP)是在人类基因组(HGP )基础上发展起来的功能基因组内容之一.药物基因组学是研究影响药物吸收,转运、代谢和清除整个过程的个体差异的基因特性.由于基因多态性所致个体对药物的不同反应-药物反应的遗传基础,即有关基因和基因变异与药物效应个体差异之间的关系,并由此开发新药物 .以达到根据个体化的合理用药.所以,基因的多态性是药物基因组学的基础.药物基因组学是一个新型的交叉学科,使药物治疗的模式由诊断定向转为基因定向治疗.

2010-2016年唐山市H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析

目的 了解2010-2016年唐山市分离的H3N2亚型流感病毒株血凝素HA基因特征和变异规律. 方法 随机选取2010一2016年唐山市分离的20株H3N2亚流感毒株提取RNA,采用RT-PCR扩增目的片段,测序,采用MEGA 6.0软件构建HA基因核苷酸系统进化树,采用BioEdit v7.2.5软件比较分析其核苷酸序列特征及氨基酸变异情况. 结果 0株病毒HA1区核苷酸和氨基酸同源性分别为92.4％和89.1％.系统进化和序列分析显示,2010-2011流行年度分离的5株病毒分别属于HA基因1和5分支,其中1分支毒株在抗原决定簇发生E50K,I260M,R261Q氨基酸替换,5分支毒株发生D53N、Y94H、I230V和E280A替换;2011-2016流行年度分离的15株H3N2亚型病毒属于3C分支,与疫苗株A/Perth/16/2009比较抗原表位发生S45N、T48I、A198S、N278K和N312S位点突变,并逐年进化为3C.1(2010-2011)、3@2012/13 (2012-2013)、3C.3(2013-2014)、3C.3a (2014-2015)和3C.2a (2015-2016)分支.与相应疫苗株相比,3C.3a和3C.2a分支毒株抗原表位A、B及受体结合部位均发生了氨基酸位点突变,其中3C.2a毒株拥有Q311H(C区)和N171K(D区)位点突变. 结论 2010-2016年唐山市分离株A/H3N2亚型流感病毒发生抗原漂移,未来应关注3C.2a分支流行株的变化.

2004-2005年中国A(H1N1)亚型流感病毒抗原性及基因特性研究

目的阐明2004-2005年中国流行的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素抗原性及其基因变异情况.方法对2004-2005年分离的A(H1N1)亚型毒株先进行单向血凝抑制试验;在此基础上选取不同时间、地点的A(H1N1)亚型流感毒株进行血凝素基因HA1区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后进行基因进化特性分析.结果单向血凝抑制实验结果表明,2004年A(H1N1)亚型病毒株对鉴定血清的血凝抑制效价与A/Shanghai/1/1999(H1N1)毒株没有4倍差异;2005年分离的A(H1H1)亚型毒株中有62株(占6.2%)病毒与A/Shanghai/1/1999(H1N1)毒株本身的血凝抑制效价相比有4倍差异.HA1区核苷酸序列和氨基酸序列分析表明,我国2005年分离到的A(H1N1)亚型流感病毒株有以下位点发生变异,54 K＞R、90T＞K、101Y＞H、149R＞K、169V＞A、190D＞N、212R＞K、219K＞R、245W＞R、246Y＞F、258T＞N、318V＞A,其中54、190位氨基酸位于抗原决定簇.结论我国2005年分离的A(H1N1)亚型流感毒株基因特性和抗原性已开始发生变异.

2014-2015监测年度中国B型流感病毒病原学特征分析

目的 分析2014-2015流感监测年度我国B型流感病毒的流行情况及与流感疫苗株的匹配性.方法 选择本监测年度中国分离的B型流感病毒,进行抗原性分析并对全基因组进行测序,构建进化树,分析我国B型流感病毒的变异情况,并比较其与疫苗株的匹配性.结果 本年度我国B型流感病毒活动水平较低,占所有收检病毒的29.94％,而B型流感病毒中Yamagata系毒株明显多于Victoria系.抗原性分析显示,Yamagata系流感病毒绝大部分为疫苗株B/Massachusetts/2/2012的类似株(95.1％),而Victoria系病毒只有48.3％为四价流感疫苗组分B/Brisbane/60/2008的类似株,但与我国Victoria系流行代表株B/北京海淀/1386/2013抗原类似的比例为100％.基因特性分析显示有19株Yamagata系毒株为BY-HA/BV-NA系间重配毒株.分析NA基因的耐药位点发现8株Yamagata系病毒有已知的敏感性降低的氨基酸位点突变.结论 2014-2015流感监测年度我国B型Yamagata系病毒与疫苗株匹配较好,但Victoria系病毒与四价疫苗株匹配性不佳,因此应及时分析我国流行病毒的抗原性和基因特性,推选出与我国流行病毒相匹配的疫苗株.

2014-2015监测年度中国H3N2亚型流感病毒病原学特征分析

目的 分析我国大陆地区2014-2015流感监测年度分离的H3N2亚型流感病毒抗原性和基因变异情况以及与疫苗株的匹配性,为制定流感的预防和控制策略提供依据.方法 利用血凝抑制试验,对2014年4月至2015年3月中国大陆分离的2 516株H3N2型流感毒株进行了抗原性分析;对分离自全国不同省份的70株病毒进行了序列测定和序列分析.结果 2014-2015流感监测年度我国大陆地区主要流行3C.3a分支的H3N2亚型流感病毒,2014年10月份开始检测到3C.2a分支的毒株.两分支的毒株与疫苗株相比,在抗原决定簇A区和B区,受体结合部位均发生了氨基酸位点突变;抗原性分析结果显示检测毒株中有高达95.1％为疫苗株A/TX/50/12鸡胚株的低反应株.结论 本监测年度我国大陆地区流行的绝大部分H3N2亚型流感病毒与WHO推荐的疫苗组分A/TX/50/12匹配性不好,应加强病毒变异监测,建立我国流感疫苗株构建平台,提高流感疫苗的有效性.

013不明原因不孕妇女人FORMIN-2(FMN2)基因特性和突变分析

在不孕夫妇中,约15%未查到确切的致病原因.对不孕夫妇的标准治疗集中在提高产生配子的质量和改善其输送以及卵母细胞内在的因素等方面.原始卵母细胞从第一次减数分裂前期停滞到第二次减数分裂中期停滞的成熟是由体内黄体生成激素(LH)峰诱发的.该过程结果导致发育中的卵母细胞胞质的不平衡分裂,并且通过第一极体的排出,卵母细胞的遗传物质由4n减少至2n.