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立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立
目的采用TaqMan-MGB探针建立立氏立克次体实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法.方法依据立氏立克次体外膜蛋白B基因序列设计引物和探针,以克隆的ompB基因片段为DNA模板,在ABI 7900型荧光定量PCR检测仪上建立实时荧光定量PCR检测方法.结果建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数呈线性关系(R2=0.996),低检测浓度为5拷贝/μl;用荧光定量PCR方法检测其他相关立克次体和常见非立克次体病原菌,检出结果均为阴性.用该方法检测立氏立克次体感染的豚鼠血液标本、小鼠脾脏标本及细胞培养标本,检测的结果与立氏立克次体感染相关.结论研究建立的检测立氏立克次体实时荧光定量PCR方法具有高特异性和高敏感性,适用于快速检测各种样本中的立氏立克次体和立氏立克次体感染早期的实验室诊断.
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斑点热疫苗研究进展
斑点热是斑点热群立克次体引起的一类重要传染病,接种疫苗仍是预防斑点热的一种重要措施. 灭活立氏立克次体接种能够刺激实验动物产生特异性体液和细胞免疫,有效对抗该立克次体的致死性攻击,但对人体免疫的保护效果并不理想. 目前已发现的斑点热群立克次体的保护性抗原主要有外膜蛋白A、外膜蛋白B、YbgF和Adr2等表面蛋白,是研发斑点热分子疫苗的潜在候选分子. 单个保护性抗原免疫虽然能够诱导动物产生良好的特异性体液和细胞免疫应答,但是不能提供完全保护. 多个保护性抗原组合或保护性抗原的T和B淋巴细胞表位组合是研发斑点热分子疫苗的有效途径.
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立氏立克次体外膜蛋白H基因片段的克隆表达与免疫原性分析
目的:克隆表达立克立克次体(Rickettsia rickettsii)外膜蛋白H基因(ompH)片段并对其进行免疫原性分析.方法:采用PCR技术从立氏立克次体基因组中扩增ompH基因片段.将该基因片段与原核表达载体pET32a连接,构建重组原核表达质粒pET32a/ompH;将pET32a/ompH转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因.结果:获得长为327bp的ompH基因片段,SDS-PAGE分析发现pET32a/ompH转化菌表达了大小约27kDa蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫豚鼠血清及斑点热患者血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,经该重组蛋白免疫血清中和后的立氏立克次体感染VERO活力减低.结论:pET32a/ompH转化的大肠杆菌表达了ompH基因片段,所产生的重组蛋白具有良好的免疫反应性及保护性.
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立氏立克次体外膜蛋白B基因片段的克隆与表达
目的立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)外膜蛋白B(OmpB)基因(ompB)片段的克隆与表达.方法采用PCR方法,从立氏立克次体基因组中扩增其ompB基因片段,将该基因片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组原核表达质粒pQE30/ompB;将pQE30/ompB转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因.结果获得长为1188bp的ompB基因片段,SDS-PAGE分析发现pQE30/ompB转化菌表达了一44kDa蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫兔血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,与其它立克次体免疫血清反应呈阴性,用该重组蛋白免疫血清做间接免疫荧光,检测立氏立克次体结果为阳性,而检测贝氏柯克斯体、恙虫病立克次体和普氏立克次体的结果为阴性.结论 pQE30/ompB转化的大肠杆菌表达了ompB基因片段,所产生的重组蛋白具有立氏立克次体抗原特异性和良好的免疫反应性.
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我国斑点热病原学研究进展
斑点热群立克次体是立克次体属中种类多的一群,<伯杰氏系统细菌学手册>1984年版收录了8种,包括立氏立克次体(Rickettsia rickettsii)、西伯利亚立克次体(R.sibirica)、康氏立克次体(R.conorii)、小蛛立克次体(R.akari)、澳大利亚立克次体(R.australia)、派氏立克次体(R.parkeri)、蒙他拿立克次体(R.montana)和扇头蜱立克次体(R.rhipicephali).其中前5种对人致病,后三种的致病作用尚未肯定.
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普氏立克次体120kDa表面抗原N端和C端重组蛋白的抗原特异性研究
免疫印迹分析证明N端重组蛋白和C端重组蛋白均能与普氏立克次体免疫血清特异反应,N端重组蛋白仅与立氏立克次体免疫血清发生交叉反应,C端重组蛋白则与立克次体属的立氏立克次体和莫氏立克次体免疫血清发生交叉反应.用ELISA分析重组蛋白与各种相关病原体免疫血清的交叉反应,发现N端重组蛋白和C端重组蛋白与立克次体属内的立克次体免疫血清有较强的交叉反应,但是与贝氏柯克斯体、恙虫病东方体以及其它病原体免疫血清无交叉反应,提示N端重组蛋白和C端重组蛋白具有立克次体属特异性.
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立氏立克次体外膜蛋白B基因片段的克隆与表达
采用PCR方法,从立氏立克次体基因组中扩增长为1188bp的ompB基因片段,将该基因片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组原核表达质粒pQE30/ompB;将pQE30/ompB转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因.SDS-PAGE分析发现pQE30/ompB转化菌表达了一44kDa重组蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫兔血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,与其它立克次体免疫血清反应呈阴性,用该重组蛋白免疫血清做间接免疫荧光,检测立氏立克次体结果为阳性,而检测贝氏柯克斯体、恙虫病立克次体和普氏立克次体的结果为阴性.本研究证明pQE30/ompB转化的大肠杆菌表达了ompB基因片段,所产生的重组蛋白具有立氏立克次体抗原特异性和良好的免疫反应性.
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LANCET对2005年神经科领域的回顾
1神经感染疾病:全球面临的威胁在2005年中,带状疱疹的预防领域取得了一定成就,然而立氏立克次体和流感病毒感染似乎有卷土重来之势.
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立氏立克次体研究文献的趋势分析
目的 依据立氏立克次体领域的相关文献,从科技文献和专利文献两个方面系统的分析动态前沿、发展概况,为技术科研人员提供事实依据.方法 基于Web of Knowledge核心合集数据库、Thomson Innovation采集文献,结合TDA分析软件进行文献的综合分析.结果 通过文献计量可视化分析显示,立氏立克次体研究有很大的探索价值和意义、主要以欧美国家为主,其中巴尔的摩分校、美国疾病预防控制中心、法国艾克斯-马赛大学研究实力较强,我国与国际相关研究机构尚存在一定差距.国际间合作不密切.目前该领域研究的主要内容为方法检测、预防与应用、对抗体、疫苗的类型及中毒机制机理的研究.结论 我国应加强立氏立克次体的研究,提高整体研究实力,为今后疾病防治工作提供科学依据.
