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邻苯二甲酸二乙基己酯对小鼠初级精母细胞氧化应激及凋亡的影响
目的 研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)氧化应激及凋亡的影响.方法 体外传代培养永生化的GC-2 spd细胞,用二甲基亚砜(DMSO)溶解DEHP,以DMSO浓度为0.1％的细胞孔作为对照组,用DEHP终浓度为50、100和200 μmol/L的细胞孔作为低、中、高剂量组染毒24 h.分光光度计法测定GC-2 spd细胞丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,流式细胞仪检测不同剂量组细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,DEHP低、中、高剂量染毒组MDA含量依次升高,差异无明显统计学意义(P ＞0.05);SOD活力在DEHP高剂量染毒组下降,差异有统计学意义(P ＜0.05);DEHP低、中剂量染毒组GSH-Px活力明显下降,且差异有统计学意义(P＜0.05).DEHP中、高剂量染毒组细胞凋亡明显高于对照组,且差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DEHP可通过诱发小鼠生精细胞氧化应激而诱导细胞凋亡.
关键词： 邻苯二甲酸二乙基己酯 氧化应激 细胞凋亡 GC-2 spd细胞 -
邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响
目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响.方法 将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200 μmol/L DEHP的培养液培养24 h.分别用qRT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达.结果 100、200μmol/LDEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasLmRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势.结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,终导致生精细胞凋亡.
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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶蛋白及mRNA表达的影响
目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)蛋白及mRNA表达的影响.方法 将体外培养的处于对数生长期的GC-2 spd细胞暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200 μmol/L DEHP的培养基中培养24 h.采用Real-time PCR法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA的表达,采用Western blotting法检测细胞caspase-3蛋白酶原(procaspase-3)、procaspase-8 、procaspase-9的表达.结果 与溶剂对照组比较,100 μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-3 mRNA的表达水平和200 μmol/LDEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-8 mRNA的表达水平及50、200 μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-9mRNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).与溶剂对照组比较,100、200 μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞proc aspase-3、 procaspase-8、 procaspase-9的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9的表达水平均呈下降趋势.结论 DEHP体外染毒可能通过启动caspase-8和caspase-9进而激活下游caspase-3级联反应,终诱导生精细胞凋亡.
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MEHP对小鼠生精细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响
目的 研究邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯(Mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠生精细胞(GC-2 spd细胞)凋亡率及Bcl-2 mRNA表达的影响.方法 培养GC-2 spd细胞,用二甲基亚砜(DMSO)溶解MEHP,用不同浓度的MEHP溶液(0、1、10、100、200 μmol/L)对细胞进行24 h染毒.采用MTT法测定细胞活性,荧光定量PCR检测Bcl-2 mRNA的表达情况,流式细胞法测定细胞的凋亡情况.结果 随着MEHP染毒浓度的增加,GC-2 spd细胞活力逐渐降低,细胞凋亡逐渐上升,而Bcl-2 mRNA的表达水平则下降.结论 MEHP可能是通过影响Bcl-2介导的线粒体途径诱导生精细胞凋亡,从而影响雄性生殖功能.
