妊娠早期感染犬弓首线虫对仔鼠免疫状态的影响

目的 研究母体妊娠早期感染犬弓首线虫,是否影响仔鼠的体液免疫功能.方法 取犬弓首线虫子宫段虫卵培养至感染期,不同剂量(生理盐水、1×103个、3×103个虫卵)感染受孕三天的雌鼠,待仔鼠6周龄时攻击感染(0.5×103个虫卵、生理盐水),实验共分6组,动态检测各组仔鼠血清细胞因子(IL-2,IL-4,IL-10,IFN-γ)的表达.结果 各组仔鼠血清细胞因子有差异,具有统计学意义(P＜0.05);各细胞因子之间变化规律不同:Th1细胞产生的细胞因子IL-2在攻击感染早期呈上升趋势,4周达到高峰,以后逐渐下降;IFN-γ在攻击感染早期呈上升趋势,第2周达到高峰后逐渐下降.Th2细胞产生的细胞因子IL-4和IL-10攻击后呈下降趋势,且下降趋势在早期下降明显,后期逐渐放缓.结论 妊娠早期感染孕鼠会影响仔鼠的体液免疫调节能力,且可诱导仔鼠对后天感染产生明显保护性免疫记忆;仔鼠的获得性免疫,在攻击感染的早期可能以Th2免疫占优势.

壬基酚致雄性仔鼠脑组织差异基因的表达

目的 应用基因芯片技术,检测壬基酚暴露对仔鼠脑组织差异基因的表达,筛选部分与神经毒性相关的差异表达基因及通路进行进一步机制研究.方法 建立孕期和哺乳期暴露壬基酚的仔鼠模型,提取暴露组和对照组出生21 d仔鼠脑组织mRNA,采用Roche Nimblegen公司生产的12 × 135位点的包含大鼠26 419个基因的表达谱基因芯片,检测脑基因的表达,扫描仪进行扫描及数据处理.结果 暴露组与对照组共有1 254个差异表达基因,其中619个基因上调,635个基因下调.部分与神经系统功能相关差异表达基因为:①神经营养相关的基因:甘丙肽基因下调,神经生长因子基因下调;②细胞凋亡的相关基因:凋亡蛋白酶活化因子-1基因上调,凋亡抑制基因-1基因下调,半胱氨酸蛋白酶7基因上调;③信号传递及离子通道相关基因的表达:谷氨酸盐受体基因下调,钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ基因下调.结论 壬基酚能导致仔鼠海马神经元信号传导、免疫应答、细胞凋亡、炎症反应因子、神经胶质细胞发育等相关基因的差异表达,以上改变有可能干扰神经系统的发育和功能.

壬基酚孕期暴露对仔鼠脑皮质尼氏小体的影响

目的 检测孕期暴露壬基酚对仔鼠脑皮质尼氏小体的影响.方法 将孕鼠分为4组,在受孕的8～14 d开始灌胃,分别为阴性对照组和低、中、高剂量组(壬基酚质量浓度为50、100、200 mg/kg),在小鼠出生后21、61 d解剖取其脑组织分别做HE染色和改良后的尼氏染色,观察其结构的组间差异.结果 HE染色显示,染毒低剂量皮质区神经元开始出现固缩,随着剂量的升高,皮质区神经元层次出现紊乱,排列稀疏散乱,脱失明显,细胞体积缩小,核深染.尼氏染色中,随着壬基酚质量浓度增加,尼氏体的数量相对于对照组来说数量依次减少,且分布不均,形状大小均不一样,染色的深浅、透明度也不一致.与对照组比较,高剂量组光密度有统计学差异(P＜0.05).结论 孕期暴露壬基酚可导致仔鼠皮质部位神经元出现形态学改变,随着染毒剂量的增加这种改变越明显,这可能是壬基酚导致仔鼠学习记忆下降的原因之一.

随机效应Logistic回归模型在致畸研究中的应用

1.问题的提出在致畸试验研究资料中,传统的统计方法是以各处理组中孕鼠的仔鼠为观察单位,用统计学中两个率的u检验或χ2检验分析各组胎鼠死亡率或致畸率等有无差别,评价受试物有无毒作用.这种统计处理忽视了一个可能的影响因素,即窝别效应(litermata effects).由于窝别效应的存在,各比较组仔鼠间发生毒作用的概率不完全相互独立.从统计学角度认为,这类资料的数据不服从二项分布(该分布要求各个观察单位是否发生某事件应相互独立).由于窝别效应作用和用仔鼠作为观察单位,人为增大样本例数,会低估两率差的标准误(率的U检验),得到较大的u值或χ2值,增大了犯1型误差(即假阳性)的概率.因此,近年来一些统计学家和毒理学家认为对类似资料作统计学处理时,应考虑窝别效应对结果的影响[1,2],在扣除窝别效应的前提下,比较组间的差别,才能更真实的反映受试物的毒作用.随机效应(random effect) logistic回归模型可克服传统方法的不足,适用于结果变量为两分类且以窝别(litter)为处理单位的资料.

限制能量摄入对仔鼠行为发育的影响

限制能量摄入与机体的免疫,延长寿命的关系的研究从本世纪初至今,国内外学者有诸多报道,就其机理方面的研究也在深入进行之中[1,2],这说明限食对动物及人的生命过程的影响已越来越引起有关专家的重视和兴趣.关于限制能量摄入对仔鼠行为发育的影响的研究,目前国内外报道较少.为进一步探讨限制能量摄入对仔代是否会产生生物学效应,我们观察了限制能量摄入对仔鼠行为发育的影响.

氟砷联合染毒对大鼠子代大脑氧化性损伤的研究

[目的] 揭示氟砷共存时对子代健康的影响.[方法] 采用两代一窝繁殖实验的方法,测定Wistar大鼠暴露于氟砷后其子代大脑中氟砷蓄积情况、脂质过氧化水平.[结果] 随着暴露剂量的增加,大脑氟砷含量显著增加,SOD和GSH-Px活性随之降低,而LPO含量却逐渐增加,同代不同剂量组间比较,差异均有非常显著意义(P<0.01);并出现明显的病理性变化;停止氟砷暴露8周后,大脑氟砷含量显著降低,酶的活性有所恢复,而LPO含量明显减少.[结论] 氟砷可引起大鼠子代大脑的氧化性损伤.

锰对仔鼠脑组织一氧化氮合酶活性的影响

为了研究大鼠孕期染锰后,其子代脑组织一氧化氮合酶活性的变化,对妊娠大鼠腹腔注射氯化锰,剂量为0、7.5、15、30mg/kg,然后对其子代30日龄仔鼠脑组织用组织化学法检测一氧化氮合酶活性,并用图象分析仪定量分析.结果表明:实验各组仔鼠脑组织一氧化氮合酶阳性神经元的截面积、平均吸光度、积分吸光度均明显高于对照组(P<0.01).大鼠孕期染锰,使其子代脑组织一氧化氮合酶活性增强,促使一氧化氮合成增多,从而引起中枢神经受损.

溴氰菊酯对发育大鼠脑NOS活性及神经行为的影响

目的探讨溴氰菊酯(deltamethrin,DM)对发育大鼠脑内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性及神经行为发育的影响.方法将妊娠大鼠随机分为对照组和两个剂量组,妊娠第1天～19天隔日1次DM经口染毒,剂量分别为0、3.35和6.70mg/kg.观察DM对妊娠20 d胎鼠、5、10和21日龄仔鼠脑NOS活性及30日龄仔鼠学习和记忆能力的影响.结果 6.70 mg/kgDM染毒组1、5和10日龄仔鼠体重明显下降;产后5 d～21 d仔鼠脑NOS活性呈发育性增高趋势;两个剂量组5日龄雄性仔鼠及6.70 mg/kgDM染毒组5日龄雌性仔鼠脑NOS活性明显高于对照组(P＜0.05),而妊娠20日龄胎鼠、10与21日龄仔鼠脑NOS活性未见明显变化;行为试验结果显示:6.70 mg/kgDM染毒组仔鼠延迟时间为(3.86±1.40)s、被动逃避反应阳性率为24%,与对照组[(1.68±0.70、6%)]相比,差异有显著性(P＜0.05).两个剂量DM染毒组仔鼠旷场试验中行进格子数均明显降低,与对照组相比,差异均有显著性(P＜0.05).结论母鼠妊娠期接触DM可影响仔鼠脑内NOS活性,并造成仔鼠神经行为发育迟缓.

纳米铅和醋酸铅暴露对仔鼠海马和皮质中铁调素表达的影响

目的 探讨纳米铅和醋酸铅暴露后对仔鼠海马和皮质中铁调素表达的影响.方法 SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,将大鼠按雌:雄=1:1合笼饲养.发现阴栓为受孕第1天.将孕鼠随机分为3组,即对照组、纳米铅组和醋酸铅组,纳米铅组孕鼠经口给入10 mg/kg纳米硫化铅,醋酸铅组经口给入100 mg/kg的醋酸铅,对照组经口给入等量的生理盐水.仔鼠出生后21 d(post-natal day 21,PND21)断乳,继续给予相应的处理直到出生后42 d(PND42).应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法检测仔鼠皮质及海马中铅和铁的含量.应用实时PCR和ELISA方法检测铁调素的mRNA和蛋白的含量.应用Perl's染色法观察仔鼠皮质及海马中铁分布情况.结果 纳米铅和醋酸铅染毒后,PND1、PND21及PND42仔鼠皮质、海马中铅含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);且海马中铅含量均高于皮质.同样,纳米铅及醋酸铅暴露后,PND1、PND21和PND42仔鼠皮质及海马中铁含量均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);纳米铅组仔鼠海马中铁含量高于醋酸铅组(P＜0.05).醋酸铅暴露PND1、PND21和PND42仔鼠皮质中铁调素含量分别为对照组的1.40、1.56和2.00倍,海马中铁调素含量分别为对照组的1.42、1.22和140倍;纳米铅暴露PND1、PND21、PND42仔鼠皮质中铁调素含量分别为对照组的1.57、2.05和2.34倍,海马中铁调素含量分别为对照组的1.54、1.45和1.60倍;纳米铅暴露组PND21及PND42仔鼠皮质及海马中铁调素含量均高于醋酸铅组.与对照组比较,纳米铅及醋酸铅暴露后仔鼠皮质及海马中铁调素mRNA表达均增高,且纳米铅暴露后仔鼠皮质及海马中铁调素mRNA表达高于醋酸铅组,差异有统计学意义.结论 母鼠孕期纳米铅及醋酸铅暴露后可导致仔鼠铁调素表达增加,这可能是纳米铅及醋酸铅暴露致仔鼠皮质及海马氧化损伤的机制之一.

1-30 甲基汞的行为致畸效应

目的探讨胚胎期甲基汞暴露对大鼠仔代的行为致畸效应.方法 3月龄Wistar雌性大鼠受孕后随机分为4组,采用甲基汞(0.00、0.01、0.05、2.00mg@kg-1@d-1)于妊娠6～9 d灌胃染毒.28只孕鼠妊娠19 d时进行传统致畸试验.24只孕鼠自然分娩,观察201只仔鼠出生后的早期神经行为发育;79只仔鼠出生7周时进行迷宫测试;32只仔鼠出生10周时进行自动化操作行为测试.分娩5周的24只母鼠及出生10周的24只仔鼠进行脑组织检查.结果胚胎期甲基汞暴露对大鼠的母体毒性十分微弱;但低剂量就对胎仔体重及尾长发育有抑制作用(P＜0.01).3个暴露组仔鼠的早期神经行为发育明显滞后(P＜0.05或P＜0.01);迷宫测试与操作行为测试中,各暴露组仔鼠的成绩均降低(P＜0.05或P＜0.01).各暴露组母鼠及仔鼠脑组织单胺类神经递质含量均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).所有结果呈现出剂量-反应关系.结论甲基汞在不引起可观察到的母体毒性的低剂量下,即可表现出一定的胚胎毒性,影响出生仔鼠神经系统的发育,导致神经行为功能的明显异常.

1-29 豆腐果甙的神经行为致畸效应

目的应用神经行为畸胎学方法评价豆腐果甙对大鼠仔代的神经行为的毒性.方法健康3月龄Wistar雌性大鼠受孕后期随机分为4组,于妊娠后6～15 d采用0、27、270、1 350 mg@kg-1@d-1剂量豆腐果甙连续灌胃染毒,观察17只孕鼠妊娠及分娩后的变化,以及160只仔鼠出生后的早期神经行为发育指标;随机选择32只仔鼠于10周龄时进行自动化操作行为测试.此外,对10周龄的24只仔鼠进行脑组织检查.整个实验采用双盲法.结果未观察到胚胎期不同剂量豆腐果甙暴露对大鼠明显的母体毒性;3个暴露组仔鼠的体重增长、早期生理发育及神经行为发育与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05);操作行为测试中,仔鼠学习记忆能力无性别差异,3个暴露组仔鼠的学习成绩与对照组相比,差异均无显著性(P＞0.05).与对照组相比,各暴露组仔鼠脑组织均未观察到明显的形态学改变;脑神经递质含量也未见异常(P＞0.05).结论胚胎期豆腐果甙暴露不影响大鼠仔代神经系统的发育,未观察到神经行为功能的改变.

卫星发射中心场区内环境氡水平监测与评价/青蒿酯钠对膦氧氮丙啶的抗诱变作用/膦氧氮丙啶对昆明种仔鼠生长发育的影响/三乙胺在地面水中的高容许浓度/大鼠睾丸小分子镉结合蛋白的纯化及性质/氮丙啶类化合物TMD亚急性毒性及致突变作用

高锰对雌性仔鼠大脑发育的影响

用不同锰含量的饮水(分别为2和10g/L)使孕鼠染锰,研究对子代大脑发育的影响.结果表明:(1)高剂量染锰组仔鼠大脑额叶和顶叶皮质厚度比低剂量组和对照组显著变薄,而胶质细胞纤维酸蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫反应强度及其阳性反应产物平均相对密度均明显增高;(2)高、低剂量染锰组仔鼠的扣带回皮质厚度显著较对照组增厚,GF-AP反应强度及其阳性反应产物相对密度显著升高;(3)高剂量染锰组仔鼠胼胝体的面积较对照组和低剂量组显著增大,GFAP免疫反应及其阳性反应产物相对密度明显增高,而低剂量组与对照组之间无差异.

高碘对仔鼠脑甲状腺激素的影响及硒的干预作用

目的研究高碘摄入对小鼠仔鼠脑组织甲状腺激素的影响及硒的干预作用.方法将60只Balb/c小鼠随机分为4个不同的饮水组:正常对照组、高碘组(3000 μg/L)、单独补硒组(200μg/L)、高碘加硒组(I 3000μg/L+Se 200μg/L).喂养4个月时,雌雄交配.测定14和28日龄仔鼠血清TSH和甲状腺激素水平以及0、14和28日龄仔鼠大脑组织甲状腺激素水平.结果14日龄仔鼠高碘组血清TT4水平显著低于对照组和高碘加硒组,而TSH水平显著高于对照组和高碘加硒组(P＜0.05),高碘组0和14日龄仔鼠脑组织甲状腺激素含量显著低于对照组、单独补硒组和高碘补硒组(P＜0.05),28日龄仔鼠血清和脑组织甲状腺激素含量各组间差异无统计学意义.结论补硒能缓解高碘所致仔鼠脑组织甲状腺激素的改变.

碘过量及补硒对仔鼠甲状腺激素水平及受体表达的影响

目的 研究过量碘摄入对小鼠仔鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响及硒的干预作用. 方法 将60只BALB/c小鼠随机分为4组:正常对照组(饮用自来水,NC)、碘过量组(饮水3000 μg/LI,EI+)、单独补硒组(饮水200 μg/L Se,Se+)和碘过量加硒组(饮水3000 μg/LI+200 μg/L Se,EI+Se+).以纯系鼠饲料饲养.4个月后,雌雄交配.测定14和28日龄仔鼠血清总T4(T4)和总T3(T3)水平,用实时荧光定量PCR测定0、14和28日龄仔鼠大脑组织TRα1和TRβ1 mRNA的表达水平. 结果 14日龄仔鼠血清T4水平碘过量组显著低于对照组和碘过量加硒组(P＜0.05).0和14日龄仔鼠脑组织TRα1和TRβ1 mRNA水平碘过量组显著高于对照组、单独补硒组和碘过量补硒组(P＜0.05).碘过量和补硒对28日龄仔鼠血清T4水平和脑组织TRα1和TRβ11表达水平无明显影响. 结论 碘过量上调子代脑TRα1和TRβ1的表达,补硒具有缓解作用.

孕期氟他胺暴露对雄性子代小鼠生殖器官发育和氧化应激反应的影响

目的 探讨氟他胺染毒孕鼠后对雄性子代小鼠生殖器官发育和氧化应激反应的影响,为模型应用和机制研究进一步提供依据.方法 选择7周龄ICR小鼠,受孕后雌鼠随机分为实验组和对照组,各20只,实验组孕鼠于孕12 ～ 18 d行氟他胺灌胃处理,剂量为300 mg/(kg·d);对照组以等体积大豆油灌胃.于仔鼠出生7周检查尿道发育后,每组随机选40只雄鼠检测肛门到生殖器的距离(anogential distance,AGD)、睾丸容积、阴茎长度并取部分鼠的生殖器官做组织病理学检查.随机每组取12只雄鼠的睾丸和阴茎组织,加入所需匀浆介质研磨后离心取其上清液,使用相应检测试剂盒及酶标仪检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)活性;实时荧光定量PCR方法检测其氧化应激基因Noxo1、Sod1及Gpx1的表达丰度.结果 实验组雄性仔鼠100％出现尿道下裂(91/91),实验组与对照组相比,AGD变短[(10.22±1.53) vs.(17.46±1.25) mm],睾丸容积减小[(166.34±26.59) vs.(178.25±25.77) mm3]和阴茎变短[(7.46±0.76) vs.(12.60±0.80) mm] (P＜0.05);实验组雄性仔鼠睾丸中SOD活性[(171.08±57.24) vs.(102.79±15.31) U/mg pro]及MDA[(4.45±1.67)vs.(2.93±1.00) nmol/mg pro]含量高于对照组(P＜0.05),GSH-Px[(41.55±12.15)vs.(78.27±7.60) U/mg pro]活性低于对照组(P＜0.05);实验组睾丸内Noxo1表达丰度较对照组升高(P＜0.05);睾丸内Sod1及Gpx1较对照组下降(P＜0.05);阴茎内未见SOD、MDA、GSH-Px和Sod1、Noxo1、Gpx1明显改变.结论 孕鼠染毒氟他胺可致雄性子代小鼠尿道下裂和阴茎变短等发育异常、睾丸氧化/抗氧化功能异常,但对阴茎氧化/抗氧化功能无明显影响.

母鼠过量补充铁对仔鼠肝损伤影响的实验研究

目的 探讨母鼠过量补充铁对仔鼠肝脏组织形态和功能的影响.方法 将孕鼠按体重随机分为高、中、低剂量(120、60、30 mg/kg BW)补铁组和生理盐水对照组.选用右旋糖酐铁隔日对母鼠腹腔注射,共6周.测定血清铁含量,血清谷氨酸氨基转移酶(GPT)、天门冬氨酸氨基转移酶(GOT)活性;肝脏铁染色及病理组织学检查肝组织损伤情况,免疫组化法测定肝脏Bax和Bcl-2基因表达,氧化应激水平分析肝组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 补铁6周后,高、中剂量组仔鼠血清铁水平均明显高于对照组(P＜0.05).低剂量组仔鼠肝组织有少量铁沉积,而中、高剂量组则有大量铁沉积,且随着肝脏铁蓄积的增多,肝细胞受损程度明显增加.中、高剂量组Bcl-2基因与Bax基因表达量的比值均明显低于对照组(P＜0.05).高剂量组肝ALT和AST活性均明显高于对照组(P＜0.05).中、高剂量组仔鼠肝组织MDA含量均明显高于对照组(P＜0.05),GSH-Px活性均明显低于对照组(P＜0.05);高剂量组SOD活性明显低于对照组(P＜0.05).结论 孕期和哺乳期母鼠腹腔铁过量补充可导致仔鼠肝脏铁过量沉积,肝组织细胞和功能受到不同程度损伤,氧化应激水平明显提高.

茵栀黄口服液对昆明小鼠F1代的安全性实验

目的:探讨茵栀黄口服液对昆明鼠F1代仔鼠的安全性.方法:将昆明鼠随机分为3组,空白对照组(饮水中无茵栀黄口服液),15％茵栀黄口服液组(饮水中含有15％的茵栀黄口服液),30％茵栀黄口服液组(饮水中含有30％的茵栀黄口服液).分娩结束后,清点各组分娩仔鼠的数量,进行统计学分析.分离解剖仔鼠的主要组织脏器,制备石蜡切片,经染色后在显微镜下观察有无脏器畸形和病理学改变.用western blot方法检测分娩后胎盘组织的凋亡信号caspase-3是否改变.结果:研究发现茵栀黄口服液高剂量及低剂量组均不能引起仔鼠的数量改变和外观上的畸形,也不能引起仔鼠的心、肝、脾、肺、肾的结构改变或病理学改变.茵栀黄口服液处理各组胎盘组织凋亡酶caspase-3的表达与对照组相比没有统计学差异.结论:茵栀黄口服液无致流产的副作用,对昆明鼠孕鼠及F1代仔鼠安全.

碘缺乏对大鼠仔鼠海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白表达的影响

碘是合成甲状腺激素所必需的微量元素,人类生存环境缺碘可造成碘缺乏病(iodine deficient disorder,IDD).母体甲状腺激素的缺乏可直接导致子代脑发育关键期甲状腺激素供应不足,致使子代生长发育,尤其是中枢神经系统的发育分化障碍[1].

发育早期铅暴露所致仔鼠海马中突触相关蛋白表达的改变

铅暴露可导致儿童的认知功能障碍，因此在中国乃至世界范围内仍是重要的公共健康问题。目前，对于铅损害学习记忆方面的研究虽然取得了一些进展，但其具体机制仍不清楚，有待进一步研究。突触后致密蛋白-95（postsynaptic density protein 95, PSD-95）是突触后致密区的主要组成部分，研究表明PSD-95先于其他突触后蛋白锚定于突触后膜上，在突触后致密区内发挥初始作用。研究发现PSD-95可以结合突触后膜上的N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR）和下游信号转导蛋白-神经元型一氧化氮合成酶（neuronal nitric oxide synthase, nNOS）组成三联体结构，在学习记忆等生理功能上发挥重要作用。研究人员自母鼠孕期开始，通过饮水铅暴露，给予0、0.5、1.0和2.0 g/L的醋酸铅染毒，分别于仔鼠出生后10、20和40 d，采用透射电镜观察仔鼠的突触超微结构，并在蛋白和基因水平检测位于突触后膜上的PSD-95和nNOS以及位于突触前膜上的突触素（Synaptophysin, SYP）的表达。研究结果显示，发育早期铅暴露可以引起海马组织内突触后致密区变薄，导致PSD-95，nNOS以及SYP蛋白水平的下调，另一方面，在仔鼠出生后40 d，PSD-95和SYP的mRNA表达也明显受到抑制。提示，发育早期铅暴露所致的突触相关蛋白表达的改变可能是铅所致学习记忆功能障碍中的重要原因。