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非小细胞肺癌中IFT20、MMP-2和MMP-9表达关系的研究
目的 检测非小细胞肺癌患者术后组织中细胞纤毛转运蛋白20(IFT20)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,研究三者在肿瘤中表达的差异.方法 选取确诊的87例非小细胞肺癌术后组织作为观察组,选取60例正常支气管黏膜组织作为对照组,应用免疫组化SP法检测两组中IFT20、MMP-2和MMP-9的表达特点.结果 两组中IFT20、MMP-2和MMP-9表达的阳性率差别均有统计学意义.观察组中IFT20、MMP-2和MMP-9的表达与肿瘤的大径、是否伴有坏死、淋巴结转移均具有相关性.线性相关分析显示IFT20和MMP-2、IFT20和MMP-9的表达均具有正相关性.结论 非小细胞肺癌术后组织IFT20、MMP-2和MMP-9高表达可以促进肿瘤的发生和进展,IFT20在发挥作用过程中可能对MMP-2和MMP-9的表达有重要调节作用.
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白细胞介素-1β对髓核细胞基质金属蛋白酶-3,7,9,13 mRNA表达的影响
目的 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对人椎间盘髓核细胞表达基质金属蛋白酶-3,7,9,13的作用.方法 分离人椎间盘髓核细胞进行单层培养并利用甲苯胺蓝、番红-O染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色进行鉴定,而后分别用10 ng/ml和50 ng/ml重组人IL-1β刺激体外培养的髓核细胞,RT-PCR检测基质金属蛋白酶-3,7,13的表达,定量PCR检测基质金属蛋白酶-9的表达.结果 通过10 ng/ml和50 ng/ml重组人IL-1β的刺激,基质金属蛋白酶-3,7,9,13表达均较对照组高(P<0.05);基质金属蛋白酶-9,13表达随IL-1β浓度升高而升高(P<0.05);在相同浓度的IL-1β(10 ng/ml)下,与对照组相比基质金属蛋白酶-7,13表达升高分别约为10倍和38倍,较基质金属蛋白酶-3,9升高明显(P<0.05).结论 IL-1β可以促进人椎间盘髓核细胞表达基质金属蛋白酶-3,7,9,13,而且以基质金属蛋白酶-7,13明显,提示IL-1β的存在加速了椎间盘基质分解,且其所诱导的分解可能主要是通过基质金属蛋白酶-7,13起作用.
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槲皮素对人结肠癌细胞SW480基质金属蛋白酶及组织蛋白酶-D的作用
目的 观察槲皮素对人结肠癌SW480细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMPs)的影响;观察槲皮素对人结肠癌SW480细胞组织蛋白酶-D表达的影响.方法 酶谱分析技术观察槲皮素对人结肠癌SW480细胞MMPs分泌的影响;运用免疫组织化学方法观察槲皮素对人结肠癌SW480细胞组织蛋白酶-D表达的影响.结果 酶谱分析法检测显示不同浓度的槲皮素能够抑制人结肠癌SW480细胞分泌MMP-2及MMP-9,随浓度的升高,MMP-2及MMP-9的分泌量减少;免疫组织化学法显示不同浓度的槲皮素处理人结肠癌SW480细胞后,组织蛋白酶-D的表达随药物浓度的升高和作用时间的延长而降低.结论 不同浓度的槲皮素能够抑制人结肠癌SW480细胞MMP-2和MMP-9的分泌及组织蛋白酶-D的表达,这些都可能是槲皮素抑制结肠癌细胞侵袭和转移的原因.
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颈动脉硬化斑块与血浆高敏C-反应蛋白、基质金属蛋白酶-2/9、CD40配体水平的关系
目的 通过超声检查颈动脉硬化斑块,结合检测患者血浆高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶(MMP,包括MMP-2、MMP-9)、CD40 配体(CD40L)水平综合评价斑块的易损性.方法 对68 例首次发病的脑梗死患者(A 组)、62 例无症状颈动脉硬化患者(B 组)和56 例健康对照者(C 组)进行研究,超声检查颈动脉内膜-中层厚度(IMT)、斑块类型,采用酶联免疫吸附法检测血浆hs-CRP、MMP-2、MMP-9、CD40L.A 组患者进行神经功能缺损程度评分.结果 A 组IMT 高于B 组(P ＝0.024),A 组以易损斑块(60.3%)为主,B 组以稳定斑块(77.4%)为主;A 组患者血浆hs-CRP、MMP-2、MMP-9、CD40L 水平均高于B 组和C 组(均P ＜0.05);A 组易损斑块者血浆MMP-2、MMP-9、CD40L 水平均高于稳定斑块和无斑块者(均P ＜0.05);易损斑块者hs-CRP 与MMP-2、MMP-9 均呈正相关(r ＝0.516,P ＝0.001;r ＝0.653,P ＝0.001);MMP-2 与MMP-9、CD40L 均呈正相关(r ＝0.637,P ＝0.001;r ＝0.614,P ＝0.010);MMP-9 与CD40L 呈正相关(r ＝0.749,P ＝0.012);易损斑块者神经功能缺损程度评分(26.19 ±11.25)高于稳定斑块(23.58 ±10.46)及无斑块者(23.14 ±10.18);血浆hs-CRP、MMP-2、MMP-9、CD40L 与神经功能缺损程度评分均呈正相关(r ＝0.652,P ＝0.001;r ＝0.761,P ＝0.001;r ＝0.729,P ＝0.001;r ＝0.648,P ＝0.010).结论 超声检查颈动脉硬化斑块类型结合检测血浆相关炎症介质水平有助于评价斑块的易损性.
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基质金属蛋白酶3、12基因多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的关系研究
目的 探讨基质金属蛋白酶3(MMP-3)(1171 5A/6A)、基质金属蛋白酶12(MMP-12)(N357S)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系.方法 吸烟COPD患者(COPD组)80例及吸烟健康者(对照组)74例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,检测MMP-3(1171 5A/6A)、MMP-12(N357S)基因型,进行基因型、等位基因频率分析.结果 MMP-3(1171 5A/6A)位点5A/5A、5A/6A、6A/6A基因型在COPD组和对照组无统计学差异(χ2=0.866、0.011、1.054,P均>0.05),5A和6A等位基因频率分布也无统计学差异(χ2=1.608,P=0.205).MMP-12(N357S)位点N/S和S/S基因型在COPD组和对照组分布无统计学差异(χ2=0.149、3.739,P均>0.05);NN基因型有统计学差异(χ2=4.821,P=0.028),N和S等位基因频率分布有明显差异(χ2=7.247,P=0.007).结论 MMP-3(1171 5A/6A)基因多态性与COPD发病机制无关,MMP-12(N357S)基因多态性可能与COPD的发病机制有关,MMP-12 N等位基因可能为COPD的一个易感因素.
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不同方式血液透析前、后尿毒血清对肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶系统平衡的影响
目的 探讨不同方式血液透析前、后尿毒血清对肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶系统平衡的影响.方法 选择慢性肾衰竭维持性透析(MHD)患者24例,随机分成3组,分别接受常规血液透析(HD)、高通量透析(HFHD)、血液透析滤过(HDF)后稀释法治疗,分别抽取患者透析前后的血清;ELISA法测定透析前后尿毒血清β2-微球蛋白(β2-MG)的水平.继之用各种透析前、后尿毒血清刺激体外培养的近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞);应用RT-PCR法及ELISA法分别检测HK-2细胞MMP-1/TIMP-1 mRNA表达及蛋白分泌的变化.结果 HFHD、HDF组透析后血清β2-MG浓度较透析前明显下降(P<0.01);HD组透析后与透析前比较差异无统计学意义(P>0.05).HDF组透析后尿毒血清使HK-2细胞MMP-1 mRNA表达和蛋白分泌均增加、TIMP-1 mRNA表达和蛋向分泌均减少、MMP-1/TIMP-1 mRNA及蛋白分泌量的比值升高(P<0.01),HD、HFHD组透析后与透析前比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 HDF可更有效地维持肾小管上皮细胞外基质分泌和降解平衡,从而对残肾功能具有更好的保护作用.
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羧胺三唑对TNF-α诱导的成纤维样滑膜细胞增殖及MMP-1、MMP-3表达的影响
目的 研究羧胺三唑(CAI)对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖以及MMP-1、MMP-3表达的影响.方法 用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎模型,并分离培养佐剂性关节炎大鼠的FLS.实验分为对照组,20 ng/ml TNF-α组,同时加入TNF-α和溶剂DMSO组,以及同时加入NF-α和不同浓度CAI(10、20、40 μmoL/L)组.CCK-8法检测FLS的增殖反应,Western blot法检测MMP-1和MMP-3的蛋白表达.结果 20 ng/mlNF-α能明显增加佐剂性关节炎大鼠FLS的增殖反应,增加MMP-1和MMP-3的蛋白表达(P＜0.01).CAI(20、40 μmol/L)能够显著抑制TNF-α对佐剂性关节炎大鼠FLS的促增殖反应(P＜0.01),抑制率分别为(31.13±7.07)％和(42.48±5.84)％,且CAI能够降低TNF-α诱导的MMP-1和MMP-3产生(P＜0.01).结论 CAI体外给药能够抑制TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠FLS增殖以及产生MMP-1和MMP-3,这可能是其抗关节炎作用的机制之一.
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二氢杨梅素对4T1小鼠乳腺癌肺转移的抑制作用
目的：为了探讨二氢杨梅素的抗转移作用，在Balb/c雌性小鼠右后腿皮下建立了4T1乳腺癌移植模型，然后给予二氢杨梅素灌胃给药。方法 MTT法检测二氢杨梅素对4T1小鼠乳腺癌细胞的抗增殖作用；Transwell侵袭小室法检测二氢杨梅素对4T1细胞的抗转移作用。检测肿瘤的体积、远端肺转移灶数、荷瘤鼠血清及条件培养基中的基质金属蛋白酶MMP-9和MMP-2。结果二氢杨梅素处理4T1细胞48 h后，半数抑制浓度（IC50）为102.1μg/ml。二氢杨梅素能不依赖细胞毒作用减少细胞培养液中MMP-2和MMP-9水平，并且抑制4T1细胞的侵袭。与盐水对照组比较，100 mg·kg-1·d-1二氢杨梅素灌胃给药能显著减少瘤重、肺转移灶数以及荷瘤鼠血清 MMP-9和MMP-2水平；而50 mg·kg-1·d-1二氢杨梅素灌胃给药组除了血清MMP-2水平外，没有显著差异。结论二氢杨梅素给药能抑制4T1小鼠乳腺癌远端肺转移，其机制可能与二氢杨梅素下调荷瘤小鼠血清MMP-9和MMP-2水平相关。
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不同剂量瑞舒伐他汀对兔颈动脉粥样硬化斑块内CD147表达的影响
目的：探讨不同剂量瑞舒伐他汀对兔颈动脉粥样硬化斑块内的 CD147表达水平以及斑块稳定性的影响。方法将40只新西兰雄性大白兔随机分为五组：空白对照组、模型对照组（液氮损伤＋高脂饲料建立动脉硬化模型）、低中高浓度药物干预三组（造模后分别予以瑞舒伐他汀1 mg·kg-1·d-1干预、2.5 mg·kg-1·d-1干预和5 mg·kg-1·d-1干预），15周后对兔颈总动脉血管进行病理形态学检查，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测斑块内CD147 mRNA表达水平及蛋白质印迹法（Western blot）检测斑块内CD147蛋白表达水平。结果第15周末，模型对照组斑块内CD147 mRNA、CD147蛋白表达水平明显高于空白对照组（P＜0.05）。病理显示模型对照组颈动脉内可见大量的不稳定斑块，模型对照组的8只兔中5只出现明显斑块破裂及血栓形成，而空白对照组的8只兔血管内膜光滑。瑞舒伐他汀干预，斑块内 CD147 mRNA、CD147蛋白表达水平与模型对照组相比明显降低（P＜0.05），且具有剂量依赖性，表现为高浓度药物干预组表达水平低。病理显示瑞舒伐他汀干预后颈动脉动脉硬化斑块均较为稳定，动脉粥样斑块的面积明显减小，斑块纤维帽增厚，且具有剂量依赖性。结论兔颈动脉不稳定斑块内CD147的表达增多；瑞舒伐他汀能通过抑制CD147表达从而发挥其稳定动脉硬化斑块的作用，具有剂量依赖性。
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霉酚酸酯对实验性大鼠IgA肾病的MMP-9、TIMP-1的影响
目的：观察霉酚酸酯（MMF）对实验性IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织基质金属蛋白酶（MMP-9）及其组织抑制剂（TIMP-1）表达的影响，探讨 MMF 对 IgAN 的治疗作用以及其可能的作用机制。方法将24只（6周龄）雄性Wistar大鼠随机分为3组（每组各8只），分别为模型组、MMF组、对照组。模型组、MMF组均采用灌服牛血清白蛋白（BSA）和尾静脉注射脂多糖（LPS）的方法建立IgAN模型，共8周，于第9周起MMF组给MMF每日灌胃1次，按10 mg·kg-1·d-1，对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃，持续至12周末。三组均每4周检测1次尿红细胞计数、24 h尿蛋白定量；于12周末测定血生化指标，并观察肾脏病理改变和免疫复合物沉积情况，免疫组织化学方法检测肾组织中MMP-9、TIMP-1的表达。结果前4周，各组尿红细胞计数、尿蛋白定量比较差异无统计学意义（P＞0.05）；第6周至8周末，模型组与 MMF组尿红细胞及尿蛋白定量明显升高，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；第10～12周末，MMF 组尿红细胞及尿蛋白定量较模型组明显减少，差异有统计学意义（P＜0.05）；血生化指标各组间无统计学差异（P＞0.05）。与对照组相比，模型组肾小球系膜区增宽，系膜细胞、系膜基质增生，伴有强IgA荧光及较多电子致密物沉积，MMP-9、TIMP-1均明显升高（P＜0.05），其中MMF组上述病理改变均明显轻于模型组，MMP-9及TIMP-1表达均明显低于模型组（P＜0.05）。结论 MMF可降低尿蛋白，减少免疫复合物在肾组织中的沉积，推测其治疗IgAN的病理机制可能是通过调节MMP-9、TIMP-1的表达延缓肾脏纤维化。
关键词： 肾小球肾炎 IgA 基质金属蛋白酶类 金属蛋白酶1组织抑制剂 霉酚酸酯 -
辛伐他汀对类风湿关节炎的治疗作用研究
目的 探讨辛伐他汀治疗类风湿关节炎(RA)的免疫学机制,为辛伐他汀治疗活动期类风湿关节炎以及改善其预后提供实验依据.方法 70例活动期RA患者随机分为两组,治疗组:辛伐他汀40mg/d +甲氨蝶呤10mg/周+来氟米特20mg/d;对照组:甲氨蝶呤10mg/周+来氟米特20mg/d.分别于治疗前、治疗后12周、24周用放射免疫法测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),酶联免疫法测基质金属蛋白酶3(MMP-3)的浓度,观察辛伐他汀对RA患者炎性因子的影响.结果 (1)治疗前两组各项指标差异无统计学意义(P均>0.05);(2)RA患者血清中致炎因子IL-6 、TNF-α、MMP-3水平与CRP 的水平相关;(3)治疗12周时治疗组和对照组相比炎性因子IL-6 、TNF-α、MMP-3及临床指标的下降无统计学意义(P均>0.05);(4)治疗24周时治疗组和对照组相比炎性因子IL-6 、TNF-α、MMP-3及临床指标的下降有统计学意义(P均<0.05);(5)两组的不良反应差异无统计学意义(P均>0.05).结论 辛伐他汀可以降低RA致炎因子的水平;辛伐他汀不但可以配合免疫调节剂治疗活动期RA,而且对预防和治疗RA引起的早期动脉粥样硬化起着非常重要的作用,从而改善了RA的病情和预后.
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PTEN和MMP-2表达与肝细胞肝癌生长、侵袭及转移
目的 研究PTEN与MMP-2在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其临床病理意义.方法 应用组织芯片技术和免疫组织化学方法(SP法)检测114例HCC组织、71例癌旁组织和28例正常肝组织中PTEN和MMP-2的表达情况.结果 PTEN在HCC组织中的表达阳性率低于癌旁组织(58.8%vs.95.8%,P<0.01)和正常肝组织(58.8%vs.96.4%,P<0.01),PTEN的表达与HCC组织分级(P<0.05)和转移(P<0.01)有关,与患者年龄、性别、肿瘤长径、合并硬化、AFP水平和HBsAg状态无关(P均>0.05).MMP-2在HCC中表达阳性率高于癌旁组织(60.5%vs.38.0%,P<0.01)和正常肝组织(60.5%vs.7.1%,P<0.01),MMP-2表达与转移有关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤长径、合并硬化、组织分级、AFP水平和HBsAg状态无关(P均>0.05).在114例HCC癌组织中PTEN表达与MMP-2表达呈负相关关系(r＝-0.458,P＝0.000).结论 HCC中PTEN的失表达与MMP-2的过表达在肿瘤发生、发展、侵袭及转移过程中可能起重要作用.
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血清MMP9蛋白ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用
目的 建立基质金属蛋白酶9(MMP9)的双抗体夹心ELISA检测方法,探讨血清中MMP9在正常人及肝癌患者中的差异.方法 从人肝组织中经过反转录扩增出MMP9基因721～1 156 bp区段,插入到原核表达质粒pQE30中,在大肠埃希菌M15中诱导蛋白表达.以纯化的融合蛋白HIS-MMP9为抗原免疫实验用兔及豚鼠,得到的MMP9抗血清经过纯化后,建立双抗体夹心ELISA法.对227份正常及193份肝癌患者血清中的MMP9进行检测.结果 SDS-PAGE显示所表达的HIS-MMP9融合蛋白相对分子质量约为17 000;以原核表达蛋白为抗原制备的MMP9抗血清可有效地识别重组MMP9和中性粒细胞和HepG2细胞内源性MMP9蛋白;利用建立的MMP9 ELISA检测技术发现肝细胞癌患者血清中MMP9的含量高于正常人群,差异具有统计学意义,P＜0.001.结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清MMP9的检测,为建立以MMP9为检测指标的肝细胞癌患者转移复发筛查方法提供了科学基础.
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MMP-2和MMP-9蛋白在结肠癌中的表达
目的:分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9蛋白与结肠癌病理因素的关系,探讨MMP蛋白在结肠癌发生中的临床意义.方法:用SP免疫组化法检测31例结肠癌中MMP-2和MMP-9蛋白表达情况,并用SPSS 10.0 for Windows软件统计分析MMP蛋白与临床病理因素的关系.以20例溃疡性结肠炎、21例结肠腺瘤和10例正常结肠黏膜作为对照组.结果:MMP-2除结肠癌组和正常结肠黏膜组间相比具有显著性差异(10.0% vs 54.8%,P＜0.05)外,其余各组间比较差异无统计学意义,MMP-9各组间比较差异无统计学意义,从溃疡性结肠炎、结肠腺瘤到结肠癌中MMP-2和MMP-9蛋白表达阳性率不同且具有递增趋势.MMP-2和MMP-9蛋白表达与结肠癌的Duke's分期及有无淋巴结转移显著相关(A+B期:38.9%和27.8%;C+D期:76.9%和84.6%;无淋巴结转移:38.9%和27.8%;有淋巴结转移:76.9%和84.6%,P＜0.05).结论:MMP-2和MMP-9蛋白过度表达对结肠癌的诊断、Duke's分期及有无淋巴结转移判断具有重要的临床意义.
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基质金属蛋白酶在胰腺癌的表达及其对预后的影响
目的 研究胰腺癌组织基质金属蛋白酶的表达与肿瘤侵犯血管和肝转移之间的联系,及其对预后的影响.方法 应用免疫组化方法测定36例胰腺癌患者切除标本中基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达,结合临床病理和随访资料分析MMP-2和MMP-9表达与患者预后之间的关系.结果 胰腺癌MMP-2的阳性率为58.3%(21/36).血管侵犯组的MMP-2表达率为81.8%(18/22),显著高于无血管侵犯组21.4%(3/14),P＜0.05.肝转移组的MMP-2表达率为84.6%(11/13),显著高于无肝转移组的43.7%(10/23).胰腺癌MMP-9的阳性表达率为61.1%(22/36).血管侵犯组MMP-9的表达率为77.3%(17/22),显著高于无血管侵犯组的35.7%(5/14).肝转移组的MMP-9表达率为84.6%(11/13),显著高于无肝转移组的47.8%(11/23),P ＜0.05.Kaplan-Meier生存分析显示MMP-2阳性组的预后较差(P＜0.05).结论 MMP-2、MMP-9与肿瘤血管侵犯和肝转移的发生相关,MMP-2高表达提示其预后较差.
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基质金属蛋白酶抑制剂BB-94对急性胰腺炎及其相关性肺损伤的影响
目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂对急性胰腺炎(AP)及其相关性肺损伤(APALI)的影响及其作用.方法腹腔注射L-精氨酸制备大鼠急性坏死型胰腺炎(ANP)模型.44只大鼠随机分为BB-94(40 mg/kg/24 h,诱导AP前腹腔注射BB-94 3次)治疗组和生理盐水对照组(20 ml/kg/24 h,诱导AP前腹腔注射生理盐水3次),每组各10只大鼠观察生存率,其余测定血清淀粉酶,胰腺和肺组织病理评分,明胶酶谱法检测MMP9和MMP2活性,检测肺脏髓过氧化酶(MPO)活性和肺血管Evans blue渗透性.结果 BB-94组生存率较对照组提高(100% vs 75%),血清淀粉酶明显降低(P ＜ 0.01),肺的MMP9和MMP2活性明显降低(P ＜ 0.01)、粒细胞浸润和蛋白渗漏明显降低(P ＜ 0.05).结论 BB-94可减轻AP时胰腺和肺脏的病理变化,降低AP所引起的肺组织MMP9和MMP2活性和蛋白渗漏.
关键词： 基质金属蛋白酶类 胰腺炎 急性坏死性 肺损伤 Batimistat -
γ-氨基丁酸对胰腺癌细胞增殖及转移作用的实验研究
目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞周期及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 应用不同浓度(0～320 μmol/L)GABA干预SW1990细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期.RT-PCR检测细胞MMP-2 mRNA和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 GABA促进胰腺癌SW1990细胞的生长,使G0/G1细胞减少,S期和G2/M细胞增多.320μmol/L的GABA干预细胞后的A570值为1.11±0.03,较无GABA干预组的0.56±0.01显著增加(P<0.01);G0/G1细胞为(46.18±1.12)%,较无GABA干预组的(87.29±1.34)%显著减少(P<0.01);MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA及蛋白表达分别为8.6、6.8、10.5、8.4,较0～40μmol/L组显著增加(P<0.05).结论 GABA能促进SW1990细胞增殖和MMPs的表达.
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雷公藤内酯醇对胰腺癌PANC1细胞Toll样受体4/核因子-kB信号通路的影响
目的 探讨雷公藤内酯醇(TP)对人胰腺癌PANC1细胞株侵袭能力的影响及其与Toll样受体4/核因子-KB(TLR4/NF-KB)信号通路的关系.方法 将PANC1细胞分为亲本细胞组、TP组、脂多糖(LPS)组和TP+ LPS组.TP组培养液中加入50 ng/ml的TP,LPS组加入1μg/ml的LPS,TP+ LPS组先用50 ng/ml的TP处理2h,再加入1 μg/ml的LPS.各组细胞均常规培养24 h.采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测TLR4、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因系统检测NF-KB活性,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 亲本组、LPS组、TP组、TP+ LPS组的TLR4mRNA表达量分别为0.41 ±0.06、0.46±0.10、0.20±0.04和0.25±0.06,TLR4蛋白表达量分别为0.55±0.06、0.60±0.03、0.18±0.04和0.13±0.00；NF-KB活性分别为13.0±3.0、31.6±4.3、7.3±1.5和10.8±2.1；穿膜细胞数分别为(56.8±8.6)、(104.5±12.8)、(32.0±5.7)和(46.8±7.0)个；MMP-9mRNA表达量分别为0.36±0.05、0.58 ±0.07、0.18±0.03和0.30±0.004,MMP-9蛋白表达量分别为0.31±0.04、0.53±0.08、0.11±0.02和0.15±0.00.LPS组TLR4 mRNA和蛋白表达量与亲本组差异无统计学意义,但NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量显著高于亲本组(t值分别为8.654、7.593、6.655、4.982,P值均＜0.01).TP组TLR4 mRNA和蛋白表达量、NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著低于亲本组(t值分别为-7.609、-9.948、-4.176、-5.915、-8.179、-9.948,P值均＜0.01).TP+ LPS组TLR4 mRNA和蛋白表达量、NF-KB活性、穿膜细胞数、MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著低于LPS组(t值分别为-4.437、-14.805、-10.506、-9.700、-9.055、-8.932,P值均＜0.01).结论 TP具有抑制胰腺癌细胞侵袭的作用,其机制与抑制TLR4/NF-kB信号通路、下调MMP-9的表达有关.
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MT2-MMP基因沉默对缺氧条件下培养的胰腺癌AsPC-1细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响
目的 利用特异性siRNA沉默人胰腺癌AsPC-1细胞的膜型金属蛋白酶2(MT2-MMP)基因表达,观察其对缺氧条件下培养的细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响.方法 采用脂质体转染法将插入MT2-MMP特异性siRNA的真核表达质粒转染至人胰腺癌AsPC-1细胞株(siRNA组),以转染过表达MT2-MMP质粒(过表达组)或阴性对照质粒(空载体组)的AsPC-1作为对照.实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测转染细胞的MT2-MMP mRNA和蛋白的表达.在缺氧条件(37℃、1％O2、5％ CO2、饱和湿度的三气培养箱)下培养后,应用CCK-8法检测转染细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Transwells小室检测细胞的侵袭能力.结果 成功获取MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞株和过表达的细胞株.缺氧条件下培养24h后,空载体组、过表达组、siRNA组细胞增殖的吸光度值(A490值)分别为0.68±0.08、0.80 ±0.08、0.52±0.07;细胞凋亡率分别为(6.2±1.5)％、(2.8±1.1)％、(21.4±3.9)％;每个视野(200倍)的穿膜细胞数分别为(115.8 ±23.2)、(256.4±38.6)、(45.8±18.2)个.siRNA组较空载体组的细胞增殖显著被抑制,穿膜细胞数显著减少,而细胞凋亡率显著增加(P值均＜0.05).过表达组较空载体组的细胞增殖显著增强,穿膜细胞数显著增加,而细胞凋亡率显著降低(P值均＜0.05).结论 MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞在缺氧条件下培养后细胞凋亡增加,增殖被抑制,侵袭力减弱.
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S100A6基因沉默对胰腺癌细胞侵袭的影响
目的 探讨S100A6基因沉默对胰腺癌细胞侵袭的影响和可能机制。方法 将不同浓度(3.125、6.25、12.5 nmol/L)的靶向S100A6的小干扰RNA( S100A6-siRNA)转染人胰腺癌BxPC3细胞，分别采用荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测S100A6 mRNA和蛋白的表达，采用Transwell小室检测癌细胞侵袭能力，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性。结果 S100A6-siRNA转染组细胞的S100A6 mRNA和蛋白表达呈浓度、时间依赖性明显下调，穿膜细胞数呈浓度依赖性明显减少。12.5 nmol/L的S100A6-siRNA转染组细胞转染后48 h的S100A6 mRNA表达从对照组的(100±0.3)％降到(15.3±0.2)％(P＜0.01)；S100A6蛋白的表达从(83.2±0.18)％降到(13.5±0.12)％(P＜0.01)；穿膜细胞数从(44.5±2.2)个降到(7.6±1.5)个(P＜0.05)。同时，S100A6-siRNA转染组细胞的MMP-9活性明显下调。结论 抑制S100A6基因表达可抑制胰腺癌细胞侵袭转移，其机制可能与下调MMP-9活性有关。
