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我国B群脑膜炎奈瑟氏菌单克隆抗体分型及其流行病学意义
为了阐明自七十年代以来在我国11个省和2个直辖市流脑病人和带菌者中所分离的B群脑膜炎奈瑟氏菌(Nm)之间的流行病学关系,应用抗脑膜炎奈瑟氏菌1类和2/3类外膜蛋白的单克隆抗体(McAb)和全菌酶联免疫吸附试验(Wthole Cell-ELISA)对109株B群Nm进行分型及分亚型检定.初步结果表明.上述菌株可分成6个型,分型率为34.9%(38/109),其中15型较多,占15.6%.67株可分为12个亚型及复合亚型,分亚型率为61.5%,其中以P1.2亚型为多见,占可分亚型菌株的47.8%(32/67),其次为P1.12亚型,占13.4%(9/67).在比较病人菌株与带菌者菌株的型别时发现,前者存在明显的优势亚型,即P1.2亚型,占可分亚型病人菌株的64.4%(29/45).而后者中仅1株为P1.2亚型.该亚型主要发现于1984年以后,地区分布较为广泛,是目前引起我国B群流脑发病的主要亚型.分析结果还初步解释了我国B群流脑带菌率高发病率较低的原因.
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艾灸"神阙"穴对肾阳虚家兔血清SOD的影响
目的:探讨艾灸神阙穴对衰老的影响和作用机制.方法:将48只健康家兔随机分成8组,即Ⅰ组(空白对照组)、Ⅱ组(模型组)、Ⅲ组(神阅预防组)、Ⅳ组(神阙加足三里预防组)、Ⅴ组(神阙加命门预防组)、Ⅵ组(神阙治疗组)、Ⅶ组(神阙加足三里治疗组)、Ⅷ组(神阙加命门治疗组).采用羟基脲片灌胃法对后7组进行肾阳虚家兔造模,从预防及治疗两方面观察艾灸对各组家兔血清超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.通过单用"神阙"与"神阙"加"足三里"、"神阙"加"命门"等穴位组合进行比较,观察不同穴位配伍对以上指标影响的差异.结果:造模后,Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组出现明显的肾阳虚症状,SOD活性降低(均P<0.01);经艾灸治疗后,Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ组肾阳虚症状明显改善(均P<0.01),出现明显的SOD活性升高(均P<0.01);Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组造模后出现少许肾阳虚症状,造模前后SOD活性改变不明显(均P>0.05);艾灸"神阙"、"神阙"加"足三里"、"神阙"加"命门"3种方法组间比较差异不明显(均P>0.05).结论:艾灸"神阙"、"神阙"加"足三里"、"神阙"加"命门"3种穴位配伍均可以有效调节肾阳虚家兔血清SOD的活性,对肾阳虚家兔具有明显的预防及治疗作用;单用"神阙"穴和"神阙"加其他穴位相比,其作用差异不明显,艾灸"神阙"穴延缓衰老的机制与调节血清SOD活性关系密切.
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兔轮状病毒的分离与鉴定
目的从疑似病料中分离免轮状病毒.方法从形态学、血清学、分子生物学等几个方面对其进行鉴定.结果从几个方面鉴定的结果显示,疑似病料中含有兔轮状病毒(LaRV)病毒粒子.结论本次实验成功地分离得到了LaRV病毒.
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闭胸无血预充兔体外循环模型的建立
目的 探索建立兔无血预充体外循环术后成活模型的实验方法.方法 实验动物为12只纯种新西兰大白兔,经颈动、静脉插管,无血预充,建立体外循环模型,术后成活饲养.结果 术中及术后监测显示血红蛋白偏低,动脉血气多数偏酸,血压在正常范围.1只兔体外循环过程中因急性左心衰死亡,其余11只均成功建立体外循环并在术后成活饲养24 h.结论 闭胸兔体外循环术后成活模型建立简便可行.
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大功率氦氖激光治疗增生性瘢痕的实验研究
目的建立增生性瘢痕动物模型,探讨大功率氦氖激光对增生性瘢痕的治疗作用及其机制.方法用圆形钻刀在兔耳腹面造成6 mm直径的全层皮肤缺损创面32个,术后21 d对其中10个突出瘢痕进行氦氖激光照射(输出功率120 mW,光斑直径6 mm,每次30 min,隔日1次),另10个突出瘢痕作为对照,术后35 d检测瘢痕组织中的细胞凋亡率(TUNEL技术)和PCNA蛋白表达(免疫组化).结果氦氖激光照射组瘢痕厚度变薄,明显小于对照组(P＜0.05);TUNEL技术显示照射组瘢痕组织中细胞凋亡率增加,明显大于对照组(P＜0.05),免疫组化表明照射组瘢痕组织中PCNA蛋白表达下调,显著低于对照组(P＜0.05).结论大功率氦氖激光能抑制细胞增生性瘢痕的进程,原因可能与氦氖激光抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡有关.
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不同品种白头翁抑菌、抗炎、抗腹泻作用和对兔离体十二指肠运动的影响
目的:比较不同品种白头翁的抑菌、抗炎、抗腹泻作用和对家兔离体十二指肠运动性能的影响.方法:通过体外抑菌法实验,考察朝鲜白头翁、白头翁的抑菌作用；通过蛋清致大鼠足肿胀实验,观察朝鲜白头翁、白头翁的抗炎作用；采用液体石蜡导致的小鼠腹泻,观察朝鲜白头翁及白头翁对腹泻的影响；采用离体器官实验法,考察朝鲜白头翁、白头翁对家兔离体十二指肠运动的影响.结果:白头翁和朝鲜白头翁对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有明显的抑菌作用,并能抑制蛋清所致的大鼠足肿胀；朝鲜白头翁及白头翁对液体石蜡导致的小鼠腹泻有拮抗作用,对兔离体十二指肠肠管运动有抑制作用.结论:朝鲜白头翁、白头翁均有抑菌、抗炎、抗腹泻作用,并对兔离体肠管运动有不同程度抑制作用.
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兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定
目的:寻求家免骨髓间充质干细胞(BoneMesenchymal StemCells,BMSCs)培养与分离简单易行的方法,为下一步骨髓间充质干细胞在呼吸系统疾病的应用打好基础.方法:取3个月龄家兔1只,经双侧髂前上棘抽取骨髓共5.0ml,密度梯度离心法和贴壁筛选法相结合分离、纯化获得BMSCs,倒置差显微镜观察其形态学特性,流式细胞仪鉴定CD34、CD133表达.结果:接种细胞于24小时有少量细胞贴壁,72小时多数细胞可贴壁,贴壁细胞形态多为长梭型或多边形,原代细胞呈集落生长,12-16天可达90%融合,1%胰酶消化后传代培养,培养至第三代备用.流式细胞仪鉴定90%为骨髓间充质干细胞.结论:通过密度梯度离心法与贴壁筛选法可成功分离培养出骨髓间充质干细胞,此方法简单易行,成功率比较高.
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丙种球蛋白治疗RSV毛细支气管炎的临床及免疫学研究
为评估静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗呼吸道合胞病毒 毛细支气管炎(RSV毛支)的临床 疗效及免疫学机理，比较26例IVIG治疗组和30例常规治疗组患儿症状体征消失时间及住院天 数，同时检测治疗前后血清白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因 子-α(TNF-α)水平。结果：与常规治疗组相比，IVIG治疗组喘憋和肺部 体征消失时间明显缩短(4.0天±1.1天比5.2天±1.4天，5.4天±1.5天比6.5天±1. 8天，P分别＜0.001和＜0.05)，而住院天数则无显著差异(9.0天±2.2天比10.3 天±3.1天，P＞0.05)。治疗前两组患儿血清IL-6、IL-8及TN F-α水平均高于正常对照组；IVIG治疗后3种细胞因子水平明显降低，但与常规治 疗组相比无显著差异。结论：细胞因子参与了RSV毛支的发病过程，IVIG治疗有较确切的临 床疗效，但单剂(0.25g/kg)对血清细胞因子的抑制作用不明显。
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兔心内电生理检查及多种心律失常效应的微创方法初探
目的 探索一种对小型动物行心内膜电生理检查及心律失常模型制作的简易微创技术.方法 兔全身麻醉后分离颈静脉,经颈静脉送入多极电极头端至右心房或右心室,也可通过分离出颈动脉并置入5F鞘管,沿鞘管送入多极电极的头端至左心室.将多极电极另一段连接心电图的胸前导联及心脏刺激系统.通过获得的心内膜电位及刺激起搏心电信号情况可确定电极的头端送入右心房、右心室,或左心室.在确定刺激阈值后,固定电极,行心内电生理检查,并诱发房颤等心律失常.结果 利用20只兔实施本研究.多极电极很容易送入心脏,并可获得高大清晰的心房和心室心内膜的心电图.在无需X线设备的情况下,根据心脏刺激与起搏的心电图信号情况进行电极调整,可使电极至所需的心房或心室的部位.通过心房刺激,可以检查窦房结恢复时间、心房不应期、房室结前向传导功能.如果配合静脉滴注乙酰胆碱等药物,心房刺激可成功诱导出房颤及房扑,成功率达95％以上.通过心室刺激,可以检测心室不应期、房室结逆向传功能,如果配合静脉滴注异丙肾上腺素等药物,也可以诱导出室性心动过速及心室颤动,成功率达90％.结论 本实验建立的简易微创技术,在无需X线的条件下可进行兔心内电生理检查及心律失常模型制作,有利药物等心脏电生理研究.
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兔膝关节半月板形态结构增龄性变化的初步观察
为探讨半月板形态结构增龄性变化,采用扫描电镜和光镜观察了1月龄、1年龄和3.5年龄兔半月板形态结构.结果:电镜下见软骨细胞成串位于陷窝内,以1月龄多见,随年龄增加明显减少.半月板的表面呈现条状的隆起,随着年龄增加逐渐变细且短小.各年龄组半月板表面皆可见微细的小孔或空隙区,这些小孔或空隙区随年龄增加而减小.光镜下见半月板水平切面:1月龄兔血管丰富,1年龄、3.5年龄兔只在半月板周边和外1/3处有血管分布.胶原纤维随增龄而由稀少转为成束排列.结果提示各年龄段半月板在代谢、营养供应、修复再生等方面都存在一定的差异.
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MMP-2和TIMP-2在肝癌中的表达及其意义
目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制剂(TIMP-2)在人肝癌组织中的表达和肝癌生物学行为之间的关系.方法:应用免疫组织化学ABC法研究了56例人肝癌组织中MMP-2和TIMP-2 的表达.结果:肝癌组织中MMP-2蛋白表达阳性率为55.4%(31/56),较癌旁肝组织阳性率89.3%(50/56)明显减低(P<0.01).包膜完整组肝癌MMP-2表达阳性率为 78.6 %,包膜突破组60%,无包膜组40.7%,包膜完整组与无包膜组相比有显著性差异(P<0. 05 ).TIMP-2在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达阳性率分别为37.5%(21/56)和66.1%(37/56) , 肝癌中的表达比癌旁肝组织表达也明显降低(P<0.05).包膜完整组肝癌TIMP-2表达阳性率为64.3%,包膜突破组为46.7%,无包膜组为18.5%,包膜完整组与无包膜组相比有显著性差异(P<0.05).经统计学分析表明,肝癌组织中MMP-2表达与TIMP-2表达有显著相关性(P<0.05).结论:肝癌包膜形成是抑制肿瘤浸润侵袭的重要防御反应;TIMP-2可能是通过抑制包膜的降解发挥阻遏肿瘤转移扩散的作用;降解包膜胶原成分的MMP-2及其组织抑制剂TIMP-2在癌组织中的表达状态对于判断肝癌的浸润侵袭程度有重要价值.
关键词： 肝细胞癌 基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶组织抑制剂 免 疫组织化学 -
丹参注射液对失血性休克大鼠脾脏TNF-a表达的影响
目的:探讨丹参注射液对失血性休克大鼠脾脏TNF-a mRNA表达的影响.方法:SD大鼠42只随机分成三组:假手术组7只,未予治疗;治疗组18只,复制失血性休克模型后使用乳酸林格氏液加丹参注射液复苏;对照组18只,复制失血性休克模型后乳酸林格氏液复苏.复苏后分别于1、2、4小时处死动物,每次两组各取6只大鼠.使用即时荧光定量RT-PCR法测定组织中TNF-am RNA表达量.结果:对照组1小时点TNF-a mRNA表达强度明显高于其它组(P<0.05),治疗组4小时TNF-a mRNA表达强度与假手术组差异无显著性意义.结论:丹参能下调脾脏中TNF-a mRNA的表达,从而减少了因失血性休克后TNF-a过度表达对脾脏细胞的损伤,从而对机体免疫功能有一定的保护作用.
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人参多糖对家兔肝缺血/再灌注损伤时血小板聚集功能的影响
目的 探讨人参多糖对家免肝缺血/再灌注损伤时血小板聚集功能的影响.方法 30只家免,随机均分为对照组(C组)、缺血/再灌注组(IR组)和人参多糖组(GP组).观察血小板大聚集率(Ptmax)、大聚集时间(PtT)、聚集坡斜率(PtS)及谷丙转氨酶(ALT)的变化.电镜观察肝组织形态学改变.结果 IR组与C组比较,各时间点Ptmax、PtS、ALT明显升高,PtT显著缩短,肝组织超微结构发生异常改变;人参多糖可逆转上述指标的异常变化.结论 人参多糖可通过抑制血小板聚集功能,改善肝脏微循环,从而防治肝脏缺血/再灌注损伤.
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声辐射力脉冲成像技术对兔急性淤血肝的弹性评价
目的 运用声辐射力脉冲成像技术(acoustic radiation force impulse,ARFI)评价腔静脉结扎前后兔肝的弹性改变.方法 选择5只日本大耳免为研究对象,经耳缘静脉麻醉后开腹,游离兔腔静脉,运用ARFI技术分别于腔静脉结扎前、结扎后20 min对兔右肝同一部位进行检查,比较腔静脉结扎前和结扎后肝组织的弹性改变,实验结束后处死,取肝组织做病理检查.结果 腔静脉结扎前兔左肝ARFI测值明显高于腔静脉结扎后[(1.28±0.08)m/s vs(0.96±0.11)m/s,P<0.05],病理检查见腔静脉结扎后兔肝小叶中央静脉及肝窦扩张明显,内充满红细胞,伴有少量小叶中央肝细胞坏死、水肿.结论 兔肝急性淤血时弹性会减低,ARFI是一种新的技术用于组织弹性的评价.
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γ-干扰素对兔胆总管愈合过程中细胞增殖和转化的影响
目的观察γ-干扰素(IFN-γ)对兔胆总管损伤愈合过程中核增殖抗原(PCNA)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,为临床防治胆管狭窄寻求一条新的途径.方法制作免胆总管损伤修复模型16只,随机分为实验组和对照组各8只,实验组每天肌注IFN-γ 10万IU/kg,对照组肌注等体积生理盐水,8周后处死动物,取材,行HE染色,PCNA和α-SMA免疫组化染色,图像分析仪定量分析.结果实验组细胞增殖指数和α-SMA平均阳性染色面积百分比与对照组相比差异均有显著性意义.结论γ-干扰素通过抑制胆管壁PCNA和α-SMA的表达,抑制胆管壁细胞增殖和转化.
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自制简易胆道支架修复兔胆道缺损的动物实验研究
目的 探讨支架法修复胆道缺损的可行性和安全性.方法 采用医用静脉采血针制造简易胆道支架.将30只兔随机分为A组和B组,每组15只.在A组动物,切除胆总管0.5 cm;B组切除1.0 cm.应用自制简易胆道支架与缺损的胆总管断端进行捆绑,恢复其连续性.于术后1、3、6月各处死5只家兔,观察两组动物术后的生存情况、术前术后肝功能变化,肝脏、新生胆管组织和新生胆管组织病理学改变.结果 两组均顺利完成手术,无术后黄疸发生.术后A组1只兔因胆漏死亡;B组1只因应激性溃疡死亡.A组动物术前ALT为(56.36±6.35)IU/L,术后1、3、6月分别为[(59.63±5.02)IU/L、(54.63±8.26)IU/L、(59.85±7.43)IU/L,P>0.05];AST为(54.13±7.63)IU/L,术后1、3、6月分别为[(57.42±8.31)IU/L、(55.42±5.21)IU/L、(53.62±5.61)IU/L,P>0.05];ALP为(207.35±63.47)I-U/L,术后1、3、6月分别为[(218.42±73.23)IU/L、(195.31±46.73)IU/L、(189.31±37.64)IU/L,P>0.05];TBIL为(0.15±0.08)μmol/L,术后1、3、6月分别为 [(0.17±0.04)μmol/L、(0.14±0.05)μmol/L、(0.16±0.07)μmol/L, P>0.05].B组动物术前ALT为(60.26±3.65)IU/L,术后1、3、6月分别为[(69.21±5.13)IU/L、(63.79±8.35)IU/L、(59.97±6.47)IU/L,P>0.05];AST为(51.33±6.43)IU/L,术后1、3、6月分别为 [(55.43±7.26)IU/L、(61.62±5.73)I U/L、(52.32±5.31)IU/L,P>0.05];ALP为(217.25±53.72)IU/L,术后1、3、6月分别为 [(228.62±71.32)IU/L、(200.35±46.83)IU/L、(209.83±36.41)IU/L,P>0.05];TBIL为(0.14±0.05)μmol/L,术后1、3、6月分别为[(0.16± 0.04)μmol/L、(0.12±0.02)μmol/L、(0.13±0.06)μmol/L,P>0.05];术后两组动物肝组织病理学与术前比较无显著变化;术后1月,两组支架已覆盖充血水肿的新生胆管组织;术后3月两组新生的胆管组织已无水肿存在;术后6月两组新生胆管组织在外观上与正常胆管组织无差异.结论 本实验表明在血供丰富、缺损1.0 cm以内的胆总管具有很强的再生和形成新生胆管的能力.支架法修复1.0 cm以内的胆道缺损安全可行.
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肠道血管通路口服生物利用度研究模型的建立
目的 建立大白兔肠道吸收代谢、肝脏清除等区域性药代动力学研究模型,并行雷贝拉唑肝、肠首过效应研究.方法 16只大白兔采用硬膜外导管从胃十二指肠静脉插管至门静脉,再行十二指肠插管;两导管固定于颈背部皮下,并行造影.其中6只大白兔分别从十二指肠、门静脉及外周静脉给予雷贝拉唑6 mg/kg,各时间点取血,HPLC法检测血药浓度,计算药代动力学参数.结果 15只大白兔置管成功.术后2周内有两只大白兔门静脉导管发生堵塞,3只大白兔十二指肠导管发生堵塞,其余大白兔门静脉及十二指肠导管均保持通畅1月以上.造影显示胃十二指肠静脉及十二指肠插管位置正确,肠道活动性不受影响.雷贝拉唑6 mg/ks时生物利用度为7.9%,肝脏与肠道提取率分别为78.4%、63.6%.结论 采用胃十二指肠静脉及十二指肠插管建立大白兔肠道血管通路模型方法 较为简便可靠,为肠道及肝脏区域性药代动力学研究较理想的模型.
关键词： 苯咪唑类/药代动力学 生物利用度 投药 口服 免 -
实验性兔腰椎间盘退变模型中Fas/FasL基因表达及意义
目的 建立腰推间盘退变模型,检测退变髓核中Fas/FasL派因衣达水平,阐明Fas/FasL基因的过度表达是导致髓核细胞凋亡的主要因素之一,腰椎间盘在Fas/FasL基因的过度衣达的情况下可能导致超常的词亡,终导致椎间盘退变甚或突出.方法 选用20只清洁级成年日本大耳白兔,按体重编号,随机分为2组,即模型组和对照纽.模型组:麻醉后,手术造成腰椎间不稳;并加以异常应力,以促进造模.对照组(n=10):对照组同法麻醉,作皮肤切口后直接缝合;两组动物在相同条件下饲养,于术后1M、2 M随机各取5只兔子行病理学检查证明追模成功,同时检测两组动物隋核中Fas/FasL基因衣达水平.结果 1术后2月模型组兔腰椎间盘2造模2月后,对照组兔腰椎间盘病理学检查无明显退变衣现;而模型组追模2个月后,出现纤维环断裂,髓核向后突出,说明追模成功.2检测本实验提取的总RNA纯度高,RT-PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳后常外透射仅下可见扩增之特异产物条带,且目的基因片段产物与引物设计之目的片段大小完全吻合;Fas mRNA、FasL mRNA 在退变腰椎间盘组织中有过度表达,与正常腰椎间盘组织相比.共差异有显著性(P<0.05).结论 腰推间盘退变模型做核中有Fas/FasL基因衣达,其表达水平与正常腰椎间盘组织相比,其差异有显著性(P<0.05);说明Fas/FasL基因的过度衣达是导致髓核细胞凋亡的主妥因素之一,腆推间盘在该基因的过度衣达的情况下可能导政超常的凋亡,终导致推间盘退变甚或突出.
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加味补肾壮筋汤对膝骨关节炎氧自由基代谢的影响
探讨加味补肾壮筋汤对家兔实验性膝骨关节炎关节软骨病理学和血液中SOD活性、LPO含量的影响.按Hulth法建立膝骨关节炎动物模型,并随机分为模型组、芬必得组和中药组.检测家兔血液中SOD活性和LPO含量,并在手术显微镜、光镜及扫描电镜下对关节软骨进行观察.结果中药组SOD活性较芬必得组和模型组高(P＜0.05),LPO含量较芬必得组和模型组低(P＜0.05).手术显微镜、光镜及扫描电镜下观察,中药组关节软骨退变程度较芬必得组和模型组轻.表明加味补肾壮筋汤具有抗脂质过氧化,提高抗氧化酶活性,保护软骨细胞免于自由基损害,延缓关节软骨退变,促进关节软骨修复的作用.
关键词： 膝关节骨性关节炎/中医药疗法 加味补肾壮筋汤/治疗应用 氧自由基/血液 实验研究 动物 免 -
肿瘤坏死因子诱导兔脑膜炎及川芎嗪的治疗作用
目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)在细菌性脑膜炎时的作用机制及川芎嗪的治疗效果. 方法采用重组肿瘤坏死因子α于兔小脑延髓池接种,分别给予川芎嗪及地塞米松治疗,观察脑脊液血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素-F1α(6-KP)、脑含水量等的变化. 结果脑膜炎组6h脑脊液TXB2、6-KP浓度迅速上升,地塞米松组6h脑脊液TXB2与6-KP浓度均下降,川芎嗪组6h脑脊液TXB2浓度下降,但6-KP浓度升高,地塞米松与川芎嗪组脑水肿均较轻. 结论由于川芎嗪不降低脑脊液6-KP浓度且副作用较少,故可能成为较好的脑水肿和脑膜炎治疗药物.
