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重组人表皮生长因子促进兔眼结膜杯状细胞增生的实验研究
目的 通过在活体灰兔眼结膜囊使用重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)后运用病理检查方法来观察rhEGF对结膜杯状细胞生长的影响.方法 随机将16只雄性新西兰灰兔分成实验组和对照组,每组各8只.先在每只灰免的双眼下穹窿近内眦角6 mm作一纵形切口,切取2 mm×4 mm的结膜组织,用6-0手术缝线缝合伤口2针.2组所有的兔眼右侧组织经PBS染色后计数杯状细胞;2组所有左侧组织经过固定、石蜡包埋、HE染色后,在OLYMPUS BXS1 显微读片系统下观察结膜的杯状细胞形态.实验组中术后双眼用5×106U·L1的rhEGF滴眼,每天4次,共用8 d;而对照组则用生理盐水滴眼,每天4次,共用8 d.在上次取组织后5 d拆除缝线;在取结膜组织手术后14 d再按上述方法剪取用药后的2 mm×4 mm双侧结膜组织进行杯状细胞计数和组织病理学观查.结果 实验组中,用rhEGF前结膜组织中的杯状细胞数(295.82±198.87)mm-2;用药后结膜的杯状细胞数达(457.65±225.71)mm-2.对照组用药前杯状细胞计数为(297.63±215.72)mm-2;用药后杯状细胞计数为(307.52±197.57)mm-2.2组间用药后以及实验组用药前后结膜的杯状细胞数的差异有统计学意义(P＜0.01),而对照组用药前后和2组间用药前的杯状细胞数目差异无统计学意义(P＞0.05).结论 rhEGF 在活体动物实验中对结膜的杯状细胞增生有一定的促进作用.
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围绝经期性激素水平下降所致兔干眼症模型的建立
目的 建立围绝经期性激素水平下降所致的干眼症白兔模型,为探讨围绝经期性激素水平下降导致干眼症的发病机制和实验治疗提供依据.方法 对6只成年白兔采用双侧卵巢切除术制作干眼症模型,术后饲养45 d,同时取6只正常白兔作空白对照,2组均采用Schirmer Ⅰ试验观察其基础泪液分泌量、测定泪膜破裂时间观察其泪膜稳定性的改变,并进行形态学(光镜、免疫组织化学)检测.结果 白兔模型建立后,模型兔Schirmer Ⅰ实验测量值明显低于正常白兔(P＜0.01)、泪膜破裂时间明显短于正常白兔(P＜0.01),泪腺导管及腺泡上皮细胞中IL-1β、TNF-α、Fas、FasL、Bax阳性表达的细胞数均明显高于正常白兔(P＜0.01),而TGF-1β、bcl-2阳性表达的细胞数与正常相比差异无统计学意义.结论 双侧卵巢切除术是成功的围绝经期性激素水平下降导致的干眼症白兔模型的造模方法,能模拟围绝经期干眼症自然临床病理过程,为研究实验治疗围绝经期干眼症提供了较为理想的动物模型.
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体外培养的成年兔眼色素上皮细胞屏障功能的研究
目的 研究体外培养的成年兔眼视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的血-视网膜外屏障功能.方法 对成年兔眼RPE 细胞进行原代培养,免疫组织化学通过MNF116和S-100鉴定细胞纯度.将细胞接种于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上,分别于培养过程中不同时间点进行跨膜电阻测定,待电阻达到平台期后对膜切面行透射电子显微镜观察;并通过细胞ZO-1免疫荧光化学法了解紧密连接的形成情况.结果 成功原代培养了兔眼RPE 细胞并且无其他细胞污染.接种于Transwell后,RPE 细胞TER值3周达到高值约88.14 Ω·cm2,维持1周并开始下降.透射电镜可见细胞表面有大量微绒毛并形成紧密连接.ZO-1免疫荧光化学结果可见细胞形态基本呈多边形,紧密连接基本形成.结论 成年兔眼RPE细胞通过培养于铺有层粘连蛋白的Transwell滤膜上可以成功建立细胞屏障功能模型.
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负压吸引眼压效应的实验研究
目的探讨负压吸引对实验动物眼压的影响及机理.方法新西兰大白兔18只,右眼进行负压吸引,左眼作对照.观察眼压、房水动力学及房角组织病理结构改变.结果负压吸引可以降低眼压,相应持续3d.负压吸引组的房水外流速度增加,组织病理学结构显示负压吸引后房水静脉扩张、Fantan间隙变宽,巩膜和小梁网出现间隙.结论负压吸引可以降低眼压,该效应与房水外流速度增加有关.
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局部药物刺激对兔骨骺端骨生长变化的实验观察
目的:研究局部药物刺激对兔胫骨骨骺端骨生长变化及其在长骨纵向生长中的意义.方法:日本大耳白兔16只,约3个月兔龄,取双侧后肢胫骨骨骺端做实验,右侧用中药药线刺激为实验组,左侧未用药物刺激为对照组.术后45d、90d分别处死动物,取标本观察外观变化,同时制作超薄组织切片,TEM观察标本骨生长变化.结果:术后45d实验组胫骨骨骺端外形较对照组膨隆变粗,周径变大,术后90d胫骨骨骺端外形明显增粗变大,周径、胫骨全长较对照组增长.电镜观察:实验组45d后可见成骨细胞增生,粗面内质网丰富且有扩张现象,前成骨细胞转化过渡型成骨细胞,局部可见新生交织骨;90d后前成骨细胞及成骨细胞数量明显增多,新生骨组织内大量成骨细胞向骨细胞转化,可见少量交织骨形成和新生小血管.结论:药物刺激可使骨骺端骨生长发生改变,促进骨骺端软骨细胞、威骨细胞的增生繁殖,提示药物刺激能使胫骨骨骺端出现纵向增长和横向增粗.
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桃红四物颗粒对兔自体移植皮片VEGF表达的影响
目的:探讨桃红四物颗粒对兔自体移植皮片成活的影响.方法:将80只兔随机分为4组,均行皮片移植手术造模,并用3种不同剂量的桃红四物颗粒干预2周,观察其对移植皮片VEGF表达的影响.结果:桃红四物颗粒高、中、低剂量3组与对照组皮片VEGF比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),且桃红中剂量组皮片成活情况较其它3组好.结论:桃红四物颗粒能提高兔自体移植皮片中VEGF的表达,促进移植皮片成活.
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益气明目丸对视网膜缺血兔血管活性物质的影响
目的:观察益气明目丸对视网膜缺血免血管活性物质的影响,并与补中益气丸比较.方法:造脾胃气虚、视网膜缺血模型,以NO、ET、ET/NO为指标检测模型.结果:空白组、益气明目丸组NO、ET水平无显著性差异.益气明目丸与模型组、补中益气丸组比较,NO、ET水平ET/NO值有显著性差异.结论:益气明日丸对视网膜缺血免血管活性物质有调节作用.
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复明片对兔视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞增殖的影响
目的 研究复明片对兔实验性视网膜脱离后视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖的影响.方法 用有色家兔96只设正常对照组(A组),制作视网膜脱离模型后分模型组(B组)、西药对照组(C组)、复明片组(D组).并于造模后7、14、21 d分别取视网膜组织制备细胞悬液,流式细胞仪检测各兔增殖细胞核抗原(PCNA)在视网膜神经上皮层的表达.结果 脱离后视网膜神经上皮层PCNA阳性细胞表达均呈上升趋势,7d后开始下降,且复明片组相较其余各组比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 复明片通过恢复视网膜色素上皮与神经上皮之间的接触,阻止RPE的增殖即PCNA的表达.
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兔实验性脑积水模型的建立
目的 建立免实验性脑积水模型.方法 取成年家免28只,随机抽取分为实验组18只,对照Ⅰ组6只,对照Ⅱ组4只.全麻后,三纽均测ICP.实验组取实验动物自体颈部肌肉5 g加生理盐水2 mL研浆,注入枕大池;对照组Ⅰ注入等量生理盐水,对照Ⅱ组仅行枕大池穿刺.19 d后全麻,测ICP后断头处死,取全脑固定,切片,测量脑室大小.结果 实验组18只均出现枕大池及第4脏室流出道粘连、梗阻,形成梗阻性脑积水;手术前三组动物之间mICP差异无显著性(P＞0.05);手术后实验组mICP明显高于对照Ⅰ组和对照Ⅱ组(P＜0.05),而对照Ⅰ组和对照Ⅱ组之间差异无显著性(P＞0 05);实验组侧脑室、第4脑室明显大于对照Ⅰ、Ⅱ两组(P＜0.01),而对照Ⅰ、Ⅱ组之间差异无显著性(P＞0.05).结论 用此方法建立的脑积水动物模型简便易行,重复性和稳定性好.采用自体肌浆作阻塞、粘连材料术后反应轻,其病理过程更接近临床,适用于脑积水的实验研究.
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腹膜透析时白细胞介素-8与溶质转运
目的研究IL-8水平与蛋白质转运之间的关系,了解腹膜透析溶质转运机制.方法将12只新西兰大白兔随机分为实验组和对照组.实验组和对照组腹腔内分别注入2.5%葡萄糖透析液(40ml/Kg),同时实验组腹腔内注入3×109CFU金黄色葡萄球菌悬液1ml,而对照组腹腔内注入1ml生理盐水作为对照.分别测定各时间点透析液和血肌酐、葡萄糖、总蛋白、白蛋白,同时测定透析液白细胞介素-8的浓度,分别计算肌酐、总蛋白、白蛋白D/P值和葡萄糖D/Do值.结果实验组血肌酐、总蛋白和白蛋白的D/P明显升高及葡萄糖D/Do明显降低,与对照组比较均有显著性差异(P＜0.05).实验组各时间点透析液内白细胞数及中性粒细胞数和IL-8水平升高,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).各时间点透析液内IL-8水平与总蛋白D/P值明显相关(P＜0.05),60min以前各时间点透析液内IL-8水平与白蛋白D/P值无相关性(P＞0.05),但60min以后各时间点则有显著相关性(P＜0.01).结论腹腔内注射3×109CFU金黄色葡萄球菌标准菌株可成功制成兔腹膜透析腹膜炎动物模型.IL-8可影响大小分子蛋白质转运,但对大分子蛋白质转运的影响较晚.
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用ESR检测兔心肌顿抑时一氧化氮的动态变化
目的:用顺磁共振技术(ESR)测定兔在心肌缺血再灌注过程中心肌顿抑时,血液中一氧化氮(NO)动态变化.方法:结扎前降支制成心肌缺血-再灌注模型,经颈动脉左心室插管,多导生理仪记录左心室大上升速率(dp/dt max)、心室舒张末压力、动脉血压、心率等血液动力学指标.分别于缺血前、缺血5 min、10 min,再灌注5 min、10 min、30 min、60 min、90 min、120 min各时点取静脉血1 mL,在电子自旋共振仪记录NO波谱,测定NO水平.结果:在再灌注 5 min、120 min时,NO浓度明显高于缺血前[(23.4±4.8) mm vs (12.0±0.5) mm,(21.4±1.8) mm vs (12.0±0.5) mm(P＜0.01)].心肌收缩功能在缺血5 min时已经开始受损[(4 965±295.6) mmHg/s vs (3967±315.3) mmHg/s,与缺血前比较P＜0.01],但是在再灌注5 min时明显低于缺血5 min时[(3327±120.4) mmHg/s vs (3967±315.3) mmHg/s,P＜0.05].结论:再灌注早期NO升高而心肌收缩力下降,提示NO对早期缺血再灌时心肌顿抑有加重作用.
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三七对兔血糖双向调节作用的实验观察
目的观察三七粉对兔血糖的双向调节作用.方法将健康兔30只随机分为5组(每组6只):正常血糖给药观察组、低血糖给药组、低血糖未给药组、高血糖给药组和高血糖未给药组.每组取空腹血后,分别给予三七粉水溶液和生理盐水灌服,于30、60、120min取血,测定血糖含量.结果低血糖给药组给三七粉水溶液30min后血糖升高,与未给药组比较差异有显著性(P<0.05);高血糖给药组给三七粉60min后血糖下降,与未给药组比较差异有高度显著性(P<0.01);而正常血糖组给三七粉水溶液后对血糖无影响.结论三七对血糖有双向调节作用,既能升高血糖浓度,又能降低血糖浓度,而对正常血糖无影响.
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参七黄稳斑胶囊对兔动脉粥样硬化斑块稳定性的影响
目的 观察参七黄稳斑胶囊对兔动脉粥样硬化斑块稳定性的影响.方法 人工喂养12周建立兔动脉粥样硬化(AS)病变模型后,分为对照组、参七黄稳斑胶囊治疗组、辛伐他汀治疗组.24周末取腹主动脉测定斑块面积、内膜厚度、中膜厚度、纤维帽厚度.结果 参七黄稳斑胶囊治疗组在减少斑块面积,降低内膜、中膜厚度,增强纤维帽厚度方面优于辛伐他汀治疗组.结论 参七黄稳斑胶囊有较好的稳定兔AS斑块的作用.
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高效液相色谱法测定兔血浆中黄芩苷的含量
目的:建立测定兔血浆中黄芩苷的含量测定方法.方法:用PEG400-2%偏磷酸沉淀血浆蛋白,离心后取上清液进行色谱分析.色谱柱为Diamosil-C18,流动相为乙腈-0.1%磷酸(25:75,V/V),流速为1 ml/min,检测波长275 nm.结果:黄芩苷的质量浓度在0.087 22～2.907 5 mg/L(r=0.989 9);低、中、高3个浓度的质量控制(QC)样品的相对回收率分别为96.3%、97.3%和96.6%.结论:方法简便快速,适用于黄芩苷的血药浓度测定及药代动力学研究.
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冠状静脉窦逆行灌注血管内皮生长因子基因的实验研究
目的 观察经冠状静脉窦逆行灌注血管内皮生长因子基因(pAdtrackCMVVEGF165)对其表达分布的影响.方法 20只新西兰大白兔随机分为实验组(VEGF基因治疗组)和对照组,2组动物常规全麻,气管插管,胸骨正中切开,暴露心脏,结扎左室支建立心肌梗死模型,冠状静脉窦插管,实验组逆行灌注pAdtrackCMV-VEGF165,对照组以生理盐水对照.全程记录心电,1周后取梗死区(左室心尖部)及非梗死区(高侧壁)心肌,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因表达情况.结果 对照组1只动物死亡,实验组所有动物全部存活;结扎左室支即刻所有动物出现ST段抬高并与T波融合;RT-PCR显示实验组梗死区检测到转染基因表达,而非梗死区及对照组则未检测到转染基因表达.结论 冠状静脉窦逆行灌注技术能很好地将VEGF基因靶向转移至梗死区.
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CREG在动脉粥样硬化血管中表达的变化
目的:探讨ElA激活基因阻遏子(CREG)在动脉粥样硬化(AS)发展中的作用.方法:采用Western blot方法检测AS患者血管中CREG表达的变化.用高脂饲料喂养兔子的方法模拟AS的自热进程,观察血管的形态学变化.用免疫组化染色法检测血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖及CREG、SMoα-actin和SM MHC表达的变化.结果:在AS患者的血管中,CREG的表达明显下调.在动物模型中,以高脂饲料喂养兔1个月时,血管内皮出现不光滑、内膜增厚,中膜VSMCs出现表型转化,收缩蛋白SMα-actin和SM MHC的表达开始下降,细胞出现增生,此时CREG 的表达也开始下调.以高脂饲料喂养兔2个月时,可见内皮有中断、破损现象,内膜增厚明显,增殖细胞核抗原(PCNA)表达阳性的细胞明显增多,CREG的表达进一步下调,VSMCs中的收缩蛋白也进一步下降.结论:在AS 进程中,血管中膜的VSMCs由收缩表型向合成表型转化,细胞增生活跃、分化减弱,CREG随着AS的发展,在VSMCs中的表达逐步下降,提示CREG作为维持VSMCs分化的蛋白与AS的发生发展密切相关.
关键词： 动脉粥样硬化 EIA激活基因阻遏子 血管平滑肌细胞 免 -
三磷酸腺苷后处理对心肌缺血/再灌注损伤的影响
目的:观察三磷酸腺苷(ATP)和腺苷A2a受体激动剂CGS-21680后处理对心肌缺血/冉灌注损伤(MIRI)的影响,并探讨其作用的机制.方法:健康新西兰大白兔60只,随机分成5组(n=12):即对照组、缺血/冉灌注(L/R)组、缺血后处理(IPO)组、ATP组及CGS-21680组.建立兔心肌I/R模型,于再灌注末颈动脉取血,应用放射免疫测定法(RIA)测定血清中白细胞介素-1B(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；用TUNEL法榆测心肌细胞的凋亡；实时荧光定量RT-PCR检测各组心肌组织中IL-1β mRNA和TNF-α mRNA的表达.结果:①与I/R组比较,IPO组、ATP组和CGS21680组血清IL-1β、TNF-α的含量明显降低(P＜0.01)；而3组组间相比较无显著差异.②IPO组、ATP组和CGS-21680组的细胞凋亡指数(AI)较I/R组明显降低,心肌组织损伤也显著减轻.同时,IPO组、ATP组和CGS-21680组IL-1β、TNF-α mRNA的表达明显低于I/R组；但3组间比较无显著差异.细胞凋亡和IL-1B、TN F-α mRNA的表达之间呈正相关(分别为r=0.91和r=0.93,P＜0.05).结论:ATP后处理可减轻MIRI,其作用机制可能与抑制炎症反应,减少细胞凋亡有关.
关键词： 心肌缺血/再灌注损伤 缺血后处理 白细胞介素-1B 肿瘤坏死因子-α 免 -
溶激酶药效学实验研究
材料与方法1材料的选择1.1试剂:溶激酶批号990813陕西省微生物研究所,尿激酶批号604-9818,730U/支,纤维蛋白原(牛血),批号9014,可凝蛋白80mg/支,肝素钠批号509-9010,凝血酶批号8806,32BP/支,均由中国药品生物制品检定所生产.
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p53与bcl-2基因变化在股骨头缺血性坏死发病中的影响实验研究
目的：观察p53和bcl-2基因在股骨头坏死动物模型中的变化，了解其在该疾病发病的作用。方法：32只3个月龄新西兰大白兔随机分为实验组和对照组（均以幼兔的右侧股骨头为实验侧），给予实验组动物经右侧股骨颈注射医用T H胶0．5ml致骺板缺血，建立幼兔Perthes 病模型（A组），以相同方法用给予对照组右侧股骨头注射同等剂量生理盐水（B组），分别于建模后第6、8、10、12周取两组等量动物进行股骨头病理切片，观察两组股骨头p53和bcl-2凋亡基因表达的变化。结果：A组p53基因表达阳性率与股骨头骺板细胞凋亡率呈明显正相关性（ r＝0．7， P＜0．05），bcl-2基因表达阳性率与其之间呈明显负相关性（ r ＝-0．7， P＜0．01）。B组p53与bcl-2基因无明显变化。结论：p53和bcl-2凋亡基因与儿童股骨头坏死有相关性。
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银杏叶提取物对兔外周血干细胞动员的影响
目的：探讨银杏叶提取物对兔外周血干细胞的动员作用。方法：30只26～28周龄新西兰大白兔，体重为2．5～3．0kg ，随机分三组：银杏叶提取物组（Egb）、G-CSF组、生理盐水组，给药方法为腹腔注射7d ，1次/d；给药后2～8d ，采用外周血WBC和MNC计数、造血干细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组外周血WBC、MNC、CD34＋细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM 、CFU-MK、CFU-E的产率及兔骨髓基质细胞中VCAM-1阳性细胞百分率。结果：Egb组给药第7天外周血WBC、MNC 数量达到高峰，分别为给药前的3倍和3．5倍；Egb 组 CD49d 阳性细胞、外周血CD34＋及骨髓基质细胞的VCAM-1阳性细胞百分率分别为（9．37±3．01）％、（0．63±0．37）％和（48．13±9．84）％，均高于生理盐水组；其中CFU-GM、CFU-M K和CFU-E产率分别为（12．94±3．03）％、（11．49±2．93）％和（24．52±8．62）％，均高于生理盐水组。结论：银杏叶提取物（Egb）对兔骨髓造血细胞有一定的增生作用，同时对外周血干细胞有一定的动员作用，这可能与其上调兔骨髓基质细胞和外周血粘附分子的表达有关。
