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大黄素对胆管癌QBC939细胞凋亡及丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径表达的影响
目的 观察大黄素在体外对胆管癌QBC939细胞增殖的抑制作用及信号转导通路丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响.方法 用大黄素作为干预因素,剂量效应组分别用不同浓度大黄素的培养液与QBC939细胞共培养;检测细胞增殖、凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中c-myc mRNA表达,Western blot检测细胞中c-myc、MAPK、p-MAPK蛋白质的表达.结果 大黄素抑制QBC939细胞增殖,0、20、40、80 μmol/L大黄素对QBC939细胞增殖抑制率分别为(4.73±0.88)％、(21.27±4.04)％、(38.68±4.57)％、(62.45±6.12)％ (P ＜0.05),c-myc、p-MAPK蛋白明显下降,MAPK蛋白表达无变化.结论 大黄素可能通过抑制MAPK信号转导途径抑制QBC939细胞增殖.
关键词： 胆管癌细胞株QBC939 大黄素 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 -
丝裂原活化蛋白激酶信号通路在风湿性心脏病病变瓣膜组织的表达及意义
目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在风湿性心脏病病变瓣膜组织中的表达及其意义.方法 选取我院心脏外科住院手术的风湿性心脏瓣膜病患者50例作为实验组;非风湿性瓣膜病患者20例作为对照组,收集两组患者术中瓣膜标本.实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法分析两组病变瓣膜组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、c-jnn氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)3种信号转导通路的mRNA;采用Western blot分析两组病变瓣膜组织中p38MAPK、JNK、ERK 3种信号转导通路总蛋白及磷酸化蛋白含量.结果 (1)Real-timePCR:实验组患者瓣膜中ERK、JNK和p38MAPK的mRNA表达值为284.15±58.19、157.76±48.47和166.37±34.78,对照组为273.64±54.48、146.47±43.10和162.41±35.37.3种信号转导通路mRNA在两组瓣膜中表达量差异无统计学意义(P＞0.05);(2)Western blot:实验组患者瓣膜中ERK、JNK和p38MAPK的总蛋白灰度值为0.759±0.053、0.536±0.042和0.491±0.032,对照组为0.781±0.052、0.515±0.038和0.446±0.033.两组瓣膜中3种信号转导通路的总蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).(3)实验组患者瓣膜中p-ERK、p-JNK和p-p38MAPK的磷酸化蛋白灰度值为0.865±0.054、0.462±0.036和0.537±0.031,对照组为0.813±0.048、0.196±0.022和0.495±0.030.JNK信号转导通路磷酸化蛋白在实验组瓣膜中表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而p38MAPK、ERK两种信号转导通路磷酸化蛋白在两组瓣膜中表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MAPK信号转导通路中的JNK信号通路在风湿性心脏瓣膜病变的发病过程中起重要作用.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 风湿性心脏病 瓣膜 -
沉默乙型肝炎病毒编码X蛋白基因表达增强索拉非尼促人肝癌细胞株PLC的凋亡
目的 探讨沉默乙型肝炎病毒编码X蛋白(HBx)基因后对索拉非尼促人肝癌细胞株PLC凋亡的影响及其机制.方法 应用小干扰RNA(siRNA)方法沉默HBx基因,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测HBx mRNA表达水平,流式细胞技术检测细胞凋亡,Real-time PCR基因芯片检测HBx-siRNA转染后索拉非尼作用肝癌敏感细胞株PLC丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路基因的表达.结果 HBx特异的siRNA作用后,HBx mRNA表达水平为0.61,与其他对照组比较显著下调(P＜0.05).索拉非尼作用HBx-siRNA干扰后PLC细胞株凋亡表达率为43％,显著高于其他对照组(P＜0.05).索拉非尼作用PLC细胞后,与对照组比较,实验组MAPK信号通路中有13个差异表达基因,其中＞2.0倍的有2个,≤0.5倍的有11个.用siRNA干扰去除HBx基因的影响,经索拉非尼作用PLC细胞后,与对照组比较,实验组MAPK信号通路中有37个差异表达基因,其中＞2.0倍的有1个,≤0.5倍的36个.结论 沉默HBx基因增强了索拉非尼促人肝癌细胞株PLC的凋亡作用,可能是沉默HBx基因表达后,扩大和增强了索拉非尼对MAPK信号通路基因的抑制作用.
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缺氧诱导肝癌细胞释放高迁移率族蛋白B1及其机制
目的 探讨缺氧对肝癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用及其机制.方法 采用正常肝细胞株QSG-7701和肝癌细胞株SMMC-7721,观察缺氧(1％O2)培养3～24h后对HMGB1胞外释放、HMGB1基因表达和HMGB1胞内分布的影响,使用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂探讨缺氧诱导HMGB1释放的机制.观察28例肝细胞癌患者血清HMGB1水平的改变.结果 肝细胞癌患者血清HMGB1水平[(19.3±7.2) μg/L]明显高于健康对照者[(4.1±1.6) μg/L,P＜0.01].QSG-7701和SMMC-7721细胞经缺氧培养后,3h即见培养上清液中HMGB1含量明显升高,HMGB1 mRNA表达于6h后显示增强,且SMMC-7721株改变更为显著.SMMC-7721细胞经缺氧培养12 h后,核浆HMGB1分布发生明显改变,胞质HMGB1蛋白表达量升高.SB203580、SP600125和PD98059对缺氧诱导HMGB1释放均显示不同程度的抑制作用.结论 缺氧能诱导肝癌细胞表达、释放HMGB1,其诱导HMGB1释放机制与MAPK信号通路有关.
关键词： 高迁移率族蛋白B1 癌 肝细胞 缺氧 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 -
鹅掌草皂苷抗肿瘤作用研究
目的 研究鹅掌草单体皂苷的抗肿瘤活性.方法 用MTT法检测鹅掌草单体皂苷I4a、flI对人宫颈癌HeLa细胞、HeLa细胞株加脂多糖(LPS)诱导模型、人肝癌HepG2细胞、人肝癌Bel-7402细胞生长抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测鹅掌草单体皂苷对肿瘤细胞凋亡的影响;用Werstem blot蛋白印迹法检测鹅掌草单体皂苷对肿瘤细胞MAPK信号蛋白的影响.结果 鹅掌草皂苷对肝癌细胞Bel-7402、宫颈癌细胞HeLa等均有一定的抑制生长的作用,并有一定的剂量依赖关系,浓度在5.0μmol/L时有促进细胞凋亡的作用,对不同细胞株的结果相似.结论 鹅掌草皂苷具有抑制肿瘤细胞生长作用,诱导肿瘤细胞死亡的主要途径是凋亡,且可以通过影响MAPK信号通路,抑制磷酸化P-p38、P-ERK蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用.
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来曲唑对睾丸间质细胞系TM3增殖、凋亡能力的影响及作用机制
目的:研究来曲唑(letrozole,LE)对睾丸间质细胞系TM3增殖、凋亡能力和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响.方法:采用不同浓度的LE(1,10,100,1 000μmol/L)处理小鼠睾丸间质细胞TM3,细胞计数(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞增殖.采用LE(100 μmol/L)和MAPK信号通路抑制剂APS-2-79(50 nmol/L)分别单独或联合作用于小鼠睾丸间质细胞TM3 48 h,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测MAPK信号通路关键蛋白总细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylation of extracellular regulated protein kinases,p-ERK)的表达.结果:LE浓度在1.0～100.0μmol/L时,从作用的第24小时开始,能够显著促进小鼠睾丸间质细胞TM3(P＜0.05),具有时间和剂量依赖效应.小鼠睾丸间质细胞TM3培养48 h,LE组细胞的OD450值显著高于对照组和LE+APS-2-79组(P＜0.05).而APS-2-79组的细胞的OD450值显著低于对照组(P＜0.05).LE组细胞凋亡率显著低于对照组和LE+APS-2-79组(P＜0.05).而APS-2-79组的细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.05).LE组ERK和p-ERK蛋白表达以及p-ERK与ERK比值显著高于对照组和LE+APS-2-79组(P＜0.05);而APS-2-79组的ERK和p-ERK蛋白表达以及p-ERK与ERK比值显著低于对照组(P＜0.05).结论:LE能够促进小鼠睾丸间质细胞TM3的增殖,抑制其凋亡,其作用机制可能与MAPK信号通路相关.
关键词： 来曲唑 增殖 凋亡 丝裂原活化蛋白激酶信号通路
