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体外诱导脐带血干细胞成心肌细胞的实验研究
目的:为探讨体外诱导脐带血干/祖细胞形成心肌细胞的可行性以及寻找佳诱导条件.方法:取胎盘的脐带血经Ficoll处理后提取单个核细胞层(MNC),在不同浓度的5-aza的DMEM培养基中诱导培养,用心肌特有的肌球蛋白重链(MHC)作免疫组化标记诱导形成的心肌细胞.结果:用5-aza体外诱导培养能形成心肌细胞,仅10μmol/L形成的心肌细胞多.结论:脐带血在体外培养条件下经5-aza处理能诱导分化成心肌细胞,佳浓度为10μmol/L.脐带血可作为修复损伤心肌的细胞移植的一个来源.
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氯沙坦对心肌梗死后左心室肌球蛋白重链基因影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对急性心肌梗死后左心室心肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响.方法 Sprague-Dawley大鼠24只随机分为3组,正常对照组,急性心肌梗死组,氯沙坦急性心肌梗死组,每组8只.急性心肌梗死造模后第2日开始灌胃给药,口服氯沙坦日剂量3 mg/kg,6周后测量左心室重量、进行心肌肌球蛋白重链基因分析.结果 急性心肌梗死组大鼠心脏重量指数明显增加,氯沙坦治疗后心脏重量指数明显下降(P＜0.01);Northern plot发现,急性心肌梗死组大鼠心肌细胞的α-MHC mRNA表达量明显下降,而β-MHC mRNA的表达量则显著上升;而氯沙坦治疗组大鼠心肌的α-MHC mRNA表达较急性心肌梗死组增加,α-MHC mRNA表达明显降低(P＜0.01).结论 氯沙坦能减轻梗死心肌肥厚,改善梗死心肌心室重构,机制与其调节心肌MHC的基因表达有关.
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心肌血管紧张素Ⅱ在运动和高血压性心肌肥大时肌球蛋白重链变化中的作用探讨
目的：为了解心肌局部血管紧张素对运动和高血压两种不同的心肌肥大细胞表型是否参与变化调节。方法分析正常的自发性高血压大鼠产生运动后其心肌血管紧张素Ⅱ与肌球蛋白重链的异型变化，并通过十二周时间的游泳训练再行观察。结果正常安静的自发性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ与α-和β-肌球蛋白重链的变化没有明显的关联性（r=0.1801；0.1822；0.1798；P＞0.05），但经过十二周的游泳训练后，其心肌β-肌球蛋白重链得到增加，血管紧张素Ⅱ中含量升高，两者呈正相关（r=0.7643；0.7568，P＜0.05）。自发性高血压大鼠的心肌血管紧张素Ⅱ和β-肌球蛋白重链比WKY高87.86％和45.98％，两者呈正相关（r=0.8697；P＜0.05），自发性高血压大鼠心肌血管紧张素Ⅱ与α-肌球蛋白重链呈负相关(r=-0.8711，P＜0.05)，WKY心肌血管紧张素Ⅱ与α-和β-肌球蛋白重链之间没有明显相关性(r=0.3013；0.0275；P＞0.05)。运动自发性高血压大鼠β-肌球蛋白重链向α-肌球蛋白重链逆转，自发性高血压大鼠与α-/β-肌球蛋白重链呈正相关(r=0.8121；P＜0.05)。结论心肌局部血管紧张素Ⅱ在运动性的心肌肥大中对α-肌球蛋白重链与β-肌球蛋白重链都具有上调作用，在运动逆转高血压心肌肥大时肌球蛋白重链，具有对α-/β-肌球蛋白重链的上调作用。
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模拟失重影响大鼠比目鱼肌梭内外肌纤维肌球蛋白重链的表达
[目的] 探讨模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭外肌纤维和梭内肌纤维肌球蛋白重链表达的变化.[方法] 采用免疫组织化学技术,检测模拟失重条件下大鼠比目鱼肌梭内肌纤维及梭外外肌纤维对单克隆抗体NOQ7.5.4.D和MY32的免疫反应性.[结果] 经历模拟失重的大鼠比目鱼肌Ⅰ型纤维(对NOQ7.5.4.D呈阳性反应)的构成比减少,Ⅱ型纤维(对抗体MY32呈阳性反应)的构成比增加.模拟失重3 d,7 d,14 d,30 d组Ⅰ型肌纤维分别占86.96%,84.91%(P<0.01),69.14%(P<0.01),66.07%(P<0.01);Ⅱ型纤维分别占16.14%,18.21%(P<0.01),31.08%(P<0.01),32.15%(P<0.01).核袋纤维对NOQ7.5.4.D的免疫反应性增强,核链纤维无改变,呈阴性反应;核袋纤维对MY32的免疫反应性减弱,核链纤维对MY32的反应增强.[结论] 模拟失重除影响肌梭外肌纤维MHC的表达、引起肌纤维类型转换外,还导致梭内肌纤维MHC表达表型发生改变.
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慢性电刺激对成肌分化的C2C12细胞肌型转换的影响
目的 研究钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)在低频复合生理频率慢性电刺激(chronic electrical stimulation with lower physiological frequency,CESLPF)对骨骼肌细胞肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达的影响.方法 以体外2％马血清诱导小鼠成肌母细胞C2C12成肌分化为模型.实验分3组:对照组、CsA组和KN93组.对照组为正常分化的细胞;CsA组和KN93组在细胞诱导分化3d后,分别用CaN抑制剂环孢菌素A(CsA,8μmol)、Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶(CaMK)抑制剂KN93(6μmol)单一或联合CESLPF(10 +40 Hz,1.5 h/d,共2d)处理.通过RT-PCR、Western blot检测观察成肌分化过程中肌球蛋白重链亚型的表达水平及其转换情况,采用比色法检测CaN的活性.结果 在成功构建的体外成肌分化模型上发现,CsA和KN93能够抑制C2C12细胞MHC Ⅰ的mRNA及蛋白的表达.与分化对照组MHC Ⅰ mRNA相对表达量(0.79 ±0.04)相比,CsA组(0.62±0.03)和KN93组(0.69±0.05)能够抑制C2C12细胞MHC Ⅰ型纤维的表达(与对照组比P＜0.05);对照组、CsA和KN93处理组MHC Ⅰ蛋白相对水平分别是(0.91±0.05)、(0.36±0.01)和(0.66±0.02).对照组MHCⅡb相对表达量为(0.53±0.01),CsA(0.63±0.02)和KN93 (0.75±0.03)促进MHCⅡb型纤维的表达(与对照组比较,P＜0.05);CESLPF能够逆转上述改变(与对照组比较,P＞0.05).CsA能够抑制CaN的活性表达;CESLPF能够显著提高CaN活性(P＜0.05),但仍显著低于正常水平(P＜0.05).结论 CaN和CaMK是骨骼肌细胞MHCⅡ型向MHC Ⅰ型转变的重要调控酶,CESLPF可能是经CaN通路和非CaN通路联合作用促进肌型转换,该结果为临床应用CESLPF治疗OSAS提供了实验依据.
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LPCES对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链和SR Ca2+摄取-释放动力学的影响
目的 研究超低频复合生理频率慢性电刺激(lower physiological frequency chronic electrical stimulation,LPCES)对慢性低压缺氧兔颏舌肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)亚型表达和肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+摄取-释放动力学的影响.方法 成年日本大白兔24只,按随机数字表法分为4组(n=6):A:正常对照组,B:慢性低压缺氧组,C:2.5 Hz电刺激组,D:(2.5+40)Hz电刺激组.B、C、D组兔在构建慢性低压缺氧模型后,给予C、D 2组慢性电刺激,刺激频率分别为超低频2.5 Hz和超低频复合生理频率(2.5+40)Hz.采用Western blot分析4组兔颏舌肌MHC亚型表达变化,采用荧光光度测定法测定SR Ca2+摄取-释放动力学.结果 ①同正常对照组[(72.16±2.98)%]比较,慢性低压缺氧组[(80.45±1.26)%]兔颏舌肌MHCⅡa亚型比例明显增加(P<0.05),MHCⅠ亚型比例明显减少[(10.86±1.26)% vs (18.61±3.19)%,P<0.05],SR Ca2+摄取-释放速率明显下降,摄取-释放量也明显减少(P<0.05).②同慢性低压缺氧组比较,慢性电刺激后各组兔MHCⅡa和MHCⅠ亚型比例明显增加(P<0.05),MHCⅡb亚型比例明显减少(P<0.05),(2.5+40)Hz电刺激组较2.5 Hz电刺激组更为显著(P<0.05);SR Ca2+摄取-释放速率加快,摄取-释放量增加(P<0.05),(2.5+40)Hz电刺激组较2.5 Hz电刺激组更为明显(P<0.05).同2.5 Hz电刺激组比较,(2.5+40)Hz电刺激组MHCⅡa和MHCⅠ亚型比例差异无统计学意义(P>0.05).结论 慢性电刺激后慢性低压缺氧兔颏舌肌MHC呈现Ⅱb型向Ⅱa型和Ⅰ型的转变,SR Ca2+摄取-释放功能增强,其中超低频复合生理频率组变化更加明显.
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慢性低频复合生理频率电刺激对肺气肿兔膈肌肌球蛋白重链及酶活性的影响
目的 研究不同频率慢性电刺激(chronic electrical stimulation,CES)后肺气肿兔膈肌肌球蛋白重链(MHC)亚型及酶活性的适应性变化,以了解间断低频复合生理频率电刺激对肺气肿兔膈肌结构及代谢的影响.方法 采用木瓜蛋白酶雾化吸入法建立肺气肿模型,测定正常对照组、肺气肿组和肺气肿CES组膈肌MHC亚型的适应性变化及肌浆网(SR)Ca2+-ATP酶、膈肌琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)的酶活性.结果 ①40、10、(10+40) Hz慢性电刺激后肺气肿兔膈肌MHC的相对含量都有所增加(P＜0.05).10 Hz组MHC-Ⅰ型比例明显增加,(10+40) Hz组MHC-Ⅱa型比例增加(P＜0.05).②(10+40)、40 Hz慢性电刺激后,膈肌SRCa2+-ATP酶活性增高(P＜0.05).40 Hz较(10+40) Hz Ca2+-ATP酶活性增高更明显(P＜0.05),10 Hz组Ca2+-ATP酶活性降低(P＜0.05).③间断低频复合生理频率电刺激(40+10 Hz)同肺气肿组比较,SDH酶活性明显升高(P＜0.05);与40 Hz组和10 Hz组比较,SDH亦明显升高(P＜0.05),40 Hz组和10 Hz组之间无显著性差异(P＞0.05).5组之间LDH酶活性均无差别(P＞0.05).结论 不同频率的CES可导致膈肌MHC亚型及酶活性产生不同的适应性变化,低频复合生理频率慢性电刺激可能是体外膈肌起搏对COPD患者膈肌康复治疗较好的频率模式.
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模拟高原运动大鼠心肌重塑与肌球蛋白重链的适应性变化
目的观察缺氧及缺氧复合运动条件下大鼠心肌重塑与肌球蛋白重链(myosin heavy chain ,MHC)异构体组成的变化.方法 Wisatar大鼠随机分为4组:平原对照组、缺氧组、平原运动组和缺氧复合运动组.缺氧复合运动组大鼠持续暴露于模拟海拔5 000 m高原5周,每天降至4 000 m高原进行游泳运动1 h(6 d/周),运动结束后回升至5 000 m;缺氧组大鼠同时在低压舱内相同海拔高度饲养,但不进行游泳运动;平原运动组和平原对照组在舱外同时饲养,其中平原运动组每天进行游泳运动1 h(6 d/周).在末次运动结束后24 h处死大鼠,分离左、右心室,称重并计算左、右心室重量指数.用含10%甘油的SDS-PAGE电泳分离左、右心室MHC异构体,观察心室肌MHC异构体组成变化.结果缺氧35 d大鼠右心室重量指数增加,缺氧复合运动组大鼠左、右心室重量指数均增加.缺氧组右室MHC异构体组成比例与平原对照组相比无显著变化,平原运动组右室α-MHC异构体比例显著高于平原对照组,缺氧复合运动组右室α-MHC异构体比例显著高于平原对照组和缺氧组,低于平原运动组.左室MHC异构体组成比例变化趋势与右心室相似.结论缺氧复合运动条件下,心肌纤维MHC异构体由β-MHC向α-MHC转换,可能是缺氧条件下适度运动促进机体对高原习服适应的机制之一.
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重组人Neureguline对快速起搏所致猴心衰心肌收缩能力的影响及其机制研究
目的 研究重组人Neureguline对快速起搏所致心力衰竭恒河猴心肌收缩能力的影响,并探讨其可能的机理.方法 成年雄性恒河猴24只,随机分为假手术组、心力衰竭组及Neureguline治疗组,每组8只.治疗组240次/min起搏7 d后,起搏状态下连续10 d,每天1次静脉注射重组人Neureguline 3 μg/kg,心力衰竭组给予同体积生理盐水.连续给药10 d结束后,测定左心室的大压力上升速度(LVdp/dtmax)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室收缩末期压(LVSP)等血流动力学指标.提取左室心肌组织mRNA,采用实时荧光定量PCR的方法分析肌球蛋白重链(α-MyHC)的表达水平.结果心力衰竭组LVdp/dtmax、LVSP低于假手术组(P＜0.05),LVEDP高于假手术组(P＜0.05);Neureguline治疗组LVdp/dtmax高于心力衰竭组(P＜0.05), LVSP有上升的趋势(上升了11%),LVEDP有下降的趋势(下降了16%).心力衰竭组α-MyHC表达水平低于假手术组(P＜0.05);治疗组α-MyHC表达水平高于心力衰竭组(P＜0.05).结论 重组人Neuregulin可能通过向上调节α-MyHC表达水平这一机制来增强心肌收缩力,从而达到治疗心衰的目的.
关键词： Neuregulin 心力衰竭 肌球蛋白重链 基因表达 血流动力学 -
亮氨酸对原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞肌管形成和MyHC表达的作用研究
目的 探讨新生个体骨骼肌生长重要营养因子亮氨酸对新生大鼠骨骼肌卫星细胞肌管形成和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)表达影响的机制.方法 分离纯化原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞,在细胞的分化阶段用不同浓度亮氨酸和雷帕霉素(0 mM亮氨酸,0.1 mM亮氨酸,0.5mM亮氨酸,2.0 mM亮氨酸,2.0mM亮氨酸+50 nM雷帕霉素)处理细胞,观察肌管形成情况并检测MyHC、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、p-mTOR和Myod的表达.结果 亮氨酸促进肌管的形成,随着原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞分化MyHC表达逐渐增加(P＜0.05 、＜0.01或＜0.001).亮氨酸浓度为0.5 mM和2.0 mM时原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞p-mTOR表达水平高于亮氨酸浓度为0 mM组(P＜0.05或＜0.01),添加雷帕霉素后,p-mTOR表达水平下降(P＜0.05).亮氨酸浓度为0.5mM和2.0mM时原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞Myod的表达水平高于亮氨酸浓度为0 mM组(P值均＜0.05),雷帕霉素则抑制Myod的表达(P＜0.05).亮氨酸浓度为0.5 mM和2.0 mM时原代新生大鼠骨骼肌卫星细胞MyHC的表达水平高于亮氨酸浓度为0 mM组(P＜0.05或＜0.01),雷帕霉素则抑制MyHC的表达(P＜0.05).结论 亮氨酸通过mTORC1/Myod信号通路上调新生大鼠骨骼肌卫星细胞MyHC表达,促进肌管的形成.
关键词： 亮氨酸 新生 骨骼肌卫星细胞 肌球蛋白重链 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
肌苷对尾部悬吊大鼠比目鱼肌梭内、外肌纤维肌球蛋白重链表达的影响
目的:探讨肌苷注射液对尾部悬吊大鼠比目鱼肌(SOL)梭内、外肌纤维肌球蛋白重链(MHC)表达的影响.方法:采用大鼠尾部悬吊法建立后肢骨骼肌废用模型,用免疫组化染色法检测肌苷注射液对大鼠SOL梭内、外肌纤维MHC表达的影响.结果:尾部悬吊14 d后,大鼠SOL肌梭内、外肌纤维中快缩型MHC的表达均有增加;而在吊尾期间注射肌苷后,SOL肌梭内、外肌快缩型MHC的表达没有明显变化.结论:肌苷注射液对尾部悬吊大鼠SOL肌梭内、外肌纤维MHC表型的转化有明显的对抗作用.
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外源性雌激素局部应用对去势雌性大鼠颏舌肌肌球蛋白重链基因表达的影响
目的:检测外源性雌激素局部应用对去卵巢大鼠颏舌肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响,探讨雌激素水平与颏舌肌肌功能的相关性.方法:将30 只7 周龄健康雌性体质量210 g左右的SD大鼠随机分为3 组,每组10 只.①去卵巢对照组(ovariectomized group, OVX组);②雌激素给药组(E2组);③假手术组(sham-operated group, SO组).给药30 d后取颏舌肌肌肉组织用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测肌肉组织MHCⅡa、MHCⅡx、MHCⅡb、β-actin(内参照)基因表达.结果:去卵巢对照组颏舌肌MHCⅡb的表达明显高于假手术组(P＜0.05), MHCⅡa、 MHCⅡx的表达明显低于假手术组(P＜0.05).雌激素给药组颏舌肌MHCⅡb的表达明显低于去卵巢对照组(P＜0.01 ),MHCⅡa、MHCⅡx的表达明显高于去卵巢对照组(P＜0.05).结论:雌激素水平变化能导致颏舌肌肌纤维类型的转化,从而改变肌肉功能.
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兔胆囊切除术后Oddi括约肌离体收缩及肌球蛋白重链表达变化
目的:探讨兔胆囊切除术后奥迪氏括约肌(SO)自身发生的适应性变化.方法:将60只成年新西兰大白兔随机分为4组,其中A,D组各18只;B,C组各12只.设A组为对照组,采用假手术方式,开腹暴露胆囊后即关闭腹腔,饲养8wk.B,C,D组为实验组,分别完整切除胆囊后饲养2,4,8 wk.按设计的时间点饲养结束后将兔麻醉并取出SO,每组各取12只经离体测压后提取总蛋白通过Western Blot蛋白检测肌球蛋白重链(MHC)表达变化.另各取A,D组中剩余的6只大鼠的SO行石蜡切片免疫组化检测MHC表达变化.结果:与A组相比较,实验B,C,D组离体SO压力波幅和SO中的MHC表达均逐渐升高,差异具有统计学意义(P＜0.01).免疫组化结果显示,D组相对于A组平滑肌细胞中的MHC浓染.结论:兔胆囊切除术后SO括约肌发生了适应性收缩能力增强,MHC表达上调变化,可能是胆囊切除术后患者SO括约肌功能障碍多发生障碍的病理基础之一.
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控制通气对大鼠膈肌组织形态学及肌球蛋白重链的影响
目的 探讨控制通气(CMV)对大鼠膈肌组织形态学的影响,以阐明机械通气膈肌功能异常的机制.方法 观察18h和24 h CMV后大鼠膈肌超微结构及HE染色的结构改变,并检测膈肌肌球蛋白重链(MHC)表型和肌纤维横截面积(CSA).结果 24 h CMV组膈肌纤维损伤密度远高丁对照组(P＜0.01),肌纤维形状不规则、肌纤维萎缩及结构松散,18 h CMV组仅轻度改变；24 h CMV组膈肌MHCfast比率升高,MHCslow比率有下降趋势但无统计学差异；MHCfast和MHCslow肌纤维CSA及MHCfast和MHCslow蛋白表达均降低(P均＜0.05)；18h CMV组两种肌纤维的阳性比率、肌纤维CSA及MHCfast和MHCslow的蛋白表达均无改变.24 h CMV组肌纤维的损伤密度与MHCfast阳性比率呈正相关(P＜0.05).结论 短期CMV可造成膈肌损伤、肌纤维萎缩,以及慢肌向快肌的移行改变.CMV所造成的肌肉损伤与适应性改变可能相关联.
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冬虫夏草对制动大鼠比目鱼肌MHC表达的影响
目的 探讨冬虫夏草(CS)对制动大鼠肌肉萎缩的对抗作用.方法 对大鼠实施后肢制动或同时加用CS干预,检测比目鱼肌(SOL)梭内、外肌纤维肌球蛋白重链(MHC)的表达,观察其形态与梭外肌纤维构成比的变化.结果 ①制动14d后,SOL与体重的比值及其Ⅰ型肌纤维所占比率呈下降趋势,Ⅱ型肌纤维所占比率明显增加,梭内肌纤维MHC的表达有所增强;②制动加CS组与制动组相比,SOL湿重体重比、肌纤维横截面积和Ⅰ型肌纤维的构成比明显上升,Ⅱ型肌纤维的构成比明显下降,梭内肌纤维MHC的表达无明显变化.结论 CS对大鼠废用性肌萎缩具有对抗作用.
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外源性重组人碱性成纤维细胞生长因子对大鼠压疮深部组织损伤后肌肉修复的作用
目的 探讨外源性重组人bEGF(rhbFGF)对大鼠压疮深部组织损伤(DTI)后肌肉修复的作用.方法 将48只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、损伤对照组、伤后4d组、伤后7d组、伤后14 d组、伤后21d组,每组8只.正常对照组大鼠不做任何处理,后5组大鼠在两侧后肢股薄肌处建立压疮DTI模型.损伤对照组大鼠伤后不做任何处理;另4组大鼠在伤后即刻分别于左侧后肢股薄肌处皮下注射100 μg/mL的rhbFGF 0.1 mL,右侧后肢股薄肌处注射等体积生理盐水(NS),隔天注射1次.损伤对照组大鼠于伤后即刻、正常对照组大鼠于相同时相点,另4组大鼠分别于伤后第4、7、14、21天切取两侧后肢股薄肌处肌肉组织.HE染色观察股薄肌组织形态,免疫荧光法检测成肌素表达,蛋白质印迹法检测肌肉结构蛋白肌球蛋白重链(MyHC)、磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达.对数据行单因素方差分析、LSD检验.结果 (1)正常对照组大鼠股薄肌细胞胞核大小均匀、排列紧密、结构清晰,无明显的炎性细胞浸润;损伤对照组大鼠股薄肌出现肌细胞固缩、溶解断裂,结构紊乱的病理退化现象;伤后4d组、伤后7d组、伤后14d组、伤后21d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌细胞肿胀、炎性浸润、结构紊乱等病理损伤现象均较组内经NS处理的股薄肌减轻,肌细胞增殖数目增多.(2)正常对照组、损伤对照组大鼠股薄肌成肌素表达阳性细胞数分别为(28±17)、(42±28)个;伤后4d组、伤后7d组、伤后14d组大鼠经NS处理的股薄肌成肌素表达阳性细胞数分别为(100±50)、(196±87)、(460±110)个,经rhbFGF处理的股薄肌成肌素表达阳性细胞数分别为(174±34)、(717±182)、(613±122)个,各组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌成肌素表达阳性细胞数明显多于组内经NS处理的股薄肌(P＜0.05或P＜0.01);伤后21d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌成肌素表达阳性细胞数为(109 ±34)个,明显低于组内经NS处理的股薄肌[(218±71)个,P＜0.05].(3)正常对照组大鼠股薄肌MyHC表达较高,损伤对照组大鼠股薄肌MyHC表达较正常对照组大鼠有所降低;伤后4d组、伤后7d组、伤后14d组、伤后21 d组大鼠经NS处理的和经rhbFGF处理的股薄肌MyHC表达均呈逐渐增高趋势,各组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌MyHC表达明显高于组内经NS处理的股薄肌(P＜0.05或P＜0.01);伤后21 d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌MyHC表达较高,与正常对照组大鼠相近(P＞0.05).正常对照组大鼠股薄肌磷酸化Akt、磷酸化mTOR表达较低,损伤对照组大鼠股薄肌磷酸化Akt表达较正常对照组大鼠有少量增高,磷酸化mTOR表达有少量降低;伤后4d组、伤后7d组、伤后14 d组、伤后21 d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌磷酸化Akt、磷酸化mTOR表达呈先升高后降低的趋势;伤后4d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌磷酸化Akt、磷酸化mTOR表达明显低于组内经NS处理的股薄肌(P＜0.05或P＜0.01);伤后7d组、伤后14 d组、伤后21 d组大鼠经rhbFGF处理的股薄肌磷酸化Akt、磷酸化mTOR表达明显高于组内经NS处理的股薄肌(P＜0.05或P＜0.01).结论 外源性rhbFGF能有效促进大鼠压疮DTI肌肉修复,其作用机制可能与提高成肌素表达,增强肌肉生长相关信号通路的蛋白表达有关.
关键词： 肌肉发育 成纤维细胞生长因子2 肌球蛋白重链 压疮 深部组织损伤 蛋白激酶B 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 -
机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链mRNA表达的影响
目的探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞肌球蛋白重链(MHC)mRNA表达的影响.方法建立离体培养的SD乳鼠心肌细胞机械牵张模型,并施加无糖缺氧刺激因素,模拟烧伤后缺血缺氧损害.实验分10%牵张组、缺血缺氧培养组、10%牵张+缺血缺氧培养组,每组每时相点3皿细胞.各组分别在刺激前和刺激后1、3、6、12 h时相点进行观察.采用二步法逆转录聚合酶链反应检测心肌细胞MHC mRNA表达的变化,并用凝胶软件进行分析.结果与刺激前比较,10%牵张组d、β型MHC mRNA表达均增加,但以β型增加为主(P＜0.01).缺血缺氧培养组α-MHC mRNA向β-MHC mRNA转化加速,且缺氧12 h后心肌细胞α-MHC mRNA下调明显(P＜0.05);β-MHC mRNA表达先升后降,6 h表达强(P＜0.05).10%牵张+缺血缺氧培养组α-MHC mRNA向β-MHC mRNA转化明显,随机械刺激时间的延长转化加剧;12 h后α、β型MHC mRNA表达均下调(P＜0.05).结论机械牵张进一步加剧缺血缺氧对MHC mRNA表达的下调,可能是严重烧伤后早期心肌功能降低的原因之一.
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低氧高糖条件下家兔骨骼肌Ⅰ型纤维向Ⅱ型纤维转化的作用
目的 通过在体外对家兔骨骼肌两型肌纤维细胞进行不同培养方法的摸索和对其标志蛋白MHC同功型变化的检测,探索两型肌纤维细胞间的转化条件.方法 运用改良的肌球蛋白ATP酶组织化学染色法对家兔骨骼肌的肌纤维类型进行染色并观察;应用RT-PCR方法检测在不同培养条件下家兔骨骼肌MHC亚型mRNA的表达情况.结果 肌组织消化组:固有半膜肌表达MHCⅠ型及少量的MHCⅡ型,副半膜肌表达MHCⅡa和 Ⅱb型.细胞培养组:常氧高糖组固有半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;副半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;低氧高糖组固有半膜肌表达MHCⅡa和Ⅱb,不表达MHCⅠ型;副半膜肌表达MHCⅡb,不表达MHCⅠ型.结论 含15％FBS的常氧高糖培养基适宜骨骼肌细胞生长,并且在低氧高糖条件下,骨骼肌Ⅰ 型纤维有向Ⅱ型纤维转化的趋势.
关键词： 肌纤维 肌球蛋白重链 细胞培养 逆转录多聚酶链式反应 骨骼肌
