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商陆皂苷甲对银屑病患者外周血单个核细胞产生α肿瘤坏死因子和可溶性白介素2受体的影响
目的:研究在体外商陆皂苷甲(EsA)对银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性白介素2受体(sIL-2R)水平的影响,探讨其治疗银屑病的可能机制.方法:标本取自30例寻常性银屑病患者和20名健康献血员,利用EsA分别与脂多糖(lipopo1ysacchride,LPS)或植物血凝素(phytohenagglutinin,PHA)协同刺激PBMC,用双抗体夹心ABC-ELISA检测PBMC培养上清液中TNF-α和sIL-2R水平.结果:EsA浓度为1.0～10.0μg/mL时,呈剂量依赖性地明显抑制银屑病患者PBMC释放TNF-α(P＜0.05).EsA浓度在0.5～10.0μg/mL时,PBMC分泌sIL-2R呈轻微的下降趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05),EsA对PHA诱导的sIL-2R释放无显著的抑制作用.结论:抑制TNF-α等炎症递质的释放可能是中国商陆治疗银屑病的机制之一.
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商陆皂苷甲治疗炎症性疾病机制的研究进展
商陆皂苷甲(EsA)是从中药商陆块根中提取的主要活性成分,具有抗炎、利尿、调节免疫等广泛的药理作用.研究表明,EsA在炎症性疾病方面表现出较好的疗效.EsA可通过发挥抗炎、促凋亡机制,对多种肾炎发挥抑制作用;通过抑制多种炎性细胞因子及多种信号通路相关蛋白的表达,发挥抗炎作用,表现出多种呼吸系统炎症的抑制作用;通过降低模型小鼠海马区中ERK、JNK、p38的磷酸化水平,表现出对神经系统的保护作用;通过发挥抗炎、抗氧化机制,表现出对肝脏的保护作用.
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商陆皂苷甲急性毒性与利尿作用研究
目的了解商陆皂苷甲对小鼠急性毒性特点,观察其对大鼠的利尿作用。方法向小鼠腹腔注射不同浓度的商陆皂苷甲,观察给药后小鼠毒性反应,测定急性毒性的相关参数。向水负荷状态大鼠腹腔注射不同剂量商陆皂苷甲,测定给药后连续6 h总尿量。结果 Bliss法计算商陆皂苷甲LD50为26.19 mg·kg-1,95%可信区间为23.11~29.85 mg·kg-1。随着商陆皂苷甲浓度的增加,小鼠的毒性反应表现越明显,且小鼠的死亡数随之增加,空白对照组小鼠无异常反应。高剂量组大鼠尿量与阴性对照组差异有统计学意义,而中、低剂量组差异无统计学意义。结论商陆皂苷甲单次腹腔注射对小鼠有一定的毒性且商陆皂苷甲高剂量对大鼠有利尿作用。
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商陆皂苷甲在大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用
目的:探讨商陆皂苷甲(EsA)对大鼠肾缺血再灌注(I/R)损伤的影响及机理.方法:SD大鼠60只,随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血前EsA预处理组(EsA组),每组20只;采用夹闭双侧肾蒂30min后再灌注的方法制备肾缺血再灌注损伤大鼠模型,检测大鼠血清和肾组织样本中血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、IL-17A、IL-6及钠-钾ATP酶水平,HE染色后评估肾小管损伤程度.结果:与对照组比较,EsA组大鼠术前摄水量增多、摄食减少(P＜0.05);再灌注12h后,与对照组比较,I/R组大鼠SCr、BUN水平升高(P＜0.05),EsA组无显著性差异(P＞0.05);与对照组比较,I/R组大鼠肾组织IL-17A、IL-6表达水平升高(P＜0.05),钠-钾ATP酶表达水平下降(P＜0.05),EsA组无显著性差异(P＞0.05);C组、I/R组和EsA组肾小管损伤评分为3.02±1.13、10.53±2.13和9.85±1.91,EsA组较I/R组评分降低(P＜0.05).结论:EsA预处理能降低大鼠肾缺血再灌注时的损伤程度,发挥保护作用,其机制与减少炎症因子释放、增加钠-钾ATP酶表达有关.
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商陆饮片产地加工与炮制一体化工艺研究
目的 建立商陆生品产地加工与炮制一体化加工工艺, 优化商陆产地加工与炮制一体化工艺参数.方法 以商陆饮片外观性状、水溶性浸出物、商陆皂苷甲含量为指标建立和优化商陆生品产地加工与炮制一体化加工工艺.结果 商陆生品产地加工与炮制一体化加工工艺为:取新鲜商陆根, 去除茎基、须根、杂质等, 洗净, 切6 mm厚度片, 堆积厚度20 mm, 75℃干燥约16 h, 得4 mm商陆厚片.结论 本研究建立的商陆饮片产地加工与炮制一体化方法合理可行, 可在大生产推广.
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商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏AQP2及AQP4表达的影响
目的:观察商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)及水通道蛋白4(AQP4)表达的调节作用,研究商陆皂苷甲利尿作用机制.方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组及商陆皂苷甲高、中、低剂量组,腹腔注射给药,氢氯噻嗪组给予氢氯噻嗪0.4 mg/kg,商陆皂苷甲高、中、低剂量组分别给5.2、2.6、1.3 mg/kg商陆皂苷甲,收集并测量给药后6h内的尿量;水负荷实验结束后将大鼠麻醉处死,运用免疫组化及Real Time-PCR技术检测大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达的变化.结果:与空白对照组比较,商陆皂苷甲高剂量组大鼠尿量显著增多,肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达显著下调(P＜0.05);商陆皂苷甲中、低剂量组尿量及肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达差异无统计学意义.结论:商陆皂苷甲通过下调大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达,使水分重吸收降低,可能是其利尿作用的机制之一.
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HPLC-ELSD法测定商陆药材、饮片和醋商陆中商陆皂苷甲的含量
目的:比较各个产地的商陆药材、饮片及其炮制品醋商陆中的商陆皂苷甲的含量,为商陆及相关制品的质量控制提供含量测定方法,并做好2010版药典的修订工作.方法:运用高效液相色谱法,采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测,对所收集的12个产地36个商陆及相关制品进行商陆皂苷甲的含量测定.结果:醋商陆中商陆皂苷甲含量显著高于商陆药材及饮片,商陆药材和饮片含量差异不大.结论:通过HPLC-ELSD对样品中商陆皂苷甲的含量测定可以有效地控制商陆的质量.
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商陆皂苷甲对 IL －1β诱导的肾小球系膜细胞ERK 通路活化的影响
目的：观察商陆皂苷甲（ EsA）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（ rGMC）增殖及其对IL－1β诱导rGMC的ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达的影响，探讨EsA治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5％羧甲基纤维素钠灌胃），EsA（5 mg／kg）组，EsA （10 mg／kg）组，EsA （20 mg／kg）组，EsA （40 mg／kg）组，药物灌胃后，获取含药血清；取6代rGMC随机分成对照血清组，EsA （5 mg／kg）血清组， EsA （10 mg／kg）血清组，EsA（20 mg／kg）血清组，EsA（40 mg／kg）血清组，MTT法检测各组对rGMC增殖的影响；将rGMC分为对照组，IL－1β组，IL－1β＋EsA组，IL－1β＋U016组，IL－1β＋U0126＋EsA组，同步化后培养48 h， RT－PCR法检测各组ERK1／2 mRNA的相对表达量，Western blot法检测p－ERK1／2的表达并成像分析。结果EsA （5～10 mg／kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（ P＜0.05，P＜0.01）；IL－1β组促进了rGMC的ERK1／2 mR-NA、p－ERK1／2表达（P＜0.05），IL－1β＋EsA组、IL－1β＋U0126组，IL－1β＋U0126＋EsA组作用rGMC后，其ERK1／2 mRNA、p－ERK1／2表达均降低（P＜0.05）。结论 EsA含药血清（5～10 mg／kg灌胃）可显著抑制rGMC的増殖，EsA（10 mg／kg）血清组作用48 h效果佳；EsA通过下调p－ERK1／2表达，抑制了IL－1β诱导的rGMC增殖，ERK1／2通路是EsA抑制rGMC增殖通路之一。
关键词： 商陆皂苷甲 系膜细胞 细胞增殖 ERK1/2信号通路 -
商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响
目的 通过观察商陆皂苷甲(esculentoside A,EsA)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响,探讨EsA治疗狼疮肾炎的可能机制.方法 将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型对照组、地塞米松治疗组和EsA治疗组,分别腹腔注射治疗4周后留取各组动物肾组织标本,进行TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;免疫组织化学法检测肾组织Bax和Bcl-2表达.结果 3组间肾小球和肾小管细胞凋亡指数的差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组凋亡指数高,其次是地塞米松治疗组;与模型对照组比较,EsA治疗组和地塞米松治疗组BXSB小鼠的肾组织Bcl-2光密度值明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组和地塞米松治疗组差异无统计学意义(P>0.05);Bax的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值差异有统计学意义(P<0.05).结论 EsA具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,EsA可以下调BXSB小鼠肾组织中的凋亡调节蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值而加速细胞凋亡的发生.
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商陆皂苷甲对BXSB狼疮性肾炎小鼠的治疗作用
目的 观察商陆皂苷甲(EsA)在BXSB狼疮性肾炎(LN)模型小鼠体内的作用,探讨其对LN的治疗价值.方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组.分别给予RPMI 1640培养液、5 mg/(kg·d)的EsA、20 mg/(kg·d)的EsA 0.2 mL腹腔注射4周,1次/d至治疗终点.留取标本,行尿蛋白、血清肌酐、白蛋白测定及肾脏病理检查.结果 (1)模型小鼠尿蛋白升高,治疗组经治疗后较对照组下降,高剂量治疗组进一步下降.(2)经药物治疗后,BXSB小鼠肾组织病理损伤明显减轻.(3)各组血清肌酐及白蛋白均不高,差异无统计学意义.结论 (1)EsA具有降低BXSB狼疮性肾炎小鼠尿蛋白的作用;(2)EsA可以改善BXSB狼疮性肾炎小鼠的肾脏病理.
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商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响
目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.
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商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及CDK2、P27的影响
目的观察商陆皂苷甲（EsA ）对白细胞介素（IL ）-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞（rGM C ）增殖和细胞周期依赖性蛋白激酶（CDK2）及其抑制蛋白（P27）表达的影响。方法噻唑蓝（MTT）法检测EsA对 rGMC增殖与毒性的影响；碘化丙啶（PI）染色法，流式细胞仪检测细胞周期；蛋白免疫印迹法（Western blotting ）检测CDK2、P27的表达。结果观察剂量中EsA对rG-MC没有细胞毒作用，EsA（2．5～5．0 mg/L）作用rGMC 48 h后明显抑制其增殖；IL-1β减少了rGMC的G1期细胞数并增加了S期的细胞数，促进了rGMC的CDK2的表达，抑制了P27的表达；EsA增加了IL-1β诱导的rGMC的G1期的细胞数并减少了S期的细胞数，抑制了IL-1β诱导的rGMC的CDK2的表达，并促进了P27的表达。结论 rGMC可能是EsA的作用靶细胞，EsA通过抑制CDK2及激活P27的表达抑制了IL-1β诱导的rGMC的增殖，阻滞了细胞周期的进程。
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EsA对BXSB狼疮性肾炎小鼠作用观察
目的 观察商陆皂苷甲(EsA)对BXSB小鼠狼疮性肾炎(LN)的治疗作用及IL-6及TNF-α分泌的影响,探讨EsA对LN的可能作用机制.方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成模型对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组.腹腔注射每日1次,4周后达治疗终点.结果 EsA能显著降低BXSB小鼠尿蛋白/尿肌酐比值,改善BXSB肾脏病变.结论 EsA对BXSB狼疮性肾炎小鼠具有显著治疗作用,抑制IL-6及TNF-α分泌产生可能参与EsA抗炎机制.
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HPLC-ELSD法测定商陆不同部位中商陆皂苷甲的含量
目的:建立HPLC-ELSD法测定商陆中商陆皂苷甲的含量.方法:采用Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6mm)色谱柱,甲醇-水(75∶25)为流动相,流速1.0 mL·min-1;蒸发光散射检测,ELSD漂移管温度:74℃,载气流速:2.0 L·min-1.结果:商陆皂苷甲进样浓度在26.6～532.5μg·mL-1范围内有良好的线性关系(r=0.9995);平均回收率(n=5)为98.5%,RSD为1.5%.结论:本方法简便,结果可靠、准确,可用于商陆的质量控制.
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不同蒸制方法及蒸制时间对商陆中商陆皂苷甲含量动态变化影响的研究
目的:考察不同蒸制方法(清蒸法、绿豆蒸法)及不同蒸制时间对商陆中商陆皂苷甲含量的影响,并建立高效液相色谱法测定商陆中商陆皂苷甲的含量.方法:采用SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.02％磷酸(42∶ 58)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温20 ℃.结果:清蒸、绿豆蒸1h后商陆皂苷甲的含量上升,之后随着炮制时间的延长,商陆皂苷甲的含量又逐渐下降；且蒸制2～8及12 h后,绿豆蒸炮制品中商陆皂苷甲的含量略高于清蒸炮制品.结论:蒸制方法和时间对商陆中商陆皂苷甲的含量变化影响较大.
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商陆药材中商陆皂苷甲的含量测定
目的:为控制商陆药材的质量,建立HPLC-ELSD法测定商陆药材中商陆皂苷甲的含量.方法:采用Kromasil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.4%醋酸水溶液(70:30)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1);用蒸发光散射检测器进行检测,ELSD漂移管温度76.5℃,载气流速:2.1 L·min~(-1).结果:商陆皂苷甲浓度在50.7～507μg·mL~(-1)(r:0.9992)范围内,峰面积自然对数与其浓度自然对数呈良好的线性关系;平均回收率(n=9)为98.7%.结论:该方法简便、准确,专属性强,为2010年版中国药典一部增订商陆含量测定项做了研究.
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商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠的影响及其作用机制
目的:考察商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠的影响及其可能的机制.方法:自身免疫性小鼠模型通过甲醛化空弯菌CJ-S131辅以佐剂免疫小鼠获得.检测正常小鼠、模型小鼠及商陆皂苷甲处理的模型小鼠血清中的抗dsDNA抗体水平、细胞增殖及骨关节病理切片.通过形态学和流式细胞仪检测胸腺细胞凋亡.通过逆转录PCR的方法检测ECV304细胞中ICAM-1的mRNA表达.结果:商陆皂苷甲能有效地降低模型小鼠的抗dsDNA抗体水平、抑制淋巴细胞增殖并能缓解其骨关节炎症.而且,商陆皂苷甲能显著促进ConA活化的胸腺细胞的凋亡并能降低ECV304细胞中ICAM-1的mRNA表达.结论:商陆皂苷甲对自身免疫性模型小鼠有治疗作用;促进胸腺细胞凋亡和降低ECV304细胞中ICAM-1的mRNA表达可能是其作用的重要机制.
