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中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响
目的:研究中药狼疮静颗粒对BXSB狼疮性小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法:运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡.结果:雄性BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡加速,中药狼疮静颗粒可明显抑制BXSB小鼠脾脏CD4+T、CD19+B细胞凋亡率.结论:中药狼疮静颗粒通过抑制T、B淋巴细胞过度凋亡,可能阻抑了过量核酸抗原释放,从而抑制了B细胞的异常增生活化,使自身抗体产生减少而达到治疗系统性红斑狼疮目的.
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BXSB小鼠肝叉状头/翅膀状螺旋转录因子的表达
目的 观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肝脏的表达,探索调节性T细胞在狼疮肝损害中的可能作用机制. 方法 以8周龄正常C57BL/6雄性小鼠作对照,用免疫组织化学及实时PCR方法,检测Foxp3在8周、16周龄雄性BXSB小鼠肝脏的表达. 结果 正常组C57BL/6小鼠肝组织Foxp3阳性细胞呈深棕黄色,位于肝小叶的肝血窦和(或)窦周隙内,且分布较均匀;8周龄及16周龄BXSB小鼠肝组织内Foxp3染色呈浅棕黄色,明显弱于正常鼠,且分布在界板周边较明显.8周、16周BXSB组小鼠肝组织内Foxp3 mRNA表达水平(0.30±0.04、0.18±0.03)较正常对照组(1.08±0.08)明显降低,16周BXSB组的Foxp3 mRNA表达水平较8周BXSB组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 BXSB小鼠肝损害的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3分布和表达量下调有关.
关键词： 叉状头/翅膀状螺旋转录因子 红斑狼疮 肝损害 免疫组织化学 BXSB小鼠 -
自身反应性T细胞系及克隆的建立与TCR使用情况分析
目的体外建立可长期生长的自身反应性T细胞系及克隆,并分析其T细胞受体的使用情况.方法用狼疮小鼠BXSB自身脾脏作为刺激细胞,在体外建立长期生长的自身反应T细胞系(ATL),通过有限稀释法进行克隆,应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体应用.结果建立了H-2b限制性的自身反应性T细胞系和2个T细胞克隆.T细胞系主要应用TRBV2S1、TRAV5S1和TRAVl0S1,而2个T细胞克隆均为TRBV2S1和TRAV10S1.分析其表型为CD3+CD4+CD28+.结论从狼疮小鼠获得了自身反应性T细胞系及克隆,其T细胞受体利用具有一定的局限性.
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胰岛素样生长因子1的体内表达对BXSB小鼠发病影响的研究
目的初步研究人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)对系统性红斑狼疮BXSB小鼠发病的影响。方法用肌肉介导的电脉冲转基因技术，使得含有hIGF-1 cDNA的重组真核表达质粒在小鼠体内表达，然后系统检测自身免疫相关性实验指标。结果虽然hIGF-1促进雄性BXSB小鼠IgG类型抗DNA抗体的产生，但是明显阻止其尿蛋白浓度的继续升高，抑制巨噬细胞分泌IL-1以及降低脾脏重量。结论 IGF-1具有减缓雄性BXSB小鼠狼疮性肾炎的作用，其作用机制之一可能与巨噬细胞分泌炎性介质的功能下降有关。
关键词： 人胰岛素样生长因子1 BXSB小鼠 系统性红斑狼疮 -
花生四烯酸产物对BXSB小鼠狼疮肾炎的影响
目的探讨狼疮肾炎发病与花生四烯酸产物的关系.方法44只BXSB小鼠分4组,经中药治疗1.5月后,分别测定各组小鼠的尿蛋白定量、血清抗核抗体、肾脏内IgG和C3沉积量及肾组织内前列腺素(PGE)、前列环素(6-酮-PGF1α)、血栓素(TXB2)和白三烯(LTC4)的含量.结果发现空白对照组雄性小鼠尿蛋白定量、血清抗核抗体水平、肾组织内IgG、C3含量均高于治疗组.与此同时,肾组织内LTC4、TXB2含量高于治疗组,肾组织内6-酮-PGF1a及PGE1含量低于治疗组.结论皮质类固醇和中药治疗后可以使6-酮-PGF1a及PGE1升高,使LTC4、TXB2含量降低,说明花生四烯酸的不同衍生物含量和狼疮肾炎的病情轻重密切相关.
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大麻素及大麻受体与系统性红斑狼疮疾病治疗的相关研究进展
研究大麻受体在免疫细胞上的表达情况以及可能对系统性红斑狼疮发病产生的影响,进而研究对自身免疫病发生与发展的调节机制.系统性红斑狼疮(SLE)是一种较为常见的由于免疫系统异常、反应过激造成的全身性自身免疫病.近已有研究表明,大麻素受体在免疫细胞表面有表达,且大麻素通过与免疫细胞表面的大麻素受体(CB1和CB2)结合对免疫系统可能有一定的抑制效果,进而发挥免疫调节的作用影响自身免疫病的进程.
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亚砷酸对BXSB狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用
目的:观察亚砷酸对BXSB自发狼疮鼠狼疮性肾炎的治疗作用.方法:2个月龄雄性BXSB小鼠12只,随机分为对照组(生理盐水)和治疗组(亚砷酸0.8mg/kg),隔日腹腔注射,共55 d.观察尿蛋白、尿红细胞、血清肌酐,血清IgG、dsDNA、ANA及肾脏病理变化.结果:治疗组的尿蛋白排出量比对照组明显减少,血清IgG和dsDNA值也比对照组低,肾脏病理改变比对照组明显减轻.结论:亚砷酸能抑制BXSB狼疮鼠的自身免疫反应,对狼疮性肾炎有一定的治疗作用.
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狼疮肾炎小鼠白细胞介素18的血浆水平及其在肾组织中的表达
目的:探讨白细胞介素18(IL-18)在狼疮性肾炎(LN)发生发展中的作用.方法:应用ELISA和免疫组化方法分别检测雄性BXSB小鼠血浆IL-18水平和肾组织IL-18的表达,并测定血清抗-dsDNA抗体水平和尿蛋白含量,评估肾脏免疫病理和组织病理变化.结果:LN组较对照组小鼠血浆IL-18水平明显升高[(547.7±41.9)pg/ml比(178.8±40.1)pg/ml];肾组织IL-18蛋白表达明显增加[Ng:(0.26±0.05)比(0.10±0.04);Nt:(17.09±1.76)比(10.98±2.84)],LN鼠血浆IL-18水平和肾组织IL-18的表达量与尿蛋白、肾组织病理改变、IgG类免疫复合物的沉积呈正相关.结论:IL-18在LN鼠外周循环和肾组织表达明显增加,可能在LN发病中起重要作用.
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中药狼疮方对狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L表达的影响
目的:探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及狼疮方对其表达的影响.方法:采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为3组:狼疮方治疗组、泼尼松治疗组、空白模型组,每组6只,疗程10周.另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组.分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测.结果:(1)与正常对照组比较,模型组BXSB小鼠的血清IgG和抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P＜0.05或P＜0.01).(2)狼疮方治疗组或泼尼松治疗组的血清IgG、抗ds-DNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01),而与正常对照组比较无统计学差异(P均＞0.05).结论:狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达.狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L存在泼尼松相当的下调作用,抑制T、B细胞的异常活化,有效地治疗SLE.
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体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响
目的:探讨体外CD134L单抗或CTLA4Ig对狼疮样BXSB小鼠脾细胞分泌IL-6、IFN-γ及自身抗体的影响.方法:采用未经治疗的狼疮样BXSB小鼠模型,应用CD134L单抗和/或CTLA4Ig体外特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28通路后,用MTT法测定分裂原刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾淋巴细胞增殖反应和用ELISA方法测定ConA诱导的脾细胞培养上清液中IL-6、IFN-γ和抗ds-DNA抗体的表达水平,并与经中药狼疮方或强的松治疗的狼疮样BXSB小鼠模型进行比较.结果:(1)在单纯培养或经ConA刺激后培养,相比于正常对照鼠,狼疮样小鼠脾淋巴细胞都表现有增殖反应性的显著增高,IFN-γ、IL-6蛋白量的增高和抗ds-DNA抗体的过度分泌.(2)经强的松或中药狼疮方体内治疗后,狼疮样小鼠脾淋巴细胞体外培养的增殖反应性及IFN-γ、IL-6的分泌都受到明显抑制,抗ds-DNA抗体的产生也明显减少.(3)体外单独应用CD134L单抗或CTLA4Ig特异性阻断CD134-CD134L或B7-CD28共刺激信号通路,同样可以显著抑制体外培养的狼疮样小鼠脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,并可明显减少抗ds-DNA抗体的产生,但它们的抑制作用比强的松、中药狼疮方体内治疗狼疮样小鼠时所表现出的类似效应要弱.(4)联合CD134L单抗和CTLA4Ig,则治疗作用显著提高,其抑制脾淋巴细胞的增殖反应及IFN-γ、IL-6的分泌,抗ds-DNA抗体产生的作用都优于中药狼疮方的体内治疗效果,而与强的松的体内治疗效应相当.结论:CD134-CD134L可以提供独立的、非B7-CD28依赖的,另一种驱动抗原特异性T细胞增殖的协同刺激通路.同时阻断B7与CD28、CD134L与CD134间的相互作用,使自身反应性T淋巴细胞的活化和增殖受到快速而大限度的抑制,对治疗SLE等自身免疫性疾病可能是一种较理想的免疫干预模式.
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脱氢表雄酮对狼疮性BXSB小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的影响
目的 研究脱氢表雄酮(DHEA)对BXSB狼疮性小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法 运用流式细胞术、免疫双荧光染色法检测脾脏淋巴细胞凋亡.结果 当DHEA的浓度为10-8mol/L时,淋巴细胞凋亡率降低,与对照组比较有差异有统计学意义(P＜0.05),细胞坏死率差异无统计学意义(P＞0.05);DHEA与西药组或中药组联合应用对淋巴细胞凋亡抑制作用更加显著,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 脱氢表雄酮可明显抑制BXSB小鼠脾脏淋巴细胞凋亡率.
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BXSB狼疮性肾炎小鼠白细胞介素18的动态表达
为了观察IL-18在BXSB狼疮性肾炎小鼠的动态表达,并探讨IL-18在LN发生发展中的作用,将C57BL/6小鼠(正常对照)和BXSB小鼠(LN模型)各24只分别随机分为4组,观察至10、12、16、20周,PASM染色法观察不同周龄小鼠肾组织病理变化,直接免疫荧光法检测肾组织IgG的沉积,ELISA法检测小鼠血清IL-18水平,RT-PCR法检测肾组织和脾组织IL-18 mRNA表达水平,免疫组化法检测肾组织IL-18表达水平,并分析LN小鼠系统和肾脏IL-18表达与肾组织病理和免疫病理的相关性.结果显示,LN组小鼠肾组织IgG沉积随时间进展逐渐增多,肾组织病理损伤评分、血清IL-18水平和肾小管IL-18表达量在12周后进行性升高,肾小球IL-18表达量在16周后进行性升高,且均较正常对照组明显升高(P<0.05);不同周龄LN小鼠肾组织和脾组织IL-18 mRNA表达与正常对照组之间无统计学差异,LN小鼠血清IL-18水平、肾小球及肾小管IL-18表达量与肾小球损伤评分及肾组织IgG沉积评分呈正相关.推测IL-18可能在LN发生发展中发挥重要作用,且转录后过程对于系统和肾脏局部1L-18的高表达起主要作用.
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狼疮样BXSB小鼠脾细胞CD134/CD134L的表达及治疗影响
为了探讨CD134/CD134L共刺激信号在SLE发病机制中的可能作用及治疗的影响.采用狼疮样BXSB小鼠模型,随机分为三组:狼疮方治疗组、强的松治疗组、未治疗组,每组6只,疗程10周.另设与BXSB小鼠同基因的正常C57BL/6小鼠6只为正常对照组.分别采集上述各组小鼠外周血和脾组织进行检测.结果:(1)与正常对照组比较,未治疗组BXSB小鼠的血清IgG和抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134+、CD19+CD134L+、CD23+CD134L的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著增高(P＜0.05或P＜0.01).且血IgG和抗dsDNA抗体水平与脾细胞CD19+CD134L、CD23+CD134L的水平增加呈正相关;(2)狼疮方治疗组或强的松治疗组的血清IgG、抗dsDNA抗体水平和脾组织CD4+CD134+、CD8+CD134、CD19+CD134L+、CD23+CD134L+的百分比及CD134、CD134L的mRNA拷贝数都显著低于未治疗组(P＜0.05或P＜0.01),而与正常对照组无显著差异(P均＞0.05).狼疮样BXSB小鼠存在CD134/CD134L的异常表达.狼疮方可减轻狼疮样小鼠高丙种球蛋白血症,减少体内自身抗体产生,对CD134/CD134L的下调作用与强的松相当.
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狼疮性BXSB 小鼠脾脏淋巴细胞增殖与凋亡的初步分析
为了比较全面准确地了解系统性红斑狼疮(SLE)BXSB小鼠的发病过程中,淋巴细胞增殖与凋亡的动力学变化及其机制.采用细胞双色荧光染色的标记技术,检测了脾脏淋巴细胞中的增殖细胞和凋亡细胞的百分率,并且测定了巨噬细胞吞噬凋亡细胞的能力.结果发现,发病的雄性BXSB小鼠和雌性BXSB小鼠脾脏中增殖的CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞百分率显著高于对照C57小鼠,而凋亡的B淋巴细胞的百分率显著低于对照C57小鼠;但是,雌雄BXSB小鼠和对照C57小鼠巨噬细胞吞噬凋亡细胞的吞噬指数相同.本研究结果表明,在BXSB小鼠的SLE发病过程中,淋巴细胞的增殖速度异常升高、而凋亡速度下降,可能与其脾脏肿大有关;而且淋巴细胞的增殖与凋亡的失衡与巨噬细胞的功能无关,可能与淋巴细胞内在的异常有关.
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T细胞免疫防治BXSB小鼠系统性红斑狼疮的实验研究
目的:探索用自身反应性T细胞免疫防治BXSB雄性小鼠发生类似人系统性红斑狼疮(SLE)的可行性.方法:用活化的BXSB小鼠自身反应性T细胞克隆(ATL1)从小鼠尾静脉注射进行免疫(1×106/只,共3次),然后从不同角度监测病情发展情况.结果:在免疫后的第1、2、4周,T细胞免疫组小鼠血清中抗dsDNA抗体水平明显低于对照组(P<0.01),在免疫后第4、8、12、16周,T细胞免疫组小鼠的死亡率明显低于对照组(P<0.05),但是两组尿蛋白的浓度在各时间段均未见显著差异.结论:T细胞免疫能在一定程度上延缓BXSB小鼠SLE的进程,延长小鼠的生存时间.其机制可能与T细胞免疫诱导了针对自身反应性T细胞的调节性免疫应答有关.
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狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化的影响
目的:观察中药狼疮静颗粒对狼疮性BXSB小鼠肾脏免疫组化的影响.方法:取40只(♀8只,32只)BXSB小鼠,8♀BXSB小鼠作为同种阴性对照组,其余32只BXSB小鼠随机分为模型对照组、中药组,CTX组、CTX+中药组,每组各8只.各组于用药2周后取肾脏进行冰冻切片,并用直接免疫荧光染色法,在荧光显微镜下观察各组肾脏IgG荧光染色阳性肾小球数、荧光染色强度、荧光染色面积.结果:模型对照组绝大多数肾小球毛细血管襻上可见大量IgG呈片状沉积,沉积范围累及整个肾小球,且荧光强度高;经过治疗后,中药组荧光染色阳性肾小球数/肾小球总数比值明显降低,荧光强度明显减弱,累及肾小球荧光染色面积明显减小,分别与模型对照组比较,差异均具有显著性意义(P<0.01).结论:中药狼疮静颗粒具有明显清除狼疮性BXSB小鼠肾脏IgG沉积的作用.
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双氢青蒿素对BXSB小鼠狼疮肾炎的作用及机制研究
目的观察双氢青蒿素(Dihydroqinghaosu,DQHS) 对BXSB小鼠狼疮肾炎(LN)病理改变的影响及对其肾组织核蛋白提取物中核转录因子-κB(NF-κB)活化和NF-κB p65蛋白表达的影响,探讨DQHS治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)的分子机制.方法对低温冰冻肾组织进行免疫荧光检测;用Western blot 的方法检测肾组织核蛋白提取物中NF-κB p65蛋白的表达;以凝胶电泳迁移率改变试验(Electrophretic mobility shift assay,EMSA)对NF-κB的活化进行检测.结果免疫荧光检测显示:模型对照组及DQHS(5 mg*kg-1)剂量组小鼠肾脏组织中多种免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM)和补体(C3,C1q)的荧光检测呈强阳性,DQHS高剂量(125 mg*kg-1)和中剂量(25 mg*kg-1)组除IgG和补体C3呈微弱阳性外,IgA,IgM和补体C1q均为阴性;与正常组相比较,BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF-κB 的活化及其p65蛋白的表达均增加,其中p65蛋白表达的增加差异具有显著性(P<0.01);与模型组相比较,DQHS 3个剂量(125、25、5 mg*kg-1)组BXSB小鼠肾组织核蛋白提取物中NF-κB的活化及其 p65蛋白的表达均有不同程度的降低,其中p65蛋白表达的降低差异具有显著性(P<0.01).结论 DQHS能抑制肾组织中NF-κB的活化及其p65蛋白的表达,抑制多种免疫球蛋白及补体在肾组织的沉积,明显减轻BXSB小鼠LN的病理损害.
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亚砷酸对BXSB小鼠血清免疫指标的影响
目的观察亚砷酸对BXSB自发狼疮鼠血清免疫指标的影响.方法2个月龄雄性BXSB小鼠12只,随机分为对照组(生理盐水)和治疗组(亚砷酸0.8mg/kg,隔日腹腔注射,共55d).观察血清IgG、dsDNA、ANA及脾脏淋巴细胞亚群百分率的变化.结果治疗组血清IgG和dsDNA值比对照组明显低,治疗组的CD4%和CD3%也比对照组明显下降.结论亚砷酸能抑制BXSB狼疮鼠的自身免疫反应,对狼疮治疗有一定的作用.
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来氟米特对BXSB狼疮鼠免疫状况的影响
目的:观察来氟米特对BXSB小鼠免疫状况的影响.方法:48只3月龄的雄性BXSB小鼠分为4组,治疗前后测定24 h尿蛋白;治疗后检测血清抗dsDNA抗体以及肾脏免疫复合物.结果:治疗后,来氟米特组的尿蛋白、抗dsDNA抗体明显低于地塞米松和生理盐水组(P<0.01),也低于环磷酰胺组,但其组间差异无统计学意义(P>0.05);来氟米特组的肾脏免疫复合物低于其他治疗组(P<0.05或P<0.01).与生理盐水组相比,来氟米特组小鼠的生存期明显延长(χ2=4.56,P<0.05).结论:来氟米特可显著改善BXSB小鼠的免疫状况,能延缓BXSB狼疮鼠的疾病进程.
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大黄素对BXSB狼疮样小鼠肾脏病变的影响及其机制
目的:探讨大黄素治疗狼疮性肾炎的作用及其机制.方法:取已发生狼疮性肾炎的BXSB雌性小鼠35只,分别予以胃饲不同浓度的大黄素昆悬液和生理盐水.30天后,检测每只小鼠的24h尿蛋白含量,同时取出肾脏制成切片,SP(streptavidin/peroxidase)法检测肾小球细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达水平,并用高清晰度彩色病理图文分析系统(HPIAS)得出定量结果.结果:与生理盐水组相比,胃饲大黄素的各组小鼠24h尿蛋白含量和肾小球ICAM-1表达水平均有所下降(P＜0.05),尿蛋白含量与大黄素剂量(0～6.25mog/kg范围内)呈直线负相关(P＜0.01);肾小球ICAM-1表达水平与大黄素剂量呈负相关(P＜0.001);尿蛋白含量与ICAM-1表达水平呈正相关(P＜0.001).结论:大黄素能降低BXSB狼疮样小鼠尿蛋白水平;其免疫药理学机制可能与下调肾小球ICAM-1表达水平有关.
