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基于去甲肾上腺素诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的太子参药效部位研究
目的:研究太子参对去甲肾上腺素(NE)诱发原代培养心肌细胞损伤保护作用的活性部位.方法:采用系统溶剂分离制备提取太子参石油醚,乙酸乙酯,正丁醇及水层部位.取1~3d的SD大鼠乳鼠制备原代培养心肌细胞,以1×105/mL的细胞密度接种于96孔培养板,以相当于生药0.1~0.25 g·mL-1的太子参不同提取部位作用于原代培养心肌细胞30 min后,以1 μmol· L- NE作用于心肌细胞24 h复制细胞损伤模型,MTT法分析不同提取部位太子参的保护作用.结果:正丁醇和水层提取部位对NE诱导原代培养心肌细胞损伤吸光度(A570)降低具有显著的提高作用;进一步分析提示0.1 g·mL-1和0.25 g·mL-1太子参25%乙醇洗脱正丁醇部位和多糖物质群对NE诱导心肌细胞A570的降低保护作用显著(与模型组比较,差异显著,P<0.01,P<0.05).结论:初步的活性筛选发现太子参的正丁醇部位和水层部位对NE诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,进一步的活性追踪确定正丁醇部位经25%乙醇洗脱物质群及水层中的粗多糖为太子参防治NE诱导的心肌细胞损伤的主要活性物质群.
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心肌细胞功能的研究
心血管系统疾病与人类关系密切,心肌缺血再灌注等类型的心肌损伤在临床上很常见.由于受血流动力学、激素、神经反射的影响,在体的心肌损伤模型不能准确地反映某些因子或因素在心肌损伤中的作用.细胞培养广泛,地应用于研究细胞增殖的调节,因此,原代培养心肌细胞可能成为一种研究心肌损伤的有用模型[1,2].
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参麦注射液对急性缺氧-复氧心肌细胞凋亡的影响
目的:观察参麦注射液对急性缺氧-复氧后心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法:采用出生3天的Wastar大鼠,原代培养心肌细胞.实验分为3组:(1)正常组:心肌细胞不做任何处理,按正常条件培养(含10%胎牛血清的低糖DMEN培养液,青霉素100U/L,链霉素100 mg/L,37℃、5%CO2、91%湿度环境培养).(2)缺氧-复氧组:将心肌细胞进行缺氧-复氧处理.(3)参麦注射液组:心肌细胞复氧同时加入5 mL/L(1g/L)参麦注射液15 min.模型使用化学缺氧法,将Na2S2O4加入无糖、无氧的D-Hank's液中,制成缺氧溶液(pH 7.0-7.4),替换正常培养液使心肌细胞缺氧5min,再将缺氧液换成正常含血清培养液孵育15 min模拟再给氧,复制心肌细胞急性缺氧-复氧(anoxia-reoxygenation,A/R)模型.然后以Annexin V-FITC/PI双染色法,用流式细胞仪检测细胞早期凋亡百分率;激光扫描共聚焦显微镜观察Fluo-3负载的心肌细胞内钙离子水平的变化.