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解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR耐药细胞NF-κB信号靶向干预研究
探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/ADR细胞核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响.方法 将HL60/ADR耐药细胞分为牛血清组、兔血清组、含药血清高、中、低剂量处理组和干扰素对照组,用Western blot法检测各组细胞NF-κB/p65,NF-κB/p50,IκBα的表达情况.结果 流式细胞仪检测结果显示非细胞毒作用的解毒化瘀药血清能够增加HL60/ADR细胞内柔红霉素的浓度.HL60/ADR耐药细胞NF-κB信号基因呈高表达,HL60敏感细胞未见表达,加用不同浓度解毒化瘀含药血清处理后,p65,p50和IKBa的表达均有不同程度下降,以高、中剂量组对p65的下调作用更明显.结论 解毒化瘀药对HL60/ADR细胞的耐药逆转作用是通过阻断NF-κB信号通路实现的.
关键词： 白血病 多药耐药 HL60/ADR细胞 NF-κB信号 解毒化瘀药 -
解毒化瘀方对白血病K562/A02细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响
目的:探讨解毒化瘀方中药血清对白血病K562/A02耐药细胞耐药逆转作用及NF-κB信号表达的影响.方法:采用MTT法检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞毒作用,流式细胞仪检测解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞内化疗药物浓度的影响,用Western blot法检测解毒化瘀方中药血清对NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα的表达的影响.结果:解毒化瘀方中药血清对K562/A02细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,能够增加K562/A02细胞内化疗药物的浓度,下调K562/A02细胞NF-κB/P65、NF-κB/P50、IκBα表达,从而降低NF-κB信号.结论:解毒化瘀方中药血清能够逆转K562/A02细胞耐药,其耐药逆转机制可能与下调K562/A02细胞NF-κB信号表达有关.
关键词： 白血病 多药耐药 K562/A02细胞 NF-κB信号 解毒化瘀方 -
解毒化瘀药调控白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin通路研究
目的 探讨解毒化瘀药含药血清对白血病HL60/adr细胞NF-κB-survivin信号基因表达的影响,逆转耐药的机制.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应( RT-PCR)法检测解毒化瘀药含药血清处理后HL60/adr细胞survivin的表达；Western blot法检测NF-κB/P65、NF-κB/P5O、IκBα的表达.结果 解毒化瘀药含药血清能够降低HL60/adr耐药细胞NF-κB/P65、NF-κB/P5O、IκBα信号,降低survivin基因的表达.结论 解毒化瘀药能够降低HL60/adr细胞NF-κB信号通路,影响NF-κB-survivin途径,逆转耐药.
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Nrf2与NF-κB信号交互作用介导妇科虚寒证氧化损伤研究
寒证为八纲之一,而妇科寒证是临床较为多见的病证之一,其主要病因为感受寒邪,临证有实寒证、虚寒证之分.目前对妇科虚寒证的研究主要集中在能量代谢、免疫功能,其中氧化应激损伤是妇科虚寒证较为特异的指标之一,内源性保护体系Nrf2/HO-1信号和NF-κB介导的凋亡信号在氧化应激损伤中发挥了正-反两方面的调控作用.该文一方面总结既往对妇科虚寒证的生物学机制研究,另一方面,挖掘氧化损伤尤其是Nrf2与NF-κB信号调控妇科虚寒证的作用,望对今后的研究提供新思路.
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SLE患者血清对骨髓间充质干细胞衰老的作用及机制研究
目的：探讨系统性红斑狼疮（ SLE）患者血清对间充质干细胞（ MSC）衰老的作用及机制。方法：收集性别、年龄匹配6例健康对照者及6例SLE患者血清，灭活补体后-80℃保存备用；分离培养3例健康对照及3例SLE患者骨髓MSC，传代至第3～4代备用；以含10％SLE或对照血清的DMEM/F12模拟机体全身血液微环境，培养不同来源骨髓MSC；SA-β-gal染色并计数阳性细胞比例；Real time PCR法检测MSC p53、p21基因水平；Western blot法分别检测p53、p21蛋白及核蛋白NF-κB（p65）表达水平；CCK8测细胞增殖。结果：SLE患者血清增加健康人骨髓MSC的β-半乳糖苷酶阳性比例[（26.6±2.1）％vs （11.8±1.9）％，P＜0.05]，对SLE患者骨髓MSC的促进作用更为显著[（58.8±2.8）％ vs.（31.2±2.2）％，P＜0.05]；SLE患者血清可同时上调健康对照及SLE患者骨髓MSC的p53及p21水平；SLE患者血清既能够抑制健康骨髓MSC增殖[（0.7±0.1） vs （1.1±0.1），P＜0.01]，又能抑制SLE患者骨髓MSC增殖能力[（0.5±0.2） vs （0.8±0.3），P＜0.05]。此外，SLE患者血清还可显著上调两种来源骨髓MSC核内NF-κB（ p65）的蛋白水平。结论：SLE患者血清能够促进骨髓MSC衰老，该过程可能与其胞内NF-κB信号通路的活化有关。
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升降散对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB信号的影响
目的：研究升降散对 LPS 诱导大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）TLR4表达及其下游 NF-κB 信号通路的影响。方法用不同浓度 LPS（0、2、10μg／mL）诱导 NR8383细胞，采用 Real-time PCR 和 Western Blotting 分别检测 TLR4的 mRNA 和蛋白表达水平。用带有 NF-κB 的质粒转染 NR8383细胞，双荧光素酶报告基因检测 NF-κB 活性，Western Blotting 检测磷酸化 p65表达水平，Real-time PCR 检测细胞因子 TNF-α、A20、IL-6和 IL-1β的 mRNA 表达水平，ELISA 检测细胞上清液中 TNF-α、IL-6和 IL-1β的含量。将升降散作用于 LPS 成功诱导 NF-κB 上调的 NR8383细胞，Real-time PCR、Western Blotting、双荧光报告基因检测和 ELISA 实验检测升降散在 NR8383细胞中对 LPS 诱导 NF-κB 信号通路的影响。结果 LPS 成功诱导 NR8383细胞中 NF-κB 上调，在蛋白表达和 mRNA 表达水平均证实，LPS 能梯度诱导 TLR4高表达，且与 LPS 浓度呈正相关；同时， LPS 能够诱导 TLR4下游 NF-κB 的激活，增加下游靶基因编码细胞因子的合成与分泌，且与 LPS 浓度呈正相关。10μg／mL升降散作用 NR8383细胞后，能抑制 LPS 诱导 TLR4的高表达和下游 NF-κB 的激活。结论 LPS 能梯度诱导 NR8383细胞中 TLR4的高表达及其下游 NF-κB 的激活，升降散能够显著抑制该诱导作用。
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VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解激活NF-κB
目的 研究含缬酪肽蛋白(VCP)对肝癌细胞磷酸化核因子kappa B抑制蛋白(P-IκB)和核因子kappa B(NF-κB)信号的影响.方法 聚合酶链式反应(PCR)扩增VCP基因,并克隆于真核表达载体pCDNA3.1/myc-His(-)A,测序正确后将其转染Huh7肝癌细胞,转染30 h后裂解细胞,免疫印迹试验(Western blot)检测核因子kappa B抑制蛋白(IκB)、P-IκB的含量,萤火虫荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性;并对VCP RNA干扰,检测对IκB、P-IκB的含量和NF-κB的活性的影响.结果 成功构建真核表达载体pCDNA3.1/myc-His(-)A-VCP,转染Huh7肝癌细胞后,IκB含量无明显变化,然而P-IκB含量明显降低,NF-κB信号活性显著增强;而对VCP RNA干扰后,NF-κB信号的活性受到明显抑制.结论 VCP通过促进Huh7肝癌细胞P-IκB的降解进而活化NF-κB,在肝癌的发生过程中发挥重要作用,是用于肝癌治疗的重要潜在靶点.
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CIA模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及姜酚胶丸的调控作用研究
目的 探讨姜酚胶丸对胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达及炎症因子TNF-α、IL-1和IL-1β影响的研究.方法 将6周龄雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、姜酚胶丸治疗组和雷公藤多苷对照组,每组10只.制备CIA模型,采用Western blot法检测关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα表达,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β表达情况.结果 ①姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα的表达,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01);②姜酚胶丸治疗组及雷公藤多苷对照组可下调CIA大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-1β的表达,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.01).结论 姜酚胶丸可通过降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65、IκBα信号蛋白表达,显著下调CIA大鼠血清致炎因子TNF-α、IL-1、IL-1β表达,达到缓解炎症的作用.
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重组人Ⅱ型TNF-α受体-抗体融合蛋白对胶原诱导性关节炎模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达的影响
目的:探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠关节滑膜细胞NF-κB信号表达的影响.方法:将40只6周龄的雌性Wistar大鼠按照随机数表法随机分为空白组、模型组、醋酸泼尼松对照组和rhTNFR: FC治疗组,每组10只.制备CIA模型,以Western blotting法检测关节滑膜细胞NF-κB/P65、p-ⅠκBα表达的情况.结果:rhTNFR: FC治疗组和醋酸泼尼松对照组可下调CIA大鼠滑膜细胞NF-κB/P65、p-ⅠκBα的表达,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05).结论:rhTNFR: Fc可通过降低CIA大鼠关节滑膜细胞NF-κB/P65、p-ⅠκBα蛋白表达以达到缓解炎症的作用.
关键词： rhTNFR: Fc 胶原诱导性关节炎 NF-κB信号 -
白血病HL60/ADR细胞Mdrl、NF-κB的表达及解毒化瘀药的干预作用
目的 探讨解毒化瘀药血清对白血病HL60/ADR细胞多药耐药基因(Mdrl)、核周因子κB(NF-κB)信号基因表达的影响.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法检测解毒化瘀药血清处理后HL60/ADR细胞Mdrl基因的表达；Western blot法检测NF-κB/P65、NFκB/P50、IκBα的表达.结果 解毒化瘀药血清能够降低HL60/ADR耐药细胞NFκB/P65、NFκB/P50、1κBα的表达,降低Mdrl耐药基因的表达.结论解毒化瘀药对HL60/ADR细胞的耐药逆转作用可能是通过阻断NF-κB信号通路,影响Mdrl耐药基因的表达,进一步逆转耐药.
关键词： 白血病 多药耐药 HL60/ADR细胞 NF-κB信号 解毒化瘀药
