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水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法
目的:建立水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法.方法:以氨基酸分析仪测定结果为参照,采用双缩脲法、2010年版<中国药典>二部附录收载的Lorry法、2010年版<中国药典>三部附录收载的Lorry法、茚三酮法等4种常用蛋白含量测定方法对3批样品进行总肽的含量测定.结果:2010年版<中国药典>三部收载的Lorry法测定的总肽含量不仅准确度高而且重复性,稳定性均好.结论:确定2010年版<中国药典>三部收载的Lorry法作为水蛭仿生酶解小肽的含量测定方法.
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Lowry法测定马铃薯中蛋白质提取物的含量
目的 采用Lowry法测定马铃薯中蛋白质提取物的含量.方法 以国家蛋白质标准品为含量测定对照品,样品溶液和标准品溶液分别取1 ml,加碱性铜溶液5 ml,室温放置10 min,快速加入酚试剂0.5 ml,室温放置30 min,在波长650 nm处检测吸光度,外标法测定蛋白含量.结果 国家蛋白标准品线性范围0.1 ～0.5 mg ·ml-1,回归方程为y=1.874X+0.064(R=0.999),平均加样回收率为100.24％,RSD为1.63％.结论 用该Lowry法测定马铃薯蛋白质提取物的含量,方法准确、简便、重复性好.
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应用RP-HPLC法检测重组猪干扰素α成品蛋白含量
目的:建立测定重组猪干扰素α成品中蛋白含量的反相高效液相色谱法(RP-HPLC),并进行验证.方法:应用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α标准品及供试品的蛋白含量,并对方法的线性、精密度、稳定性、重复性进行验证.采用已建立的RP-HPLC检测方法测定7批重组猪干扰素α样品的蛋白含量,与Lowry法的检测结果进行比较.结果:重组猪干扰素α在6.1417～25 μg范围内,与峰面积呈现良好的线性关系(R2 =0.985 9).用所建立的方法测定同一标准品,进样6次,计算得到RSD(相对标准偏差)为1.7％;同一批样品进样12次,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为3.9％;同一批样品,取6份分别进样,检测供试品的干扰素α蛋白含量,计算得到RSD为0.9％.结论:建立了用RP-HPLC法测定重组猪干扰素α蛋白含量的方法.该方法简便、精密度、稳定性、重复性好,将蛋白分离成单一组分峰,紫外定量测定各峰吸光度,集定量与定性、纯度检验合一,定量范围可小于10μg,测定体积只需几微升,可用于重组猪干扰素α成品蛋白含量检测.
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氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗解吸附方法
目的:建立氢氧化铝吸附重组肺炎蛋白疫苗原液及制剂的解吸附方法.方法:在各重组肺炎蛋白的氢氧化铝吸附原液或4组分疫苗制剂半成品中加入解吸附试剂[含0.4％(m/v)十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12),0.25 moL·L-的磷酸盐缓冲液,pH 6.5],37℃下静置4.5h,通过Lowry蛋白检测、SDS-PAGE和HPLC对蛋白的解吸附率进行测定.结果:结果显示该方法可将重组肺炎蛋白疫苗的4种蛋白从氢氧化铝佐剂上解吸附下来,解吸附率达95％以上,且不影响蛋白的完整结构.结论:建立了重组肺炎蛋白疫苗4个组分蛋白的氢氧化铝吸附原液及制剂半成品的解吸附方法,可用于疫苗吸附原液和制剂半成品定量分析的前处理.
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Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度分析
目的 对Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度进行分析和评价.方法 建立Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估.结果 计算出了各变量的不确定度,取包含因子K=2,置信概率为95％,Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的扩展不确定度为0.0364.结论 此评价方法适用于Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度评估.
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Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量
目的：对Lowry法应用于人凝血因子Ⅷ蛋白含量测定中的可行性进行研究。方法：考察S公司人凝血因子Ⅷ原液及成品，比较凯氏定氮法与Lowry法对蛋白测定结果产生的差异，及不同浓度保护剂对Lowry法的影响。结果：甘露醇对蛋白含量测定有明显正干扰，甘氨酸有负干扰；对样品进行预稀释，辅料在低浓度范围内，当甘露醇浓度为0.1%和甘氨酸浓度为0.3%时，可减少辅料的干扰作用。结论：适当稀释样品可减少保护剂的干扰，用Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量，简单快速准确可行。
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N-V蛋白酶含量检测方法的准确度评价
目的:采用多种方法测定N-V蛋白酶含量,并比较实验结果,选择出适合N-V蛋白酶含量测定的方法.方法:从沙蚕体内提取的N-V蛋白酶,以凯氏定氮法为基准方法,采用考马斯亮蓝法、Lowry法和紫外吸收法测定N-V蛋白酶的含量.结果:考马斯亮蓝法得到N-V蛋白酶含量为(5.150±0.028)g·L-1,紫外吸收法(A280-A260)测得蛋白酶含量为(5.202 ±0.001)g·L-1,这两种方法均与凯氏定氮法测得的结果(5.164±0.013)g·L-1存在较小差异;Lowry法测得的结果为(1.12±0.014)g·L-1,明显偏低,存在较大差异.结论:凯氏定氮法、考马斯亮蓝法和紫外吸收法(A280-A260)均可测定出N-V蛋白酶含量.但N-V蛋白酶不适合采用Lowry法进行测定.
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人凝血/抗凝血因子类产品蛋白含量快速检测方法的建立及验证
目的 建立人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量Lowry快速检测法,并进行验证.方法 采用《中国药典》三部(2010版)Lowry法检测因子类产品的蛋白含量,通过耐用性研究降低辅料对方法的干扰,优化Lowry检测方法,并对方法的专属性、线性及范围、准确度、精密度进行验证.结果 不同辅料对Lowry法的干扰程度不同,人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ样品分别稀释20、10、80、160倍,可明显降低辅料的影响;Lowry法与凯氏定氮法相关性良好,方法线性R＞0.99,其准确度、精密度均良好.结论 Lowry法测定人凝血因子Ⅷ、人凝血因子Ⅸ、人凝血酶、人抗凝血酶Ⅲ蛋白含量操作简便、快速、准确,可用于产品的质量控制.
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两种Lowry法检测百日咳疫苗原液蛋白含量的比较
目的 比较《中国药典》三部(2015版)收录的两种Lowry法测定百日咳疫苗原液蛋白定量的差异,为原液蛋白准确定量和新版药典Lowry法的适用性确认提供依据.方法 9个实验室分别按照现行药典收录的两种Lowry法,对4家15批百日咳疫苗原液蛋白含量进行测定.并与凯氏定氮法检测结果进行比较.结果 方法1(未经酸沉淀Lowry法)实验室内测定结果的变异系数(CV)均值在1.7％～8.9％之间,实验室间测定结果的CV值在3.9％～9.3％之间;方法2(酸沉淀Lowry法)实验室内测定结果的CV均值在3.6％ ～7.4％之间,实验室间测定结果的CV值在3.9％～ 18.1％之间.同一样品两种方法测定结果差异有统计学意义(P＜0.001),结果呈相关性(R2=0.9449).在与部分样品测得的凯氏定氮法结果的比较中,方法1差异有统计学意义(P＜0.001),方法2差异无统计学意义(P＞0.05).结论 所有样品采用同一种Lowry方法测定时所得结果实验室内和实验室间一致性较好,采用方法2测定结果明显低于方法1,更接近凯氏定氮法结果真实值,表明酸沉淀对Lowry法百日咳原液蛋白定量有显著影响.与Lowry方法1相比,Lowry方法2更能准确反映百日咳疫苗原液的真实蛋白含量,且精密度、适用性均符合要求.
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应用考马斯亮蓝法测定总蛋白含量
目的应用考马斯亮蓝法检测总蛋白含量.方法应用考马斯亮蓝法与凯氏法和Lowry法同时进行不同生物制品的总蛋含量检测.结果考马斯亮蓝法操作简便,灵敏度高,重复性好,测定蛋白的线性范围为5～25μg,r=0.9995,n=5,平均回收率为101.3%.结论考马斯亮蓝法是检测生物制品总蛋白含量的理想方法.
关键词： 考马斯亮蓝(CBB) 总蛋白含量 凯氏法 Lowry法 -
Lowry法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗蛋白含量干扰现象的排除
目的 探讨Lowry法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗蛋白含量干扰现象的排除方法.方法 分别应用<中国药典>三部(2005版)中Lowry法与第5版<欧洲药典>2.5.16法测定b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液的蛋白含量,并以碳二亚胺(EDAC)为干扰性物质,验证两方法排除干扰的能力.结果 同一批结合疫苗原液用两种方法测定的结果不一致,应用<中国药典>方法测定的结果明显高于第5版<欧洲药典>的方法.在多糖的活化衍生及多糖蛋白结合过程中加入EDAC、己二酰二肼(ADH)等,可干扰测定结果,使结果偏高.结论 应用Lowry法测定多糖蛋白结合疫苗中蛋白含量时,应排除干扰性物质的影响.
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Lowry法测定眼宁滴眼液中蛋白质的含量
目的:制定眼宁滴眼液中蛋白质的含量测定方法.方法:采用Lowry法测定含量,以650 nm为测定波长测定吸收度.结果:在0.04～0.20 mg/ml之间呈良好线性关系,相关系数r=0.9990,平均回收率为99.9%(n=6),RSD=1.3%.结论:本法简便、准确、重现性好,可用于眼宁滴眼液的含量测定.
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4种常用蛋白浓度测定方法的比较
目的 比较4种常用蛋白浓度测定方法的准确性及各自的影响因素. 方法 采用Lowry法、BCA法、磺基水杨酸沉淀法、Bradford法等4种常用蛋白浓度测定方法对几种样品进行对比试验. 结果 研究了蛋白质样品中的添加物对不同方法的影响.采用BCA法测定PEG-IL-6的蛋白浓度以及采用Bradford法测定变性液中的蛋白浓度不仅准确而且重复性好. 结论 确定PEG-IL-6的佳蛋白浓度测定方法为BCA法,而包涵体变性液中的蛋白浓度只能用Bradford法测定.
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探讨甘氨酸、甘露醇对Lowry法测蛋白含量的干扰
目的 Lowry法是蛋白质含量测定的普遍方法,广泛应用于测定生物制品蛋白质含量,本文目的在于探讨甘氨酸、甘露醇这两种常用制剂辅料对Lowry法测定蛋白含量的干扰情况.方法用碱性铜试剂、酚试剂,检测波长为650nm,以标准蛋白浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线.根据吸光度查标准曲线,求出在有辅料存在情况下的已知蛋白浓度样品的测试值.结果甘氨酸与酚试剂的反应没有特异性,但它的存在会对蛋白测定产生抑制.而甘露醇与酚试剂的作用与其浓度有正相关,会使蛋白测定值比理论值高.结论 Lowry法测蛋白质操作简便,结果准确,但甘氨酸对其有负干扰,甘露醇对测定结果有正干扰.
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生物制品蛋白质含量Lowry测定法应注意的几个问题
日常工作中测定生物制品中总蛋白的含量常采用Lowry法,由于蛋白质的特异性以及干扰物质存在,常给测定结果带来较大误差.本文从测定时参照标准品选择、干扰物存在的排除方面总结了提高Lowry法测结果准确性的经验.
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心脉隆注射液中多肽限量检测方法的建立
目的 建立一个操作简单、快速、灵敏度高、重现性较好的测定心脉隆注射液中多肽的限量检测方法.方法 研究了3种比色蛋白质含量测定方法限量检测心脉隆注射液中多肽含量的可行性,选择合适的方法并进行方法学研究.结果 排除了Bicinchoninic Acid (BCA)法及Bradfrd法,采用对蛋白质和多肽具有同样显色反应的Lowry法;并针对Lowry法,对波长选择和反应条件进行了探讨,建立了标准操作步骤.结论 Lowry法更能准确的检测心脉隆注射液中多肽含量,该方法便捷准确,检测出心脉隆注射液中的多肽浓度约为30 mg·ml-1.
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天然胶塞的蛋白含量测定
目的:建立天然胶塞的蛋白含量测定方法.方法:用凯氏定氮法考察并对测定样品的总蛋白,用Lowry法测定水溶性蛋白.结果:采用几种消化条件测得的总蛋白含量结果基本一致；Lowry法与凯氏定氮法的结果存在较大差异.结论:凯氏定氮法的消化剂中加入过氧化氢,操作简便、安全,结果准确,可测定天然胶塞的总蛋白含量.
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不同原料制备乙型肝炎病毒特异性转移因子的研究
目的为临床治疗乙肝提供一种安全、有效的免疫调节剂.方法用组织匀浆、反复冻融破碎细胞、透析灭活和过滤除菌等技术,获得乙型肝炎病毒特异性转移因子(HBV-STF);用Lowry法测多肽含量;用苔黑酚显色法测定核糖核酸(RNA)含量,用氨基酸分析仪分析测定HBV-STF的水解氨基酸总含量.结果来源于HbsAg阳性胎盘和HbsAg阳性血液的多肽含量分别为0.49±0.014和0.29±0.013(P＜0.01),RNA含量分别为0.34±0.010和0.22±0.008(P＜0.01)氨基酸总含量为198.6±1.562和123.4±1.521(P＜0.01).结论用HbsAg阳性胎盘制备的乙型肝炎病毒特异性转移因子质量优于HbsAg阳性血液.
关键词： 乙型肝炎病毒特异性转移因子 Lowry法 -
Sprague-Dawley 大鼠肝微粒体蛋白浓度检测方法学研究
目的 建立Sprague-Dawley(SD)大鼠肝微粒体蛋白浓度测定的紫外分光光度检测法.方法 SD大鼠尾静脉连续3 d注射0.9%氯化钠注射液2 ml,第4 d解剖大鼠,取肝脏,应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,用Lowry法测定肝微粒体蛋白浓度.结果 牛血清蛋白标准曲线范围为0～500 μg/ml,回归方程为:Y=0.0007X+0.0161(r=o.9982),低、中、高浓度的回收率分别为95.85%、102.69%、101.28%,日内和日间精密度分别为3.83%、1.73%、0.57%及10.25%、2.22%、0.98%.结论 本实验建立的Lowry蛋白测定法准确可靠,重复性和稳定性均良好,可为进一步研究用药后肝微粒体酶活性的改变提供依据.
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两种诱导方法制备大鼠肝S9在两种遗传毒性试验中活性比较
目的:通过比较联合诱导法和多氯联苯诱导法制备的S9的活化作用,探讨两种S9活化作用的差异对两种试验阳性结果的影响.方法:采用Ames试验方法和染色体畸变试验方法对两种S9活化的阳性结果进行比较.Lowry法测定两种S9的蛋白含量,Omura法测定P450含量.结果:Ames试验和染色体畸变试验中两种S9在阳性组中都显示出明显活化作用,同一条件下,Ames试验中使用两种S9所得阳性结果并无较大差异,染色体畸变试验中两种S9活化的阳性组畸变率间差异无统计学意义(P＞0.05).多氯联苯诱导法S9的蛋白含量13.25 g·L-1,P450含量为3.92 nmol·mg-1蛋白,联合诱导法S9蛋白含量为15.25 g·L-1,蛋白含量P450含量为2.94 nmol·mg-1蛋白.结论:两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对相应阳性诱变剂都有明显的活化作用.可以认为两种S9在Ames试验和染色体畸变试验中对于相应的阳性化学物活化作用无较大差异,联合诱导法可以替代多氯联苯诱导法制备肝匀浆S9.
