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糖皮质激素对成骨细胞活性与分化的影响及β蜕皮甾酮的干预作用
目的:观察不同剂量糖皮质激素(GC)对体外培养成骨细胞活性、分化的影响以及牛膝活性成分β蜕皮甾酮(β-Ecd)的干预作用,以探讨GC引起骨质疏松的部分机制.方法:由骨髓基质细胞分化培养成骨细胞,用地塞米松(Dex)以不同剂量不同作用时间处理细胞,MTT法测定细胞活性后,将细胞分为7组:正常对照组、1×10-5mol/L GC模型组、GC+10-5mol/L RU486组、GC+ 10-5mol/L阿仑膦酸钠(ALN)组、GC+10-5mol/L β-Ecd组、GC+ 10-6mol/L β-Ecd组、GC+ 10-7mol/L β-Ecd组.Real time PCR检测相关基因mRNA表达,Western Blot检测β-catenin蛋白表达.结果:小剂量浓度Dex(≤10-8mol/L)有促进成骨细胞活性的趋势,而超生理剂量的Dex则抑制细胞的分化与活性.GC模型组GR、RunX2、OP-1、ALP mRNA表达下降(P＜0.05),10-5、10-6、10-7 mol/L β-Ecd能不同程度干预细胞降低的基因mRNA表达水平.GC模型组细胞β-catenin蛋白表达升高(P＜0.05),10-5mol/Lβ-Ecd能抑制GC对细胞的影响.结论:超生理剂量GC抑制体外培养成骨细胞的分化与活性,可能与介导Wnt/β-catenin信号途径有关;一定剂量β蜕皮甾酮则能不同程度地干预糖皮质激素对成骨细胞的影响.
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糖皮质激素诱导破骨细胞产生自噬及β-蜕皮甾酮的保护作用
目的:观察超生理剂量糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)对体外培养破骨细胞产生自噬及牛膝活性成分β蜕皮甾酮(β-Ecdysone,β-Ecd)的保护作用,以探讨糖皮质激素引起骨质疏松的部分分子机制及β-脱皮甾酮对其的保护作用.方法:由骨髓干细胞分化培养破骨细胞,用地塞米松(Dexamethasone,Dex)10-5 mol/L浓度作用细胞,将细胞分为7组:(1)正常对照组；(2)1×10-5 mol/L GC模型组:(3) GC+ 10-5mol/L抑制剂Ru486组；(4)GC+ 10-5mol/L阿仑磷酸钠(Alendronate,ALN)组；(5) GC+ 10-5mol/Lβ蜕皮甾酮组；(6)GC+ 10-6mol/Lβ蜕皮甾酮组；(7) GC+ 10-7mol/Lβ蜕皮甾酮组.实时荧光定量PCR(Real time PCR)检测相关基因mRNA表达,Western Blot检测LC3(Ⅰ、Ⅱ)蛋白表达.结果:(1) 10-5 mol/L GC使破骨细胞AKT1、mTOR、p70S6K mRNA表达下降(P＜0.05),10-5 mol/L、10-6mol/L、10-7mol/Lβ蜕皮甾酮能不同程度保护细胞降低的基因mRNA表达水平.(2) 10-5mol/L GG使破骨细胞LC3(Ⅰ、Ⅱ)蛋白表达升高(P＜0.05),10-5mol/Lβ蜕皮甾酮能抑制GC对细胞的影响.结论:超生理剂量糖皮质激素可能通过影响mTOR信号通路引起破骨细胞产生自噬现象；一定剂量β蜕皮甾酮则能不同程度地保护糖皮质激素对破骨细胞的影响.
