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倒扣草TLC指纹图谱鉴别及β-蜕皮甾酮含量测定
目的 建立倒扣草TLC指纹图谱及测定药材中β-蜕皮甾酮含量,为控制药材质量提供科学依据.方法 利用TLC法建立倒扣草药材指纹图谱,采用RP-HPLC法测定β-蜕皮甾酮含量.结果 不同产地倒扣草TLC指纹图谱中显示有6个共有斑点作为倒扣草的特征成分,这6个斑点可用于药材的定性鉴别,不同批次药材中β-蜕皮甾酮的含量差异较大.结论 TLC指纹图谱鉴别结合β-蜕皮甾酮含量测定能较全面反映倒扣草药材质量,可用于药材质量控制.
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正交试验法优选牛膝配方颗粒的提取工艺
目的 优选牛膝配方颗粒的提取工艺.方法 以干浸膏得率、β-蜕皮甾酮提取量为评价指标,采用正交试验设计法考察加水倍量、提取次数和提取时间3个因素对提取效果的影响,通过综合评分法筛选出牛膝的佳提取工艺.结果 提取次数对试验结果的影响有统计学意义,加水量和提取时间对试验结果的影响无统计学意义.综合考虑各因素的影响及生产实际需要,确定佳提取工艺为:牛膝饮片加入8倍量水,煎煮提取3次,每次0.5h.结论 该工艺条件提取充分,稳定可行,对牛膝配方颗粒的生产具有一定的指导和参考意义.
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HPLC测定牛膝和决津颗粒中β-蜕皮甾酮的含量
目的:建立高效液相色谱法测定牛膝和决津颗粒中β-蜕皮甾酮的方法.方法:分别采用回流法和超声法提取牛膝和决津颗粒中β-蜕皮甾酮,并对提取方法进行优化；采用HPLC测定β-蜕皮甾酮的含量,Kromasil C18色谱柱(4.6 mm ×250mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(17∶83)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长242 nm,柱温30℃.结果:牛膝的佳提取条件为加入15倍量70％乙醇回流提取2次,每次1h,决津颗粒的佳提取条件为以水为溶剂超声提取30 min；β-蜕皮甾酮的线性范围为10.37～103.7 mg·L-1,回归方程为Y=24 867X+1563(r =0.9995),牛膝和决津颗粒的平均回收率分别为98.5％,98.4％,RSD分别为1.6％,1.4％(n=9).结论:方法准确可行,重复性好,可为评价决牛膝和决津颗粒质量提供依据.
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牛膝不同炮制品中化学成分的UPLC-Q-TOF/MS分析
目的:比较生牛膝、酒牛膝及盐牛膝的各项质控指标及化学成分的差异.方法:按照2015年版《中国药典》的标准,测定生牛膝、酒牛膝及盐牛膝的水分、总灰分和醇溶性浸出物含量,考察指标成分含量测定方法的线性范围、精密度、稳定性、重复性及加样回收率,建立UPLC-Q-TOF/MS比较牛膝不同炮制品中主要化学成分相对含量的差异.结果:生牛膝、酒牛膝及盐牛膝的水分、总灰分及醇溶性浸出物的含量均符合2015年版《中国药典》的要求,运用高分辨质谱鉴定了10个主要化学成分,分别为苄基葡萄糖苷,苄基葡萄糖苷异构体,牛膝甾酮A,水龙骨素B,β-蜕皮甾酮,牛膝甾酮,姜状三七苷R1,人参皂苷Ro,牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ.牛膝经酒炙后苄基葡萄糖苷,苄基葡萄糖苷异构体,水龙骨素B,β-蜕皮甾酮和人参皂苷Ro的含量显著升高,而姜状三七苷R1,牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ的含量则显著减低;盐炙后苄基葡萄糖苷,苄基葡萄糖苷异构体,牛膝甾酮A,水龙骨素B,β-蜕皮甾酮和牛膝甾酮含量显著升高,而姜状三七苷R1,人参皂苷Ro,牛膝皂苷Ⅰ和竹节参皂苷Ⅳ的含量则显著降低.结论:牛膝炮制后酚苷类和甾体皂苷类成分的含量显著上升,而三萜皂苷类成分的含量则显著降低.
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不同盐制方法对牛膝中有效成分含量的影响
目的:比较盐粒拌炒和盐水炙牛膝2种不同方法对牛膝中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮含量的影响,为牛膝盐制工艺研究提供参考.方法:采用HPLC测定β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮的含量,流动相乙腈-水-甲酸(16∶84∶0.1),检测波长250 nm.以牛膝生品为参考,考察2种盐制方法对牛膝中指标成分含量的影响.结果:盐水炙样品中以每100 g牛膝加食盐1g,在150～180℃下炒制15 min的含量高,盐粒拌炒样品以每100 g牛膝加食盐2 g,150 ～180℃炒制4 min的含量高.盐水炙样品中β-蜕皮甾酮,25R-牛膝甾酮,25S-牛膝甾酮质量分数均以3号样品为高,分别为0.083％,0.015 7％,0.010％;盐粒拌炒样品中三者的高质量分数分别为0.100％,0.019 1％,0.012 3％.结论:盐粒拌炒牛膝的样品中3种甾酮类成分的含量均大于生品和盐水炙牛膝的样品,2种不同盐制方法对牛膝中有效成分均有影响,为牛膝盐制工艺的确定提供参考.
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骨疏灵的大鼠血清药物化学分析
目的:对骨疏灵血清药物化学进行研究,通过分析其入血成分探讨该复方发挥药效的物质基础,为骨疏灵的临床应用提供参考.方法:采用血清药物化学研究方法,建立骨疏灵体外和血清的全方、缺味组方及单味药材的HPLC,通过对比分析骨疏灵体外和血清的全方、缺味组方及单味药材的HPLC色谱峰,初步确定骨疏灵的入血成分、移行成分及各成分的主要归属.结果:骨疏灵灌胃后在大鼠体内发现21个入血成分,其中11个来自该复方的原型,4个是新产生的物质,其余均为代谢物.结论:骨疏灵入血成分是各味药材复方配伍后共同作用的结果,其中淫羊藿贡献大,复方血清药物化学研究为深入阐述骨疏灵药效物质基础提供实验依据.
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HPLC-ESI-MS/MS法同时测定金线风中7种有效成分
目的:建立高效液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术(HPLC-ESI-MS/MS)法同时测定金线风中7种成分含量的方法.方法:采用Waters CORTECS C18(2.1mm×100mm,1.6μm)色谱柱,乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,样品经电喷雾电离离子源(ESI)正离子化后,通过安捷伦三重四级杆串联质谱仪,采用选择多反应监测(MRM)对金线风进行分析.结果:木兰花碱、β-蜕皮甾酮、轮环藤碱、非洲防己碱、药根碱、巴马亭红碱、掌叶防己碱在一定范围内具有较好的线性关系,R2≥0.9997,精密度、重复性和稳定性的RSD＜5％,加样回收率均在96.7％-104.8％之间.结论:本实验建立的方法准确度和灵敏度高,专属性好,可作为金线风的质量控制方法.
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牛膝甾酮25位差向异构体的分离与鉴定
目的分离并确定苋科植物怀牛膝(Achyranthes bidentata Blume.)中牛膝甾酮25位差向异构体的结构.方法利用色谱技术分离纯化牛膝甾酮25位差向异构体,用波谱(IR,UV,MS,NMR)方法及化学方法确定结构.结果从怀牛膝的乙酸乙酯部位分离得到3个化合物,分别鉴定为25S-牛膝甾酮(1,25S-inokosterone),25R-牛膝甾酮(2,25R-inokosterone),β-蜕皮甾酮(3,ecdysterone).结论化合物1和2为首次从怀牛膝中分离得到的25位差向异构体,首次确定了25位绝对构型和发表该25位差向异构体的13CNMR数据.
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β-蜕皮甾酮对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用
目的 探讨β-蜕皮甾酮对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的人骨髓神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其机制.方法 采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y细胞MPP*损伤模型,同时给予β-蜕皮甾酮干预.观察细胞形态,测定细胞存活率(噻唑蓝法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,用试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 同1-甲基-4-苯基吡啶离子组比较,终浓度为50、100、150 μmol·L-1的β-蜕皮甾酮能减轻1-甲基4-苯基吡啶离子引起的SH-SY5Y细胞的损伤,且呈剂量依赖性关系,明显提高细胞的存活率,减少乳酸脱氢酶的释放,超氧化物歧化酶升高,丙二醛降低,凋亡率降低.结论 β-蜕皮甾酮对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞有明显的保护作用.其机制可能与抑制氧化反应,减少细胞凋亡有关.
关键词： β-蜕皮甾酮 1-甲基-4-苯基吡啶离子 SH-SY5Y细胞 脂质过氧化 凋亡 -
简易库和冷藏库贮藏中牛膝理化指标的月动态变化研究
目的 研究简易库和冷藏库中牛膝理化指标的月动态变化规律.方法 牛膝在简易库和冷藏库中贮藏27个月,观察外观色泽,采用烘干法测定水分含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定β-蜕皮甾酮和5-羟甲基糠醛(5-HMF)的含量,采用相对温度积评价简易库与冷藏库温度差的累积,并进行理化指标的月动态变化规律的分析.结果 随着贮藏时间的延长,简易库中的牛膝色泽加深,质地变硬,而冷藏库中的牛膝色泽未见明显变化,质地较软;两库中牛膝的β-蜕皮甾酮的含量均逐渐下降,当贮藏到27个月时两库中牛膝的β-蜕皮甾酮含量低于《中国药典》规定的0.030％;5-HMF的含量均呈升高的趋势,且简易库中牛膝的5-HMF含量升高更多.结论 本实验首次提出了相对温度积的概念,并用于中药贮藏环节中化学成分的月动态变化规律研究.牛膝的理化指标随着贮藏月份的延长而变化.建议牛膝的贮藏期为2年.
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HPLC法同时测定心脑康片中11种成分
目的 建立同时测定心脑康片中11种成分(丹参酮ⅡA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和23-乙酰泽泻醇B)的HPLC分析方法.方法 采用HPLC法测定心脑康片中丹参酮ⅡA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和23-乙酰泽泻醇B.色谱柱为InertSustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);甲醇-乙腈(1∶1,A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱:0～10.0 min,80％ B;10.0～20.0 min,80％～70％ B;20.0～35.0 min,70％～50％ B:35.0～50.0 min,50％～30％ B;体积流量0.9 mL/min;柱温40℃;进样量10μL.结果 丹参酮ⅡA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和23-乙酰泽泻醇B分离度良好,分别在28.24～282.42、15.89～158.90、20.53～205.26、4.09～40.94、12.08～120.76、40.03～404.30、4.08～40.75、2.13～21.25,7.91～79.14、20.30～202.96、4.10～40.96 μg/mL线性关系良好,r均大于0.999 0,平均加样回收率为98.15％～101.84％(RSD在0.62％～1.71％).6批样品中丹参酮ⅡA、葛根素、β-蜕皮甾酮、甘草苷、芍药苷、斯皮诺素、阿魏酸、山柰素、大黄素、细叶远志皂苷和23-乙酰泽泻醇B分别在0.870～0.887、6.321～6.329、0.857～0.866、0.171～0.179、0.369～0.377、2.128～2.136、0.088～0.099、0.148～0.155、0.113～0.121、0.371～1.380、0.101～0.109 mg/g.结论 本法快速、灵敏度高、准确度高、专属性好,为心脑康片的质量控制提供依据.
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HPLC梯度洗脱法同时测定玉女煎多指标成分含量
[目的]建立同时测定玉女煎中芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱法.[方法]采用Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 mL/min;检测波长:250 nm(芒果苷、β-蜕皮甾酮)和330 nm(毛蕊花糖苷).[结果]芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷质量浓度在10.0~400.0μg/mL(r=0.9999)、2.4~96μg/mL(r=0.9999)、2.0~80μg/mL(r=0.9999)范围内线性关系良好,3种成分的平均加样回收率(n=9)分别为100.2%、101.0%、98.18%,RSD分别为2.73%、1.95%、1.39%.[结论]该方法简便,重复性好,可为玉女煎的质量控制提供参考.
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HPLC法测定中药材土牛膝中β-蜕皮甾酮的含量
在《江苏省中药材标准》（1989年版）修订之际，研究HPLC法测定土牛膝中主成分β-蜕皮甾酮，作为该标准修订参考。
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β-蜕皮甾酮对匹罗卡品致痫小鼠海马神经元凋亡相关基因表达的影响
目的 观察β-蜕皮甾酮( 20-hydroxyecdysone)对小鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡及凋亡相关基因的影响.方法 将30只CD-1小鼠随机分成正常组、造模组、β-蜕皮甾酮治疗组.用锂-匹罗卡品腹腔注射法诱导小鼠癫痫持续状态,造模成功后72 h,采用尼氏染色观察各组小鼠海马区神经元数目和形态的变化,免疫组化法和Western blot法检测各组神经元凋亡及凋亡相关基因Bcl-2,Bax的表达.结果 模型组小鼠CA1区部分细胞肿胀,锥体细胞排列紊乱,细胞形态不规则,药物治疗组较模型组细胞数目增多,细胞排列有所改善.免疫组化和Western blot结果可见细胞凋亡因子Bax表达模型组高于正常对照组,药物治疗组低于模型组;抑制细胞凋亡因子Bcl-2表达模型组高于正常对照组,药物治疗组高于模型组.结论 β-蜕皮甾酮(20-HE)可能通过降低Bax,提高Bcl-2蛋白的表达,减轻癫痫发生后对大脑的损害.
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β-蜕皮甾酮对APP/PS-1转基因小鼠学习记忆能力及海马Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
目的 观察β-蜕皮甾酮对APP/PS-1转基因小鼠学习记忆能力及海马Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 取C57小鼠6只及APP/PS-1转基因小鼠12只,C57小鼠为对照组(Control)、APP/PS-1小鼠12只随机分为模型组(APP/PS-1)和实验组(APP/PS-1+20HE),实验组APP/PS-1转基因小鼠按14.4mg/kg的剂量灌胃β-蜕皮甾酮,每日一次,对照组及模型组小鼠灌胃等量蒸馏水,连续灌胃8周,Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,尼氏染色观察各组小鼠海马组织病理学变化,免疫组化法观察海马Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 模型组小鼠与对照组小鼠相比,认知能力明显下降(P<0.01),海马Bcl-2和Bax蛋白表达均增加.实验组与模型组相比,学习记忆能力明显改善(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达增加,Bax蛋白的表达减少.结论 β-蜕皮甾酮能够改善APP/PS-1转基因小鼠的学习记忆能力,可能与促进海马Bcl-2蛋白表达和抑制Bax蛋白表达有关.
关键词： β-蜕皮甾酮 APP/PS-1转基因小鼠 Bcl-2 Bax -
β-蜕皮甾酮化学结构修饰研究进展
β-蜕皮甾酮是一种重要的植物甾酮,它参与控制昆虫等无脊椎动物的蜕皮和繁殖过程.药理实验表明β-蜕皮甾酮具有促进蛋白质合成、降低血糖血脂以及改善学习和记忆等多种功效.多年来人们对其化学结构修饰及蜕皮活性的研究取得了一定的进展和成果,该文对历年来β-蜕皮甾酮的化学结构修饰和蜕皮活性研究成果进行概述.
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正交试验优选糖肾康颗粒提取工艺
目的:优选糖肾康颗粒水提取工艺.方法:采用L9(34)正交试验法,以浸膏得率、黄芪甲苷和蜕皮甾酮提取量为指标,对加水量、煎煮时间、煎煮次数进行优选.结果:佳提取工艺为:加水量10倍,煎煮3次,每次1.0h.结论:优选的工艺合理,重复性好,样品质量稳定.
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β-蜕皮甾酮的分离及结构修饰
目的 从露水草总甾酮中分离β-蜕皮甾酮并对其进行结构修饰.方法 采用硅胶柱色谱分离β-蜕皮甾酮,并以其为原料通过化学合成的各种手段合成结构类似物,利用光谱分析方法对所得化合物进行结构确证.结果与结论 从露水草总甾酮中分离了β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone)及另一含量较大的筋骨草甾酮C(ajugasterone C).以分离的β-蜕皮甾酮为原料化学合成了5种植物甾酮.分别是2,3,20,22-双异丙叉基β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone 2,3,20,22-diacetonide Ⅰ)、20,22-异丙叉基β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone 20,22-acetonideⅡ)、2,3,20,22-双异丙叉基-25-乙酰基β-蜕皮甾酮(viticosterone E 2,3,20,22-diacetonideⅢ)、2,3-异丙叉基β-蜕皮甾酮(20-hydroxyecdysone 2,3-acetonide Ⅳ)、2,3-异丙叉基-22-羰基β-蜕皮甾酮(22-oxo-20-hydroxyecdysone2,3-acetonide Ⅴ).
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抗疏健骨颗粒水提工艺研究
目的 优化抗疏健骨颗粒水提工艺条件,为抗疏健骨颗粒剂的进一步研究奠定基础.方法 以β-蜕皮甾酮含量及出膏率为评价指标,在单因素实验的基础上,通过正交试验筛选抗疏健骨颗粒佳水提工艺.结果 影响水提工艺各因素的作用主次为:C提取次数＞B提取时间＞A溶剂用量,佳提取工艺条件是A2B2C3,即用10倍量水,提取3次,每次90 rain.结论 通过单因素试验、正交试验设计优选得到的抗疏健骨颗粒中牛膝、白术2味药材的水提工艺条件稳定可行.
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β－蜕皮甾酮对实验性牙周炎大鼠症状及氧化应激的改善作用
目的：探讨β－蜕皮甾酮（EDS）对实验性牙周炎大鼠症状及氧化应激相关指标的改善作用。方法选取雄性 SD大鼠（260～280 g）采用物理机械刺激法制备实验性牙周炎大鼠模型。将45只成功诱导的牙周炎大鼠模型随机分组（n＝15）：高剂量 EDS（EDS－H）组、低剂量 EDS （ EDS－L）组及生理盐水（ NS）组。 EDS－H组与EDS－L组分别腹腔注射20 mg? kg－1? d－1或40 mg? kg－1? d－1 EDS；同时选取15只同周龄正常大鼠作对照（ C），NS组和C组均腹腔注射等体积生理盐水。于EDS腹腔注射前后分析各组的牙龈指数（ GI）和附着水平（ AL）来评价症状改善情况；采用试剂盒检测牙龈组织丙二醛（MDA）、过氧化氢脂质（LPO）水平及过氧化氢酶（CAT）活性；酶联免疫吸附法检测牙龈组织中前列腺素（PG）E2和肿瘤坏死因子（TNF）－α及龈沟液中白介素（IL）－6水平；荧光探针 DHE 染色法及荧光免疫组化法检测牙龈组织中活性氧自由基（ROS）和基金金属蛋白（MMP）2的表达情况。结果与C组相比，NS组的GI和AL、牙龈组织MDA、LPO、PGE2、TNF－α、ROS和 MMP2的 IOD水平及龈沟液中 IL－6水平均升高，CAT活性降低（均P＜0．05）；给予腹腔注射EDS可改善牙周炎大鼠的以上异常指标（P＜0．05），EDS－H组、EDS－L组与 C组的差异均有统计学意义（P＜0．05）；且EDS－H组的以上指标均优于EDS－L组（P＜0．05）。结论 EDS对实验性牙周炎大鼠的症状有较好的治疗效果，同时对牙龈氧化应激、MMP2表达及炎症反应均有较显著的改善作用。
