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针刺不同穴位对大鼠前庭内侧核神经元自发放电的影响
目的:通过观察针刺不同部位腧穴对前庭内侧核(MVe)神经元自发放电的影响,探讨不同部位针刺信号是否传入MVe及相应的效应特征.方法:选用成年健康雄性SD大鼠,20％乌拉坦麻醉状态下定位右侧MVe,采用细胞外玻璃微电极记录的方法,比较针刺足三里、曲池、胃俞和中脘对MVe神经元自发放电影响.结果:针刺足三里、曲池、胃俞和中脘均能不同程度地兴奋MVe神经元(P＜0.01,P＜0.05).与足三里、曲池相比,胃俞的兴奋效应更强(P＜0.05).结论:针刺不同部位腧穴均可不同程度上兴奋MVe,影响MVe神经元自发放电.胃俞对MVe可能具有更强的调节作用.
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大鼠前庭内侧核神经元的内在膜特性及其对前庭模拟传入信号的反应
目的 观察大鼠前庭内侧核神经元的膜特性及其对前庭外周模拟传入信号的放电反应,探讨前庭系统生理功能的可能机制.方法 运用红外微分干涉相差技术,可视状态下对前庭内侧核神经元进行全细胞记录,按平均动作电位形状对神经元分型,比较不同类型神经元膜特性的差异.向胞内注入刺激电流以模拟头部作直线加速和匀速旋转运动时外周前庭的传入信号,观察神经元的放电反应.结果 在大鼠前庭内侧核神经元可记录到放电活动,在低钙高镁人工脑脊液中放电活动仍然存在.神经元可被分为有单相后超极化及A样整流的A型(33%),有双相后超极化的B型(63%),以及同时具有或不具有以上特征的其他型(4%);A、B型神经元的部分主动膜特性存在明显差异,对同样的模拟传入信号可作出不同的反应.结论 大鼠前庭内侧核神经元的放电基于其内在膜特性的自发活动;大部分神经元的放电表现为典型的A型或B型,但仍有少量非典型放电存在;A、B型神经元膜特性和放电反应特性的差异是它们执行不同生理功能的基础.
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γ-氨基丁酸A受体对在体前庭内侧核神经元调控的电生理研究
目的探讨γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)不同受体在前庭核神经元电活动调控中的作用.方法选用健康雄性Wistar大鼠26只,以在体微电泳方法检测γ-氨基丁酸、荷包牡丹碱(bicuculine, BIC,γ-氨基丁酸A拮抗剂)和2-羟基巴氯芬 (2-hydroxysaclofen ,SAC,γ-氨基丁酸B拮抗剂)对大鼠前庭内侧核神经元自发放电的影响.结果记录了42个前庭内侧核神经元对γ-氨基丁酸的反应,以10、30、50 nA的电流微电泳γ-氨基丁酸,放电频率的减少呈明显的量效关系,平均放电频率(±s)由基础频率的(14.8±5.6)次/s分别减至(8.7±3.4)次/s、(4.1±1.6)次/s和(2.2±1.1)次/s;观察了37个前庭内侧核神经元对BIC的反应,微电泳BIC后,86.5%(32/37)神经元出现兴奋性反应,13.5%(5/37)无反应;以10、30、50 nA的电流电泳BIC,放电频率分别由基础状态下的(15.3±6.3)次/s分别增加至(16.8±7.1)次/s、(25.9±10.1)次/s和(32.7±11.3)次/s,呈明显的量效关系,并能完全阻断γ-氨基丁酸的抑制性效应;但微电泳SAC对大多数前庭内侧核神经元无明显影响,对γ-氨基丁酸的阻断作用也不明显.结论γ-氨基丁酸能明显抑制前庭内侧核神经元自发放电,这种作用主要是通过γ-氨基丁酸A受体介导的.
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急性低血压对清醒大鼠前庭内侧核区γ-氨基丁酸和甘氨酸含量的影响
为了探讨急性低血压通过外周前庭器官影响前庭神经核活动的部分神经化学机制,本实验利用脑部微量透析法和高效液相色谱法,观察静脉注射硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)诱发急性低血压时,清醒大鼠前庭内侧核(medial vestibular nucleus,MVN)内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)和甘氨酸(glycine,Gly)含量的变化.实验选用Wistar雄性清洁级大鼠72只,体重在(250±50)g,随机分为对照组、前庭器官损伤同侧组和前庭器官损伤对侧组.实验观察到,静脉注射SNP使血压平均下降30%时,MVN内GABA和Gly含量明显减少(P<0.01).用对氨基苯胂酸盐破坏单侧外周前庭器官两周后,静脉注射SNP使血压降低30%后,单侧前庭器官破坏同侧MVN内GABA和Gly含量无明显变化;而单侧前庭器官破坏对侧MVN内GABA和Gly含量明显减少(P〈0.01).上述结果提示,清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有GABA和Gly的参与.
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单侧迷路破坏后大鼠前庭神经内侧核区氨基酸含量的变化
本实验用脑部微量透析法和高效液相色谱法观察单侧迷路破坏(unilateral labyrinthectomy,经利多卡因或对氨基苯胂酸盐预处理以阻断单侧外周前庭器官)后大鼠同侧及对侧前庭神经内侧核(medial vestibular nucleus,MVN)区部分氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、牛磺酸和丙氨酸)含量的变化,以了解前庭代偿的部分神经化学机制.实验观察到,对照组大鼠MVN区天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、牛磺酸和丙氨酸浓度分别为(6.15±0.59),(18.13±1.21),(33.73±1.67),(9.26±0.65),(9.56±0.77)和(10.07±0.83)pmol/8 μL透析样本.左侧中耳内灌注2%利多卡因后10 min,同侧MVN区天冬氨酸、谷氨酸含量立即减少(P＜0.05),牛磺酸含量增加(P＜0.05);对侧MVN区谷氨酸含量立即增加(P＜0.05),甘氨酸和丙氨酸含量减少;双侧核团间谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸含量失衡.而用对氨基苯胂酸盐永久阻断单侧前庭器官2周后,同侧MVN区谷氨酸和丙氨酸含量减少,谷氨酰胺含量增高;对侧MVN区谷氨酸含量也减少;同侧MVN区谷氨酰胺含量明显高于对侧MVN区.结果提示,单侧迷路破坏后双侧MVN区氨基酸含量立即失去平衡,随着前庭代偿的进展,此差异减少,但是在前庭代偿后却出现双侧前庭核区谷氨酰氨的含量失衡,说明在前庭代偿过程中氨基酸含量变化起着重要作用.
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急性低血压对前庭神经内侧核区谷氨酸和牛磺酸含量的影响
本实验用脑部微量透析法和高效液相色谱法观察急性失血诱发大鼠低血压时前庭神经内侧核(medial vestibularnucleus,MVN)内氨基酸类神经递质谷氨酸(glutamate,Glu)和牛磺酸(taurine,Tau)含量的变化,以了解MVN内这些氨基酸类递质是否参与血压的调节.实验观察到,正常血压大鼠MVN内Glu和Tau浓度在透析探针植入90 min后趋于稳定,此时Glu的平均含量为(18.96±0.27)pmol/8 μl透析液,Tau的平均含量为(7.73±0.05)pmol/8μl透析液.动脉抽血1.5 ml诱发急性低血压时,同侧MVN区Glu含量增加(P＜0.05),Tau含量减少(P＜0.05).用利多卡因(lidocaine)短时阻断前庭传入及用化学方法永久破坏单侧前庭器官后,动脉抽血1.5 ml使血压降低30%,同侧MVN内氨基酸类神经递质无明显改变.结果提示,急性失血引起的低血压可通过前庭器官影响MVN的活动,该区内氨基酸类递质可能参与这一活动的调节.
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荧光探针逆行标记投射至小脑的前庭内侧核神经元及其活性评价
目的 探索甄别投射至小脑的前庭内侧核(MVN)神经元的方法,并对其活性进行评价.方法 应用在体荧光探针逆行标记投射至小脑的MVN神经元,应用中性红染色鉴定细胞存活时间,应用全细胞膜片钳技术记录其基础电生理特性,并与未经探针标记的MVN神经元进行比较.结果 投射至小脑的MVN神经元(CPMVNs)与未经探针标记的SD大鼠MVNs在离体1、2、3、4、5h的条件下存活时间比较差异无统计学意义;自发性放电频率及膜电位的电生理比较差异无统计学意义;两组神经元单突触激发的兴奋性突触后电流(eEPSCs)幅值分别为(267.100±7.563)pA(n=18)和(266.900±6.730)pA(n=25),组间比较差异无统计学意义(P=0.962);两组神经元自发性抑制性突触后电流(sIPSCs)幅值及频率分别为(19.320±1.768)pA及(2.936±0.512)Hz(n=21),(18.360±1.700)pA及(2.871±0.454)Hz(n=27),两组sIPSCs在电流幅值(P=0.207)及频率(P=0.755)比较差异均无统计学意义.结论 应用在体荧光探针逆行标记技术甄别活性良好的CPMVNs,可为进一步研究前庭小脑通路上突触信号传导机制提供特异性实验对象.
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mAChRs调节投射至小脑MVN神经元突触传入的机制
目的:探讨毒蕈碱受体(mAChRs)调节投射至小脑MVN神经元(CPMVNs)突触传入的具体机制,为前庭代偿的机制研究以及眩晕的临床治疗提供电生理学依据.方法:应用在体荧光探针逆行标记技术成功甄别并获取活性良好的SD大鼠CPMVNs,结合全细胞脑片膜片钳技术对mAChRs调节CPMVNs突触传入的机制进行探索.结果:①mAChRs特异性激动剂oxotremorine-M可浓度依赖性显著降低CPMVNs上单突触激发的兴奋性突触后电流(eEPSCs)的电流幅值.②选择性GABAA受体拮抗剂gabazine(10 μM)可完全阻断自发性抑制性突触后电流(sIPSCs),特异性的甘氨酸受体拮抗剂士的宁(strychnine,2μM)对该sIPSCs频率及电流幅值并无影响;2μM和5 μM oxotremorine-M对sIPSCs频率及电流幅值均无明显作用.③M2特异性拮抗剂AF-DX 116(2 μM)本身并不影响eEPSCs电流幅值,但却能完全阻断oxotremorine-M对CPM-VNs上谷氨酸能eEPSCs的抑制作用.结论:突触前mAChRs抑制CPMVNs上前庭传入神经末梢谷氨酸能传入;CPMVNs上抑制性突触传入由GABA能传入神经纤维介导,且mAChRs对CPMVNs上抑制性突触传入并无调制作用;M2受体亚型介导oxotremorine-M对CPMVNs上谷氨酸能eEPSCs的抑制作用.
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前庭代偿过程中GABAA受体α1亚型在前庭内侧核中的变化
目的 观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核(medial vestibular nuclei, MVN)内γ-氨基丁酸A受体(gamma-aminobutyric acid A receptor, GABAA receptor)α1亚型的表达变化.方法 将24只大鼠随机分为术后1、3、7天组和假手术组,每组6只,前三组切除大鼠一侧迷路,第4组行假手术,利用免疫组织化学、原位杂交组织化学的方法,观察术后1、3、7天组前庭内侧核区GABAA受体α1亚型表达的变化,及其在前庭代偿中可能的作用 ,并与假手术组进行比较.结果 手术后1天、3天、7天组行为学上开始均有前庭静态症状,术后7天时前庭静态症状均消失,假手术组无相关症状出现.免疫组织化学、原位杂交组织化学方法前庭内侧核中各组手术侧与对侧比较及术后1天、3天、7天组与假手术组比较,GABAA受体α1亚型表达差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在前庭代偿的早期,GABAA受体α1亚型表达的变化可能没有涉及前庭代偿.
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豚鼠一侧迷路毁损后前庭内侧核c-fos表达
目的观察右侧迷路毁损后前庭内侧核(medial vestibular nucleus, MVN)早期快反应基因c-fos的表达特征.方法选择健康白色赤目纯种豚鼠27只,将豚鼠右侧迷路毁损后,在不同存活时间行前庭内侧核c-fos蛋白的二步法免疫组化染色,光学显微镜下观察染色结果.结果对照组未见Fos样免疫反应.一侧迷路毁损(unilateral labyrinthectomy, UL)后可诱发双侧MVN Fos样免疫反应,且术侧大于健侧.结论①UL毁损可诱导MVN Fos样免疫反应增强,是前庭神经系统对外界刺激应答的一种方式,早期Fos样免疫反应(1～6 h)可能反应了复杂的神经通路的活性,延迟Fos样免疫反应(24～48 h)可能构成了前庭损伤后恢复过程中可塑性改变的基础; ②前庭功能具有巨大的代偿潜力;③fos靶基因的本质及其他早期癌基因(immediate early gene, IEG)的作用仍待进一步研究.
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单侧迷路破坏术后GABAA受体β2亚型在前庭内侧核中的变化
目的:观察单侧迷路破坏术后前庭内侧核(MVN)内γ-氨基丁酸A受体(GABAA receptor)β2亚型的表达变化. 方法:利用免疫组织化学、蛋白免疫印记法(Western blot),切除大鼠一侧迷路,观察前庭内侧核区GABAA受体β2亚型表达的变化,及其在前庭代偿中可能的作用. 结果: 手术两侧比较及术后1 d、3 d、7 d组与假手术组比较差异均无显著性意义(P＞0.05). 结论: 在前庭代偿的早期,GABAA受体β2亚型表达的变化极可能没有涉及前庭代偿.
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急性低血压兴奋前庭内侧核的5－羟色胺及其受体机制
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
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急性低血压兴奋前庭内侧核的5－羟色胺及其受体机制
目的：探讨急性低血压兴奋清醒大鼠前庭内侧核（ MVN）的5－羟色胺（5－HT）及其受体机制。方法：利用脑部微量透析法和免疫组织化学法观察了MVN区5－HT含量及其受体表达。结果：静脉注射硝普钠诱发急性低血压时，对照组和单侧前庭器官破坏对侧MVN区5－HT含量明显增加（P＜0．05），而单侧前庭器官破坏同侧MVN区5－HT含量无明显变化。在前庭器官完整大鼠诱发急性低血压后双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体表达均明显增多，但是在对照组无明显表达，组间比较均具有显著差异（ P＜0．05）。破坏单侧外周前庭器官2周后，诱发急性低血压时双侧MVN区5－HT及5－HT1A受体均不对称表达，损伤侧表达均明显少于损伤对侧（ P＜0．01）。结论：清醒动物诱发急性低血压影响MVN功能活动过程中可能有5－HT及其受体的参与。
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豚鼠单侧迷路破坏后前庭内侧核中组胺受体H1亚型的变化研究
目的 观察左侧迷路毁损后早期不同时程豚鼠前庭内侧核(MVN)组胺受体H1亚型表达特征.方法 选择健康黑色豚鼠32只,按随机数字表法分为迷路破坏组(24只)和假手术组(8只),前者全部破坏左侧迷路,假手术组操作均同迷路破坏组但保持迷路完好.单侧迷路破坏术后,迷路破坏组在不同存活时间(术后12 h,48h,5d)随机取8只,用免疫组织化学染色,观察前庭内侧核组胺受体H1亚型的表达,并与假手术组比较.结果 豚鼠经单侧迷路破坏术后,术侧MVN区组胺受体H1亚型在术后12 h、48h较健侧及假手术组明显增加(P＜0.05),但5d时与健侧及假手术组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 (1)豚鼠MVN中存在组胺受体H1,且前庭代偿的早期极可能与MVN内组胺H1受体表达的变化有关.(2)在一侧迷路破坏后,前庭功能具有很大的代偿潜力.
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大鼠前庭内侧核γ-氨基丁酸受体mRNA的表达
γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)是前庭传入神经系统的抑制性神经递质,GABA的A受体或B受体的拮抗剂都能改变前庭神经元的放电[1],提示前庭神经核内存在着GABA的两种受体.然而,前庭中枢究竟存在着哪些GABA受体的亚基/亚型,目前少见报道.本研究旨在探明前庭核内GABA的受体亚基/亚型,以进一步明确其神经化学基础.
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银杏叶制剂对一侧迷路切除后前庭内侧核区突触素表达的影响
目的观察银杏叶制剂对左侧迷路切除后前庭内侧核(medial vestibular nucleus, MVN)区突触素(synaptophysin)表达的影响. 方法健康成年豚鼠15只,随机分3组:正常对照组、迷路切除(UL)组和UL+金纳多(EGb)组,ip EGb,50 mg*kg-1*d-1,共30 d. 左侧迷路切除后,不同存活时间行前庭内侧核突触素二步法免疫组化染色. 结果一侧迷路切除(unilateral labyrinthectomy, UL)后10 h,受损侧MVN突触素免疫反应强度降低,20 d有所增加(P<0.05),90 d明显恢复至正常(P>0.05). 未损侧突触素免疫反应强度在不同时间段与正常对照无显著差别. UL+金纳多(EGb)组受损侧,术后10 h及20 d较同期UL组MVN突触素免疫反应强度高(167.0±2.7,172.5±2.0 vs 159.9±1.9,169.2±3.1,P<0.05),但术后90 d与正常对照无显著差别(P>0.05). 结论 UL+EGb组突触密度恢复较UL组快. 前庭代偿及银杏叶制剂促进前庭代偿与前庭核区结构的调整有关. 银杏叶提取物对失支配侧前庭核的结构重塑具有易化作用.
