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半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMrSV5细胞凋亡的影响
目的:观察半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮细胞凋亡的抑制作用.方法:将胃癌BGC-823细胞上清液与人腹膜间皮HMrSV5细胞共培养,建立胃癌微环境对腹膜间皮细胞损伤模型,并以不同浓度的半夏泻心汤含药血清进行干预,倒置相差及荧光显微镜下观察腹膜间皮细胞细胞骨架及凋亡特征,Westernblot法检测腹膜间皮细胞Bcl-2及Bax蛋白的表达.结果:经胃癌微环境诱导后腹膜间皮细胞脱落形成裸区,骨架稀疏,微丝变少、变细,散乱排列,并出现核溶解、碎裂、固缩等凋亡特征,Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.01),Bax蛋白表达增高(P＜0.05),不同浓度的半夏泻心汤含药血清可保护腹膜间皮细胞细胞骨架,减少细胞凋亡,增加Bcl-2蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),降低Bax蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:半夏泻心汤含药血清能够抑制胃癌微环境诱导腹膜间皮细胞凋亡.
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胃癌微环境对大鼠骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响
背景：临床胃癌组织及裸鼠体内致瘤组织分离得到的胃癌间质干细胞(GC-MSCs)，其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似，并证明是肿瘤微环境的重要组成部分，可促进肿瘤的生长，作者推测骨髓间充质干细胞在胃癌微环境中生物学特性可能发生变化。
目的：观察胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响。
方法：设立骨髓间充质干细胞单独常规培养为对照组，实验组采用 transwel 小室将人胃癌 BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养建立胃癌微环境，倒置相差显微镜观察骨髓间充质干细胞形态的变化、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察骨髓间充质干细胞的增殖率、流式细胞术(FCM)检测骨髓间充质干细胞周期及表面抗原CD34、CD44的表达。
结果与结论：①实验组骨髓间充质干细胞排列紊乱，不规则，细胞间连接疏松，细胞变细、变长，胞核变小，呈团生长，与人胃BGC-823癌细胞形态有相似之处；②G1期细胞比例明显降低，S期细胞比例明显增加(P<0.01)、G2/M期细胞比率显著增加(P<0.05)；③实验组骨髓间充质干细胞的CD44阳性表达率显著降低，CD34阳性表达率显著降升高(P<0.01)；④结果表明，将人胃癌BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养模拟胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长增殖及CD34、CD44表达有显著影响，有向胃癌细胞恶性转化的趋势。 -
胃癌微环境转化后骨髓间充质干细胞的体内致瘤性
背景:临床胃癌组织及裸鼠体内致瘤组织分离得到的胃癌间质干细胞,其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,并证明是肿瘤微环境的重要组成部分,可促进肿瘤的生长.目的:观察经胃癌微环境转化后的骨髓间充质干细胞在体内是否具有致瘤能力.方法:设立骨髓间充质干细胞单独常规培养为对照组,实验组采用Transwell小室将人胃癌BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养建立胃癌微环境.收集骨髓间充质干细胞,分别在裸鼠腋下部位行皮下接种对照组细胞或实验组共培养转化后的骨髓间充质干细胞,观察裸鼠皮下有无结节形成;免疫组织化学法检测肿瘤组织潜伏膜蛋白LMP1及抑癌基因TCF21的表达;透射电镜观察肿瘤组织的超微结构.结果与结论:①肿瘤结节:对照组裸鼠接种单独培养的骨髓间充质干细胞7-14d后,始终未形成肿瘤结节.实验组在第7天皮下开始出现肿瘤结节,至14d肿瘤结节显著增大并稳定;②免疫组织化学显示,实验组潜伏膜蛋白LMP1呈显著现高表达状态,抑癌基因TCF21呈低表达状态;③透射电镜结果显示肿瘤体组织体积较大,形态不规则,细胞微绒毛异常增多,表面有许多树枝状突起,细胞内成分发生明显改变;④结果表明,经胃癌微环境转化的骨髓间充质干细胞具有体内致瘤能力.
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miR-1288调控骨髓间质干细胞促进胃癌细胞迁移
目的 探讨miR-1288在胃癌细胞培养上清诱导后骨髓间质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMMSC)中的表达情况及其调控BMMSC对胃癌细胞迁移能力的影响.方法 采用SGC-7901、MGC-803和HGC-27 3种胃癌细胞培养上清分别处理BMMSC,实时荧光定量PCR检测处理前后BMMSC中miR-1288的表达水平.采用寡核苷酸片段NC-mimics和miR-1288-mimics转染BMMSC,Transwell试验检测转染后BMMSC对HGC-27细胞迁移能力的影响.收集胃炎和胃癌组织标本,实时荧光定量PCR检测组织中miR-1288的表达水平.结果 经SGC-7901、MGC-803和HGC-27胃癌细胞上清处理后BMMSC中miR-1288的表达水平分别是对照组的(5.91±0.25)倍(t=15.55,P＜0.01)、(9.69±0.62)倍(t=13.34,P＜0.01)和(24.29±2.69)倍(t=8.631,P＜0.01).miR-1288-mimics转染组迁移细胞数量为(623.3±26.03)个,明显高于NC-mimics对照组[(326±32.08)个],差异有统计学意义(t=7.197,P＜0.01).胃癌组织中miR-1288的表达水平显著高于胃炎组织(P＜0.05).结论 胃癌上清诱导后BMMSC和胃癌组织中异常高表达miR-1288,其可参与调控胃癌细胞的迁移.
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半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导人腹膜间皮细胞氧化应激反应的影响
目的 观察半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMrSV5细胞氧化应激反应的影响.方法 将胃癌BGC-823细胞上清与人腹膜间皮HMrSV5细胞共培养,建立胃癌微环境对腹膜间皮细胞损伤模型,以100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml浓度的半夏泻心汤含药血清进行干预,采用流式细胞术检测腹膜间皮HMrSV5细胞活性氧(ROS)水平、比色法检测腹膜间皮细胞HMrSV5超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的量.结果 经胃癌微环境诱导后腹膜间皮细胞中的ROS及MDA显著升高,SOD及GSH水平下降(P＜0.05),经100μl/ml、200μl/ml、400μl/ml浓度的半夏泻心汤含药血清进行干预后,ROS及MDA水平显著降低,SOD及GSH水平显著升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系.结论 胃癌微环境可诱导人腹膜间皮HMrSV5细胞发生氧化应激反应,半夏泻心汤含药血清可抑制胃癌微环境诱导的腹膜间皮细氧化应激反应.
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半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMrSV5细胞损伤的保护作用
目的 观察半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境诱导腹膜间皮HMrSV5细胞损伤的保护作用.方法 将胃癌BGC-823细胞上清液与人腹膜间皮HMrSV5细胞共培养,建立胃癌微环境对腹膜间皮细胞损伤模型,以不同浓度半夏泻心汤含药血清进行干预,采用倒置显微镜观察HMrSV5细胞形态,MTT法观察HMrSV5细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期.结果 经胃癌微环境诱导后腹膜间皮细胞呈纤维样变化,细胞间排列稀松,可见片状裸区,细胞G0/G1及G2/M比例升高,S期比例及细胞存活率下降,经不同浓度的半夏泻心汤含药血清干预后,HMrSV5细胞形态排列紧密,裸区逐渐消失,细胞G0/G1、G2/M比例下降,S期比例及细胞存活率增加,有显著统计学意义(P＜0.05).结论 半夏泻心汤含药血清能够保护胃癌微环境诱导的腹膜间皮细胞损伤.
