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2009-2013年全国抗结核药物敏感性试验熟练度测试分析
目的 评价和分析2009-2013年全国抗结核药物敏感性试验(简称“药敏试验”)熟练度测试结果,改善我国结核病实验室药敏试验能力.方法 2009-2013年对全国有能力开展药敏试验的省级、地市级508个结核病实验室每年寄发30株Mtb菌株进行8种抗结核药物[异烟肼(H)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、利福平(R)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)、氧氟沙星(Ofx)]的药敏试验熟练度测试,药敏试验方法采用WHO推荐的基于罗氏培养基的比例法.共计收到508个实验室报告的一线抗结核药物药敏试验熟练度测试结果,445个实验室报告的二线抗结核药物药敏试验熟练度测试结果.结果统一由国家结核病参比实验室进行比对.评价指标为敏感度、特异度、重复性和一致性.2009-2013年各指标差异采用卡方检验,变化趋势采用Cochran-Armitage 趋势检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 对于各个药物总敏感度、总特异度、总重复性和总一致性的范围是:H.91.88％～97.62％、92.01％～98.33％、86.55％～95.27％和91.40％～97.60％;S:88.79％～94.14％、87.59％～91.36％、77.37％～93.13％和88.20％～92.45％;E:66.24％～85.17％、83.22％～97.87％、63.46％～89.76％和75.78％～90.80％;R:78.54％～96.34％、96.19％～98.07％、79.11％～95.66％和90.72％～97.21％;Km:81.12％～95.46％、95.35％～98.86％、94.12％～96.84％和90.23％～97.77％;Am:93.14％～98.94％、96.16％～99.00％、93.52％～97.94％和95.59％～98.19％;Cm:52.45％～95.68％、89.68％～97.85％、89.48％～92.99％和89.08％～95.61％;Ofx:84.75％～94.38％、96.21％～98.90％、88.01％～94.41％和93.01％～96.90％.除S的总特异度、Km和Cm的总重复性每年差异无统计学意义外(x2值分别为8.49、4.1和7.78,P值均＞0.05),各个药物的总敏感度每年差异有统计学意义(H:x2 =134.76;S:x2=44.12;E:x2=266.22;R:x2=256.35;Km:x2=197.46;Am:x2=12.16;Cm:x2=433.50;Ofx:x2=47.38,P值均＜0.05);其他各个药物的总特异度每年差异有统计学意义(H:x2=67.69;E:x2=439.39;R:x2=16.61;Km:x2=94.97;Am:x2=52.96;Cm:x2 =139.51;Ofx:x2=11.66,P值均＜0.05);其他各个药物的总重复性每年差异有统计学意义(H:x2=61.82;S:x2 =127.15;E:x2=246.49;R:x2=180.03;Am:x2=21.65;Ofx:x2=28.49,P值均＜0.05);各个药物的总一致性每年差异有统计学意义(H:x2=162.05;S:x2x2=36.58;E:x2=369.11;R:x2=152.30; Km:x2=233.69;A:x2=32.55;Cm:x2=168.79;Ofx:x2=36.97,P值均＜0.05).除Am、Cm的总敏感度,Ofx的总特异度,Km、Am、Cm的总重复性逐年趋势检验无统计学意义外(Z值分别为0.46、0.99、-0.30、-0.85、0.09和-0.27,P值均＞0.05),其他各个药物总敏感度呈逐年提高趋势,趋势检验有统计学意义(H:Z=-11.06;S:Z=-6.39;E:Z=-12.39;R:Z=-11.17;Km:Z=-12.60;Ofx:Z=-4.40,P值均＜0.05);其他各个药物总特异度呈逐年提高趋势,趋势检验有统计学意义(H:Z=-3.85;S:Z=-2.14;E:Z=-12.30;R:Z=-3.31;Km:Z=-5.05;Am:Z=-5.43;Cm:Z=-8.90,P值均＜0.05);其他各个药物总重复性呈逐年提高趋势,趋势检验有统计学意义(H:Z=-5.36;S:Z=-9.11;E:Z=-7.76;R:Z=-8.52;Ofx:Z=-3.44,P值均＜0.05);各个药物总一致性呈逐年提高趋势,趋势检验有统计学意义(H:Z=-10.95;S:Z=-5.95; E:Z=-11.87; R:Z=-9.70; Km:Z=-14.11;Am:Z=-3.32;Cm:Z=-5.71;Ofx:Z=-3.40,P值均＜0.05).结论 开展熟练度测试工作是提高药敏试验能力的有效方法,对于提高我国结核病实验室药敏试验能力具有很大贡献.长期连续的做好实验室内部质量控制并开展药敏试验培训和熟练度测试工作可使全国结核病实验室药敏试验能力逐年提高.
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磺胺类药物对结核分枝杆菌的体外抑菌作用及与其他抗结核药物相互作用的研究
目的 评价磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole,SMX)和甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)对结核分枝杆菌的体外抑菌作用,并探讨SMX与其他抗结核药物的体外相互作用.方法 采用微孔板Alamar blue法测定TMP联合SMX对121株结核分枝杆菌临床株的低抑菌浓度(MIC).同时采用分层整群抽样设计方法,抽取18株结核分枝杆菌临床分离株观察SMX在与利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、卡那霉素、氧氟沙星、利福布丁联用时MIC值的影响,以H37Rv为对照,通过计算分级抑菌浓度指数(FICI),观察SMX与其他抗结核药物之间是否存在协同作用.采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,MDR菌株、非MDR菌株、敏感菌株间MIC的比较采用非参数秩和检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 90.08％(109/121)的结核分枝杆菌临床分离株可以被MIC为1/19(TMP∶ SMX) μg/ml的复合制剂抑制生长,5株菌株的“TMP∶ SMX=1∶19”的MIC为2/38 g/ml,仅有7株“TMP∶ SMX=1∶19”的MIC≥2/38 μg/ml,包括敏感株5株,MDR菌株2株.“TMP∶SMX=1∶19”对敏感株、MDR菌株及非MDR菌株MIC间的差异没有统计学意义(x2=0.111,P=0.946).对于H37Rv,SMX与其他抗结核药联合用药后,除了利福布丁表现出协同作用(FICI为0.281)外,其余药物均表现为无关作用.对18株临床分离株,SMX与其他抗结核药联合用药后,77.78％(14/18)表现为与利福布丁协同,FICI范围为0.205～1.063.结论 TMP联合SMX有较好的抗结核分枝杆菌活性,并且这种活性与细菌对其他药物是否耐药无关；SMX与其他常用抗结核药的相互作用主要表现为无关.
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TREK Sensititre(R) MYCOTB检测结核分枝杆菌对一、二线抗结核药物的敏感性研究
目的 本研究旨在评价TREK Sensititre(R) MYCOTB(简称“MYCOTB”;一种含有一、二线抗结核药物冻干粉的商品化药敏板)检测一、二线抗结核药物的敏感性的效能.方法 采用随机数字表法选取来自国家结核病参比实验室的151株结核分枝杆菌临床分离株,采用MYCOTB方法对一、二线抗结核药物[包括氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)、利福平(rifampin,RFP)、阿米卡星(amikacin,Am)、链霉素(streptomycin,Sm)、利福布汀(rifabutin,Rfb)、对氨基水杨酸(para-aminosalicylic acid,PAS)、乙硫异烟胺(ethionamide,Eto)、环丝氨酸(cycloserine,Cs)、异烟肼(isoniazid,INH)、卡那霉素(kanamycin,Km)、乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]进行药物敏感性试验(简称“药敏试验”).并使用Middlebrook 7H10琼脂比例法(APM)作为对照,研究评估MYCOTB的敏感度、特异度、可行性及两种药敏试验方法的一致率.结果 8/12种药物(Ofx、Mfx、RFP、Sm、Rib、Eto、Km及EMB)的敏感度≥90％,其余4种药物除Cs外,敏感度均≥80％.另外,除Rfb的特异度为86.8％外,其余药物的特异度均≥90％.9/12种药物(Ofx、Mfx、RFP、Am、Sm、PAS、Eto、Cs及Km) MYCOTB和APM的绝对一致率≥94％.10/12种药物(Ofx、Mfx、RFP、Am、Sm、PAS、Eto、Cs、Km及EMB)的MYCOTB和APM的条件一致率≥96％.MYCOTB的平均判读时间为10d,10/12种药物(Ofx、Mfx、RFP、Am、Sm、Rfb、PAS、Eto及EMB)双人判读的一致率≥94％.结论 MYCOTB方法检测Mtb对一、二线抗结核药物的敏感性试验是可行、可靠的.
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Xpert Mtb/RIF检测技术诊断肺结核和肺外结核的价值
目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)在结核病诊断中的临床应用价值.方法 对200例初治结核病患者标本,包括痰液、肺泡灌洗液、胸腹腔积液和脑脊液各50例,分别进行抗酸染色法、固体培养法、药物敏感性试验(简称“药敏试验”)及Xpert Mtb/RIF检测,分别以固体培养结果和药敏试验结果为金标准,分析Xpert Mtb/RIF检测标本中结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值.Xpert Mtb/RIF检测和金标准检测进行一致性检验(Kappa检验),K＞0.8认为两者一致性极好.结果 以固体培养法检测结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术,以及抗酸染色法总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为94.52％ (69/73)、90.55％(115/127)、85.19％(69/81)、96.64％(115/119)和0.83,以及65.75％(48/73)、96.06％(122/127)、90.57％(48/53)、82.99％(122/147)和0.66;以比例法药敏试验结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术检测利福平耐药性的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为93.75％(15/16)、100.00％(53/53)、100.00％(15/15)、98.15％(53/54)和o.96.结论 XpertMtb/RIF法可快速检测肺内、外结核分枝杆菌及其耐药性,具有良好的应用前景.
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住院结核病患者铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的检出率及药物敏感性分析
目的 了解结核病患者铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的检出率及药物敏感性试验结果,为探讨合理使用抗生素和控制医院感染提供依据.方法 根据《全国临床检验操作规程》,收集广州市胸科医院2011年1月至2013年8月临床住院结核病患者共6493例的送检标本,标本包括痰液、支气管纤维镜冲洗液、胸或腹腔积液、伤口分泌物、血液等.以痰液标本为主,占77.91％(5059/6493);支气管冲洗液次之,占13.52％(878/6493),其他标本占8.56％(556/6493).应用PHOENIX-100全自动微生物分析仪对细菌进行菌群鉴定和临床常用抗生素的药物敏感性试验.结果 6493例标本共分离出3612株临床分离株,其中铜绿假单胞菌985例,占总微生物的27.27％(985/3612);鲍曼不动杆菌324例,占8.97％(324/3612).其中铜绿假单胞菌对多黏菌素的敏感率达100.00％(985/985)、妥布霉素敏感率也在94.52％(931/985),对氨苄西林舒巴坦和头孢唑啉的耐药率均为99.39％(979/985).鲍曼不动杆菌除了对多黏菌素高度敏感(100.00％,324/324)外,对其余常用抗生素均有不同程度耐药.结论 铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌对临床多种抗生素呈现耐受性,因此应根据药物敏感性试验结果合理选择抗生素,避免耐药菌株的产生.
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河南省结核分枝杆菌药物敏感性测试质量控制结果分析
目的 评价河南省Mtb药物敏感性测试的质量,规范并完善河南省结核病实验室药物敏感性室间质量保证体系.方法 河南省6个受评估实验室按照《结核病诊断实验室检测规程》中比例法药敏试验要求对河南省结核病参比实验室下发的一线及二线药敏测试菌株58株进行比例法药敏试验,试验结果均报河南省结核病参比实验室( PRL),由PRL与标准结果比较并进行统计学分析.结果 一线药物INH、RFP、S和EMB的一致性分别为91.0％(151/166)、95.8％ (159/166)、89.2％ (148/166)和77.1％(128/168)；二线药物平均一致性达到了94.9％(683/720).结论 河南省6个评估实验室一线药的INH和RFP及四种二线药物敏感性检测均达到WHO和国家要求,EMB的敏感性检测水平有待进一步提高.
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观察改良的药物敏感性检测法对检出耐药结核分枝杆菌的影响
目的 利用经改良的低抑菌浓度法(IMIC)检测结核分枝杆菌临床分离株对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素和氧氟沙星的药物敏感性,观察其对耐药结核分枝杆菌检出的影响.方法 利用改良的低抑菌浓度法检测135株临床分离株对INH、RFP、EMB、SM及OFLX的敏感性.结果 在相同的药物浓度中,与接种1×105/ml菌量的试验管相比135株接种1×107/ml活菌数的试管中有68.89%的结果与之相同,有31.1%的结果与之不相同.判断结果由阴性转阳性的标本共有20株,(其中耐RFP的1株、耐INH的3株、耐OFLX的3株、耐EMB的5株以及耐SM的8株)约占135株受试菌株总数的14.8%.结论 利用改良的低抑菌浓度法可发现潜在的耐药结核病患者,提高耐药菌的检出率.
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老年肺结核患者的耐药性分析
目的探讨老年肺结核患者结核分枝杆菌的耐药特征. 方法 选取2014年1月至2015年12月在上海市公共卫生临床中心结核科住院并有痰培养及药物敏感性试验(简称"药敏试验")结果的116例老年肺结核患者(老年组),和同期住院的204例非老年肺结核患者(非老年组),分析两组患者的药敏试验情况.结果 老年组总体耐药率为21.6%(25/116),其中初治患者103例(88.8%),耐药率为20.4%(21/103);复治患者13例(11.2%),耐药率为30.8%(4/13);耐多药患者占4.3%(5/116);非老年组总体耐药率为29.4%(60/204),其中初治患者181例(88.7%),耐药率24.9%(45/181);复治患者23例(11.3%),耐药率65.2%(15/23);耐多药患者占8.8%(18/204);老年组复治患者的耐药率明显低于非老年组复治患者的耐药率(x2=3.96,P=0.047).老年组与非老年组患者耐药的药物顺序前4位均为异烟肼(13.8%,16/116;21.1%,43/204)、链霉素(11.2%,13/116;18.6%,38/204)、利福平(5.1%,6/116;12.2%,25/204)、乙胺丁醇(3.4%,4/116;5.4%,11/204),仅非老年组对利福平的耐药率明显高于老年组,差异有统计学意义(x2=4.24,P=0.039).老年组患者中,60~70岁之间患者耐药率(39.5%,17/43)明显高于70岁以上患者(11.0%,8/73),差异有统计学意义(x2=13.07,P<0.001).结论老年肺结核患者总耐药率、复治患者耐药率明显低于非老年组,临床上需要及时对60~70岁的老年患者和30~60岁的非老年组患者进行药敏试验.
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北京市耐多药肺结核控制5年结果分析
目的 调查北京市疑似耐多药肺结核(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者中抗结核药物耐药谱,评估国产药物组方化疗MDR-TB患者的疗效,探索适合北京市的MDR-TB控制策略.方法 2008年4月至2013年3月,全市各结核病防治(简称“结防”)机构对21651例活动性肺结核患者治疗管理中,通过痰培养发现的1124例疑似MDR-TB患者.对885例属结核分枝杆菌复合群的疑似MDR-TB患者的阳性培养物开展抗结核药物药敏试验.确诊的277例MDR-TB患者,进行国产药物组方化疗,根据患者情况分类选择治疗管理方式,观察其不良反应和治疗效果.结果 5年间,属结核分枝杆菌复合群的疑似MDR-TB患者中,284例MDR-TB患者(7例为治疗期间重做药敏,实际发现为277例患者)占32.1％(284/885),对一、二线药物全敏感者占21.4％0(133/620).对277例MDR-TB患者采用分类治疗管理的方法,其中在结防机构使用二线MDR-TB方案治疗者占45.9％(127/277),其中59.8％(76/127)的患者出现不良反应,已获得转归信息患者的治愈率为63.4％(59/93)；维持原方案治疗及转诊专科医院的比率分别为17.7％(49/277)和13.0％(36/277).结论 及时对发现的疑似MDR-TB患者进行一、二线抗结核药物药敏试验非常必要.北京市MDR-TB患者分类治疗管理的效果较为理想.
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新密市DOTS执行下耐多药结核病监测分析
目的 了解DOTS执行下河南省新密市耐药结核病流行状态.方法 根据《全国结核病耐药性基线调查实施手册》的患者纳入原则,自2007年3月1日至2010年2月28日在新密市连续纳入初、复治涂阳肺结核患者333例(每年分别为100例、135例和98例),其中初治涂阳患者295例,复治涂阳患者38例.按照《全国结核病耐药性基线调查质保证手册》的标准,对纳入患者的痰标本进行分离培养和菌型鉴定,剔除污染、未生长和非结核分枝杆菌的标本,共获得296株Mtb菌株用于抗结核药物敏感性试验(其中261株来自初治患者,35株来自复治患者),对收集的菌株进行4种一线抗结核药物(INH、RFP、EMB和S)的耐药监测.结果 3年涂阳肺结核患者总耐药率和耐多药率分别为28.57％(26/91)、30.43％ (35/115)、27.78％ (25/90)和5.49％(5/91)、7.83％(9/115)、4.44％(4/90).涂阳肺结核患者分离的86株耐药Mtb中仅耐1种药物(单耐)47株(15.88％,47/296),耐2种药物(双耐)20株(6.76％,20/296),耐3种药物(三耐)12株(4.05％,12/296),耐4种药物(全耐)7株(2.36％,7/296)；同时耐RFP和INH的耐多药菌株18株(6.08％,18/296).结论 新密市总体耐药水平低于全国平均水平,但3年的耐药水平基本保持一致,需实施更加有效的耐药结核病患者发现和治疗措施,以降低现有的耐药率.
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1819株非结核分枝杆菌行药物敏感性试验的结果分析
目的 对广州市1819株非结核分枝杆菌临床分离株行药物敏感度试验的结果进行回顾性分析,为临床第一线治疗非结核分枝杆菌病提供可靠的科学依据.方法 按照中国防痨协会制定的《结核病诊断实验室检验规程》,对2009-2011年来自广州市胸科医院门诊就诊和住院患者以及少部分院外单位在实验室中从痰液、支气管冲洗液、胸腹腔积液、尿液以及咽拭子等样品培养出的14 095株分枝杆菌进行菌型鉴定,对确认为NTM的实验菌株3264株,选择没有混合感染的株种1819株采用临床上常用的一、二线药物(包括INH RFP、S、EMB、Am、Clr、Lfx、Mfx、环丙沙星(CIP)、力克菲蒺、Rfb、Pto和Cm共计13种药物)进行敏感度试验.结果 非结核分枝杆菌对INH和力克菲蒺耐药率达96.15％(1749/1819)和95.41％(1248/1308);其他依次为S 76.25％(1387/1819)、Pto 73.94％ (817/1105)、Lfx 72.94％(954/1308)、RFP 72.51％ (1319/1819)、EMB 70.42％(1281/1819)、Mfx65.29％(854/1308)、CIP 60.13％(543/903)、Rfb 56.87％(236/415)和Cm50.50％(102/202);而Clr和Am对非结核分枝杆菌的敏感率为88.17％(1163/1319)和67.73％(892/1317).结论 非结核分枝杆菌对一线抗结核药物具有高度的原始耐受性,而大环内酯类的Clr和氨基糖甙类的Am则对非结核分枝杆菌有较强的抑菌效能,因而对实验室中分离出的非结核分枝杆菌有必要进行药物敏感度试验.
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结核性脑膜炎临床分离株表型耐药特点及其治疗效果研究
目的 研究分析结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的致病菌对抗结核药的耐药特点及抗结核药对致病菌的治疗效果.方法 500例疑似TBM患者脑脊液标本经MGIT(mycobacteria growth indicator tube)960液体培养出25株临床分离株,再用16S rRNA基因测序法进行菌种鉴定.继而对这25株结核分枝杆菌临床分离株分别进行14种抗结核药物的MGIT 960液体药敏试验和12种抗结核药物的传统比例法固体药敏试验、16种抗结核药物的低抑菌浓度(MIC)测定.通过计算血药浓度峰值(Cmax)/MIC值的大小来判断药物对菌株杀菌率的高低,并由此推断药物对该致病菌的治疗效果.结果 液体药敏试验结果和固体药敏试验结果均显示了任意耐药的TBM临床分离株有13株(13/25),耐多药的TBM临床分离株有3株(3/25);利福平、莫西沙星、左氧氟沙星、氯法齐明、对氨基水杨酸的Cmax/MIC值分别为19.880、63.333、19.149、75.000、50.855.结论 莫西沙星、氯法齐明、对氨基水杨酸、左氧氟沙星、利福平的Cmax/MIC值较高,提示临床上使用高剂量利福平和氟喹诺酮类药物联合治疗TBM可以提高疗效;对氨基水杨酸和氯法齐明对耐多药TBM临床分离株可能有较好效果.
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95例结核性脑膜炎患者脑脊液分枝杆菌药敏试验和外周血CD4+ T淋巴细胞计数结果分析
目的 回顾性分析结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)患者脑脊液分枝杆菌药敏试验与菌株鉴定结果,以及患者治疗初期外周血CD4+T淋巴细胞计数结果,期望为TBM临床早期有效治疗提供数据参考.方法 搜集重庆市公共卫生医疗救治中心结核性脑膜炎科2011年1月3日至2013年11月27日期间95例有脑脊液培养分枝杆菌药敏试验记录的TBM患者的临床资料,其中男52例,女43例;初治患者73例,复治患者21例(不含非结核分枝杆菌的患者1例);16例患者临床血液检测HIV抗体为阳性,统计脑脊液药敏试验(包括链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、氧氟沙星、阿米卡星、卷曲霉素、丙硫异烟胺、力克菲蒺、利福喷丁、对氨基水杨酸钠共11种药物)和菌株鉴定的结果,以及治疗初期外周血CD4+T淋巴细胞计数值,分析耐药特征,及影响耐药和CD4+T淋巴细胞计数值的相关因素,采用卡方检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 (1)脑脊液药敏试验与菌株鉴定结果:非结核分枝杆菌1例,占1.1％(1/95),且对11种抗结核药物均耐药;结核分枝杆菌复合群94例,占98.9％(94/95),其中40例对11种抗结核药物有不同程度的耐药,总耐药率为42.6％(40/94),其余54例均敏感.MDRTB占12.8％ (12/94);XDR-TB占1.1％(1/94).(2)耐药类型:单耐药者占9.6％(9/94);耐2种药物者占16.0％(15/94);耐3种药物者占2.1％(2/94);耐3种以上药物者占14.9％(14/94).(3)耐药顺位前6位排名:Sm[26.6％ (25/94)]＞INH[23.4％ (22/94)]＞RFP[18.1％ (17/94)]＞PAIN[16.0％ (15/94)]＞EMB与Rft[均为14.9％(14/94)].(4)11例TBM患者外周血CD4+T淋巴细胞计数在正常参考范围内,占11.7％(11/94);不同性别[男性90.2％(46/51)、女性86.0％(37/43)]、初治患者[90.4％(66/73)]或复治患者[81.0％(17/21)]对计数结果差异无统计学意义(x2值分别为7.76、7.44,P值均＞0.05);合并HIV抗体阳性的患者计数结果[100.0％(16/16)]显著低于HIV抗体阴性[85.9％(67/78)]的患者,差异有显著统计学意义(x2=34.21,P＜0.01).结论 94例TBM(不含非结核分枝杆菌感染的1例患者)初治与复治患者均呈高耐药趋势;外周血CD4+T淋巴细胞计数结果普遍偏低,特别是TBM合并HIV抗体阳性的患者.
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Mtb耐异烟肼基因变异株的体外小抑菌浓度研究
目的 研究Mtb耐INH临床分离株katG基因、inhA基因、ahpC基因突变对其体外小抑菌浓度(MIC)的影响.方法 对临床分离的耐INH的160株Mtb及对INH敏感的40株Mtb进行耐药基因芯片检测;并对所有标本进行INH MIC测定,比较不同变异株的MIC结果,其数据采用t检验进行比较,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 Mtb耐INH株katG315基因变异占68.8％(110/160),katG315基因变异株的MIC为(20.20±19.46 μg/ml),高于inhA变异株(0.73±0.82 μg/ml)(t'=10.9171,t1α=1.9807,P＜0.05)；低于katG315+inhA变异株(69.33±32.45 μg/ml),(t'=7.164,t1α=2.0627,P＜0.05).结论 Mtb耐INH基因有不同的突变模式,各模式存在不同的耐药程度,此可以给临床用药进一步提供参考.
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重组表达萤火虫荧光素酶结核分枝杆菌的构建及其用于低抑菌浓度测定的研究
目的 构建萤火虫荧光素酶(FFLuc)重组表达的结核分枝杆菌菌株,利用其建立抗结核药物低抑菌浓度(MIC)检测方法,并应用该方法测定目前主要的抗结核药物的MIC.方法 (1)以质粒pMV306hsp+FFLuc为模板,PCR扩增FFLuc基因.构建重组表达质粒pMV361+FFLuc,电转化至结核分枝杆菌标准株H37Rv中,应用小动物活体成像系统鉴定FFLuc表达.比较结核分枝杆菌与重组结核分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线.(2)检测不同浓度的异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、莫西沙星(Mfx)、链霉素(Sm)、左氧氟沙星(Lfx)、利奈唑胺(Lzd)作用不同时间的表达荧光量变化,考察在不同药物作用下FFLuc表达的稳定性,建立以FFLuc标记结核分枝杆菌为基础的测定抗结核药物MIC的方法并测定INH、RFP、EMB、Mfx、Sm、Lfx、Lzd等7种药物的MIC.结果 (1)pMV361+ FFLuc重组表达载体构建的稳定表达FFLuc的结核分枝杆菌菌株的菌量与荧光表达量(相对荧光强度)呈线性关系[x2=0.994,lg(y)=0.905×lg(x)+0.832].(2)应用新方法检测的7种药物的MIC与微孔培养显色(MABA)法MIC测定结果基本相同.第4天时荧光检测INH、RFP、Mfx、EMB、Sm、Lfx和Lzd的MIC值分别是0.05、0.05、0.09375、4、0.8、0.15、0.15μg/ml;与MABA法检测结果相比,结果在相差1～2倍MIC值的可接受范围内.结论 建立了FFLuc重组表达的结核分枝杆菌菌株检测抗结核药物MIC的方法与MABA法相比,所需时间更短,第4天即可检测结果.
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马西利亚分枝杆菌临床分离株的多位点序列鉴定和药物敏感性试验分析
目的 对单基因比对不能区分的马西利亚分枝杆菌(M.massiliense)临床分离株进行菌种鉴定,补充其药物敏感谱,为临床诊治提供依据.方法 2013年中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病室共收集了47例疑似非结核分枝杆菌(NTM)感染的临床样本,用对硝基苯甲酸、噻吩-2-羧酸肼培养基和多位点PCR方法区分鉴别得到的分枝杆菌,采用基因序列比对进行NTM菌种鉴定,其中未能准确鉴定菌种的6株临床分离株进一步通过多位点序列分析(MLSA)方法进行定种鉴定.采用微孔板阿尔玛蓝测定法(MABA)对马西利亚分枝杆菌菌株开展36种药物的药物敏感性试验(简称“药敏试验“).结果 47例临床样本中鉴定出34株NTM,其中6株临床分离株综合5个管家基因(16S rRNA、hsp65、rpoB、sodA和recA)的单基因比对结果仍不能鉴定菌种,因此本研究采用MLSA方法构建邻位相加法进化树确认6株均为马西利亚分枝杆菌.药敏试验结果显示M.massiliense对阿米卡星为敏感(16 μg/ml)或中度敏感(32 μg/m1),对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、环丙沙星、乙硫异烟胺、卷曲霉素、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、美罗培南、米诺环素12种药物耐药.结论 MLSA方法能有效鉴定马西利亚分枝杆菌;马西利亚分枝杆菌耐药程度较高.
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两种组合显色系统用于分枝杆菌快速药物敏感性试验的性能研究
目的 建立一种用于分枝杆菌快速药物敏感性试验(简称“药敏试验”)的3,3'-[1-(苯氨酰基)-3,4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠(XTT)/1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯(1-methoxy-PMS,mPMS)组合显色系统(简称“XTT/mPMS”),并加以评估.方法测试XTT分别与mPMS及2-甲基-1,4-萘醌(2-methyl-1,4-NQ,mNQ)两种中间电子受体的佳组合浓度、检测线性范围、反应时间、稳定性、细胞毒性、药物干扰作用等特性.以固体培养法作为金标准评估XTT/mPMS用于结核分枝杆菌临床分离株低抑菌浓度(MIC)的药敏试验性能,并与刃天青显色法结果比较.结果 XTT/mPMS和XTT/mNQ两种组合系统中,XTT和中间电子受体的优组合浓度分别是0.2 mmol/L和0.04 mmol/L.这两种组合系统中,对耻垢分枝杆菌的显色反应较对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌更为迅速(XTT/mPMS组合系统分别为60 min、420 min、420 min;XTT/mNQ组合系统分别为60 min、420 min、420 min).XTT/mPMS和XTT/mNQ对3种分枝杆菌均为低毒性,能延长其到达稳定期的时间(约滞后12～48 h).XTT/mPMS与7H9液体培养基在37℃恒温中共培养,以及长时间储存中均具有较高的稳定性(37℃共培养可维持8d,25℃条件下稳定性不低于15 d,4℃条件下稳定性不低于30 d).以固体培养法为金标准,XTT/mPMS用于结核分枝杆菌临床分离株的快速药敏试验(利福平、异烟肼)检测中,其特异度[分别为100.0％(17/17)和100.0％(13/13)]和敏感度[分别为95.7％(22/23)和92.6％(25/27)]与刃天青显色法[特异度分别为100.0％(17/17)和100.0％(13/13);敏感度分别为100.0％(23/23)和92.6％(25/27)]基本一致.结论 本实验室发现XTT/mPMS组合显色系统稳定、低毒、价格低廉,适合于对分枝杆菌进行快速药敏试验.
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青岛市五区(市)结核病耐药情况分析
目的 基于青岛市五区(市)结核病耐药性的流行现状和数据进行分析,为制定有针对性的化疗方案和耐药结核病控制策略提供科学依据.方法 对2012年1月至2013年12月期间青岛市五区(市)(黄岛区、平度市、即墨区、胶南市、胶州市)新登记的926例涂阳肺结核患者进行流行病学调查(简称“流调”),对患者痰标本进行分枝杆菌培养分离并进行比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”);排除基线信息缺失患者的菌株,共获得痰培养阳性患者临床分离株490株,剔除菌株污染等原因无法进行耐药分析的153株,对337株进行药敏试验,并将患者分为初治与复治两类进行统计分析.使用SPSS 20.0统计软件,基本情况采用描述性分析方法;计数资料采用x2检验或Fisher精确检验,检验水准α=0.05.结果 五区(市)总的耐药率为19.88％(67/337),单耐药率为11.87％(40/337),多耐药率为2.97％(10/337),耐多药率为5.04％(17/337);初治和复治患者多耐药率(2.19％,7/319;16.67％,3/18)和耐多药率(4.08％,13/319;22.22％,4/18)比较差异均有统计学意义(Fisher精确检验,P=0.012,0.009);337株结核分枝杆菌药敏试验中,一线抗结核药物耐药率顺序为耐H 41例(12.17％),耐R31例(9.20％)、耐Sm19例(5.64％)、耐E8例(2.37％).67例耐药患者中,共有11种耐药谱,构成比较高的为耐H(22.39％)、耐R(19.40％)和耐H+R(19.40％);其中初治患者中耐药率较高的为耐H(21.67％,13/60)、耐R(20.00％,12/60)、耐H+R(20.00％,12/60),复治患者中耐药率高的为耐H(28.57％,2/7).单耐利福平肺结核患者占19.40％(13/67),耐多药肺结核患者占25.37％(17/67).结论 青岛五区(市)近年的结核病防控工作取得了一定的成效,但耐多药结核病疫情仍然严峻.
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值
目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值.方法 从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性.以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验).结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果 为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4％ (106/110;95％CI:90.7％～98.9％)、80.0％(72/90;95％CI:70.5％～87.1％)和89.0％(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4％(123/144;95％CI:78.6％～90.7％)、96.4％(54/56;95％CI:87.7％～99.6％)和88.5％(177/200).探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74.结论 探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗.
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新疆维吾尔自治区喀什地区结核病耐药监测结果分析
目的掌握新疆维吾尔自治区喀什地区结核病患者耐药情况,为制定耐药结核病防治策略提供基础数据支持. 方法采取整群抽样方法收集新疆维吾尔自治区喀什地区8个县(市)2015年1月1日至12月31日期间新登记的涂阳患者1206例,其中经过菌种鉴定确定为结核分枝杆菌感染者共908例.采用比例法药物敏感性试验(简称"药敏试验"),分析908株菌株对利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(Sm)、卡那霉素(Km)、阿米卡星(Am)、氧氟沙星(Ofx)和卷曲霉素(Cm)的耐药率及耐药谱情况.结果喀什地区结核分枝杆菌的总耐药率、单耐药率、多耐药率、耐多药率分别是21.48%(195/908)、15.42%(140/908)、3.52%(32/908)、3.30%(30/908).总耐药率顺位前4位者分别为: INH(10.35%,94/908)、Sm(9.36%,85/908)、RFP(7.38%,67/908)和Ofx(3.19%,29/908).对908株菌株进行上述8种药物的药敏试验,结果共有24种耐药谱组合,其中单耐药有8种组合,单耐Sm构成比高为37.15%(52/140),其次是单耐INH,占31.43%(44/140);多耐药有7种组合,总多耐药组合构成比高的是INH+Sm 53.13%(17/32);耐多药有9种组合,前3位的组合是INH+RFP 40.00%(12/30)、INH+RFP+Sm 23.34%(7/30)、INH+RFP+Ofx 16.68%(5/30).结论 新疆维吾尔自治区喀什地区结核病患者总体耐药水平较高,需进一步加强结核病防治工作,提高结核病患者诊断、治疗和管理质量,减少复治患者的产生.
关键词： 分枝杆菌 结核 抗多种药物性 微生物敏感性试验 结果与过程评价(卫生保健)
