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苦参碱抑制人大肠癌SW480细胞环氧化酶-2的表达
目的 探讨苦参碱(MT)对人大肠癌SW480细胞环氧化酶(COX-2)表达的影响.方法 采用MTT法检测MT对SW480细胞的增殖抑制作用,采用实时荧光定量RT-PCR和Westem blotting等方法检测不同浓度(0.25～2.0 mg/mL)苦参碱对细胞COX-2表达的影响.结果 MT抑制SW480细胞增殖呈剂量和时间依赖性,其48 h IC50=0.516 mg/mL.倒置显微镜下以及细胞爬片HE染色可见实验组细胞出现典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,体积减小,胞浆凝聚,空泡化明显,形成"印戒"细胞.苦参碱可抑制SW480细胞的COX-2mRNA、蛋白表达水平.结论 MT在体外能抑制SW480细胞的增殖,其抑制作用具有明显的量效和时效关系.苦参碱具有抑制SW480细胞的COX-2基因转录、蛋白表达和功能活性等作用,在时间范围(8～72 h)内,表现出时效关系.
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siRNA沉默RAD18抑制结肠癌SW480细胞FANCD2蛋白泛素化并增强其对丝裂霉素C 的敏感性
目的:研究RAD18 特异性siRNA 对结肠癌SW480 细胞FANCD2 泛素化和对化疗药物丝裂霉素C 敏感性的影响.方法:RAD18 特异性siRNA 转染SW480 细胞后用丝裂霉素C 处理,通过Western blot 检测细胞RAD18 及FANCD2 泛素化的表达,MTT 法检测干扰RAD18 后细胞对丝裂霉素C 的敏感性.结果:RAD18 特异性siRNA 转染SW480 细胞96 h 后,RAD18 基因的表达明显降低,导致经丝裂霉素C 处理后FANCD2 泛素化表达明显降低;siRAD18 组细胞对丝裂霉素C 的敏感性显著增强.结论:抑制RAD18 蛋白表达能延缓结肠癌细胞FANCD2 泛素化表达,并增强SW480 细胞对丝裂霉素C 的敏感性.
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结肠癌组织中C／EBPα的表达及其对SW480细胞侵袭性的影响
目的：综合分析结肠癌组织中转录因子 CCAAT ／增强子结合蛋白-α（C／EBPα）的表达，并研究 C／EBPα的表达对结肠癌 SW480细胞系侵袭性的影响。方法选取2014年1月至2015年9月在该院确诊为结肠癌的36例患者临床资料，利用免疫组织化学法分析36例结肠癌患者的结肠癌组织和正常组织中的 C／EBPα表达情况。将结肠癌组中的 C／EBPα表达情况设为研究组，正常组织中的 C／EBPα表达情况设为对照组，每组均为18例。采用 SPSS17．0统计学软件进行统计学分析，分析 C／EBPα的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系。在此基础上，利用蛋白免疫印迹法（Western blot）发现 SW480细胞系为高表达C／EBPα肠癌细胞株；构建 pCDGFP-C／EBPα真核表达质粒，通过细胞划痕实验研究其迁移能力的变化，并检测与肿瘤侵袭相关蛋白（KLF5、MMP-2、MMP-9、ECD）表达量的相关性。结果免疫组织化学法的相关研究结果显示，在正常组织中，C／EBPα的低表达率为6．21％；在结肠癌组织中，C／EBPα的低表达率为67．84％，两组数据比较差异有统计学意义（P ＜0．05）。 Western blot 结果显示，低表达 C／EBPα的患者的肿瘤直径越大、TMN 分期越晚，过表达 C／EBPα的 SW480细胞的 KLF5、MMP-2、MM P-9表达越低，而 E 钙黏蛋白（ECD）表达越高。结论低表达 C／EBPα与结肠癌的 TMN 分期和转移有着密切关系，过表达 C／EBPα能够显著降低结肠 SW480癌细胞的侵袭性，对未来的研究方向有着重要的临床研究价值。
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细胞外信号调节激酶通路激活抑制δ氨基酮戊酸-光动力疗法对SW480细胞的细胞毒作用
目的:探讨δ氨基酮戊酸-光动力疗法(ALA-PDT)诱导SW480细胞后的细胞外信号调节激酶(ERK)通路以及阻断此通路对细胞毒作用的影响.方法:将SW480细胞分为空白对照组、激光照射组、ALA组、ALA-PDT组(又分为30、60、90min组)及PD98059组,Western蛋白印迹检测各组细胞MEK和ERK1/2蛋白产物及磷酸化蛋白产物的表达;用MTT比色法分别检测各组细胞在不同时间段的光密度值,计算各组细胞存活率.结果:ALA-PDT后SW480细胞的ERK通路激活;阻断ERK通路后ALA-PDT对SW480细胞的细胞毒作用增强.结论:ERK通路的激活对ALA-PDT后SW480细胞起着保护作用;不同水平阻断ERK通路,可能成为增强ALA-PDT杀伤结肠癌细胞的新靶点.
关键词： δ氨基酮戊酸 光动力疗法 SW480 细胞外信号调节激酶通路 -
RNA干扰缺氧诱导因子-1α对裸鼠结肠癌生长及转移的影响
目的 探讨靶向缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor 1, HIF-1)α的RNA干扰(RNA interference,RNAi)对裸鼠结肠癌生长及转移的影响.方法 利用结肠癌细胞株SW480对30只6周龄雌性裸鼠进行皮下种植,构建荷人瘤动物模型后按随机数字表法分为生理盐水组、阴性质粒组及干扰组,每组10只.分别注射生理盐水、阴性质粒及转染质粒,并绘制肿瘤生长曲线,观察各组间肿瘤生长及淋巴结转移的变化,采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α基因及蛋白表达的变化.结果 转染质粒导入裸鼠皮下移植瘤后15 d,干扰组肿瘤体积为(273.9±14.7)mm3,与生理盐水组(1 845.5±91.2)mm3和阴性质粒组(1 842.7±115.7)mm3相比较,体积明显减小(P<0.05);干扰组淋巴结转移率为40%(4/10),与生理盐水组(100%,10/10)及阴性质粒组(100%,10/10)相比明显降低(χ2=5.952,P=0.015);干扰组淋巴结阳性率为35.7%(5/14),与生理盐水组77.3%(17/22)及阴性质粒组65.2%(15/23)相比明显降低(χ2=6.420, P=0.040).干扰组肿瘤组织中HIF-1α mRNA和HIF-1α蛋白显著下调(P<0.05).结论 靶向HIF-1α的RNAi可以抑制裸鼠结肠癌的生长及淋巴结转移和裸鼠结肠癌组织内HIF-1α基因的表达,可能成为肿瘤基因治疗的一个靶点.
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化合物Awf体外抗肿瘤效应的初步研究
目的 通过测试某公司研制的配方保密药物,简称化合物Awf对直肠癌细胞( SW480)杀伤作用的体外实验.了解化合物Awf的作用机理.方法 将直肠癌细胞( SW480)从液氮箱中复苏培养,当长到70％ ～ 80％时,将细胞移入24孔培养板,等量分布,再加入倍比稀释度不同的化合物Awf,在48 h以后观察细胞的凋亡情况,并用台盼蓝拒染法计算死亡细胞情况.结果 化合物Awf对直肠癌细胞SW480有明显的杀伤作用.并且量效关系明显.结论 此化合物Awf有明显的体外抗直肠肿瘤活性,有潜在临床医学应用价值.
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重组人肿瘤坏死因子与阿霉素抗人结肠癌细胞株(SW480)的序贯作用研究
目的评价rHuTNF和阿霉素抗人结肠癌细胞株的序贯作用.方法采用克隆生成试验(Hamburger Salmon法).研究rHuTNF和DOX序贯作用于SW480细胞株后的抗增殖效果.结果对结肠癌细胞系SW480,存在DOX至rHuTNF序贯抗增殖作用;除反序贯给药情况外,出现显著的协同作用.结论在DOX存在情况下,TNF的抗瘤作用增强,从而支持DOX可干扰细胞保护机制以使瘤细胞对TNF细胞毒作用更为敏感的理论.
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膜相关蛋白Numb在结肠癌中的表达和意义
目的 探讨膜相关蛋白Numb在结肠癌组织中的表达和生物学意义.方法 对63例结肠癌和20例正常结肠组织的组合组织芯片进行常规免疫组化染色,检测Numb蛋白的表达,结合临床病理资料进行分析.采用免疫荧光染色和Westen blot检测结肠癌SW480、SW620细胞系中Numb的表达.结果 低分化的结肠癌组织较正常结肠组织和中、高分化的结肠癌组织胞浆中Numb的表达阳性率下降(P＜0.05),Numb表达强度与结肠癌分化程度相关.Westen blot结果显示,结肠癌细胞系中Numb的表达强度,SW480较SW620细胞系高(P＜0.05).激光共聚焦免疫荧光染色观察,Numb呈点状分布于胞质和包膜,SW480较SW620细胞系在胞浆中分布更密集.结论 Numb可能在肿瘤进展过程中起保护作用,对肿瘤的发生发展有重要调控.
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阿司匹林对人结肠癌细胞中肿瘤干细胞标记物Lgr 5表达的影响
目的 探讨阿司匹林预防结直肠癌发生的可能机制.方法 Western blot检测不同浓度阿司匹林作用下Lgr 5蛋白在COX-2高表达的HT- 29细胞及COX-2阴性表达的SW480细胞中的表达情况.结果 Western blot结果表明阿司匹林能抑制结肠癌细胞株HT- 29和SW480中Lgr 5蛋白的表达,并具有良好的量-效关系(P＜0.05)；两种细胞中Lgr 5蛋白的表达均无显著性差异(P＞0.05).结论 阿司匹林能抑制肿瘤干细胞标志物Lgr 5的表达,从而达到预防结直肠癌的目的,其机制可能涉及到COX-2途径和非COX-2途径,且以非COX-2途径为主.
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缺氧诱导对人结肠癌SW480细胞增殖和缺氧诱导因子-1α、血红素氧合酶-1基因表达的影响
目的:构建缺氧诱导模型和观察缺氧对人结肠癌SW480细胞系生长和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α),血红素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)表达的影响.方法:利用氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)构建缺氧诱导模型,以MTT试验观察不同程度缺氧条件对SW480细胞生长曲线的影响;利用RT-PCR方法测定氯化钴缺氧诱导与SW480细胞HIF-1α和HO-1基因mRNA表达的时效和量效关系.结果:适度缺氧(CoCl2浓度＜200 μmol/L)可刺激肿瘤细胞增殖,过度缺氧(CoCl2浓度＞250 μmol/L)则抑制其生长;HIF-1α、HO-1基因mRNA表达与氯化钴缺氧呈明显的量效关系和时效关系;HIF-1α与HO-1基因mRNA的表达在缺氧诱导量效关系(相关系数r=0.786,P＜0.05)和时效关系(相关系数r=0.863,P＜0.05)中均存在显著的正相关性.结论:缺氧可以刺激SW480细胞增殖;HIF-1α和HO-1基因的表达与肿瘤缺氧程度密切相关;HO-1的适量表达对缺氧细胞具有细胞保护作用,其过度表达可能导致细胞损伤和凋亡.
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槲皮素对结肠癌细胞SW480增殖、细胞周期和cyclin B1蛋白表达的影响
背景与目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡、细胞周期及CyclinB1蛋白表达的影响,并探讨其抗肿瘤机制.材料与方法:以10、20、40、60、80、160 μmol/L的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法、流式细胞技术、Western blot方法分析槲皮素对细胞增殖、凋亡、细胞周期及cyclin B1蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,20μmol/L槲皮素可促进SW480细胞增殖(P＜0.05),但40、80、160μmol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖(P＜0.01),抑制作用呈剂量和时间依赖性.20、40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48 h,G0/G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞显著增多(P＜0.01).80μmol/L的槲皮素作用48 h后细胞凋亡率(13.32±4.62)%,较对照组(2.68±1.04)%显著升高(P＜0.01);40、60、80μmol/L的槲皮素作用SW480细胞48 h后,cyclin B1蛋白表达降低(P＜0.05).结论:槲皮素对结肠癌细胞SW480的增殖有一定的调节作用,低浓度可促进其增殖,而高浓度则可抑制其增殖,其抑制作用机制可能与影响细胞周期分布、诱导细胞调亡、调节cyclin B1蛋白表达有关.
