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RGDS四肽对人结肠癌细胞SW480凋亡的影响
探讨精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸(Arg-Gly-Asp-Ser RGDS)4肽诱导人结肠癌细胞SW480凋亡的作用.采用DAPI染色、DNA琼脂糖凝胶电泳以及流式细胞技术分析RGDS对人结肠癌细胞SW480凋亡的影响.结果表明,与对照组相比,RGDS处理细胞后,形态学观察显示DAPI染色的细胞核染色质凝聚、细胞溶解形成凋亡小体;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯状带(DNA ladder);流式细胞分析可见凋亡峰,凋亡率约是对照组的4.5倍.因此,RGDS具有诱导人结肠癌细胞SW480凋亡的作用.
关键词： 精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸 凋亡 SW480 -
白藜芦醇阻断转化生长因子-/Smad通路抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭转移实验研究
目的 探讨中药白藜芦醇对SW480细胞活力及侵袭转移力的影响.方法 将人结肠癌细胞系SW480用白藜芦醇处理48h,MTT法检测白藜芦醇对SW480细胞活力的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对SW480细胞周期的影响;Transwell穿膜试验检测白藜芦醇对SW480细胞侵袭转移能力的影响;western blot实验检测肿瘤细胞转移相关蛋白E-上皮型细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平;Western blot实验检测上游磷酸化Smad蛋白(p-Smad)的表达水平.结果 对照组及5、10、15、20、40μmol/L白藜芦醇组对SW480细胞活力的抑制率分别为0、(5.4±1.0)％、(22.5±3.3)％、(36.4±4.4)％、(62.2±6.1)％、(85.1±7.5)％,各组间细胞活力抑制率差异有统计学意义(P＜0.05).对照组及5、10、15、20、40μ mol/L白藜芦醇组对SW480细胞周期G2/M阻滞率分别为(2.3±0.3)％、(4.3±0.5)％、(8.9±1.2)％、(15.6±2.3)％、(22.7±2.7)％、(30.4±2.9)％,各组间G2/M阻滞率差异有统计学意义(P＜0.05).对照组及转化生长因子-β(TGF-β)组、TGF-β+5μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+ 10μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+ 15 μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+20μmol/L白藜芦醇组、TGF-β+40μmol/L白藜芦醇组穿过Transwell膜的SW480细胞数分别为(204.2±19.4)个、(453.5 ±41.6)个、(411.2±45.2)个、(315.7±32.7)个、(246.3 ±27.2)个、(197.8±23.5)个、(97.4± 11.2)个,各组间细胞数差异有统计学意义(＜0.05).白藜芦醇体外处理置于TGF-β培养体系中的SW480细胞后,E-cadherin表达水平显著上升,Vimentin及MMP-9表达水平显著下降(P＜0.05).白藜芦醇显著降低TGF-β诱导的SW480细胞Smad蛋白磷酸化水平.结论 白藜芦醇有良好的体外抗结肠癌的生物活性,更重要的是它能通过阻断TGF-β/Smad通路抑制结肠癌细胞的侵袭转移.
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MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应
目的 探讨miR-24在结肠癌中发挥的作用并研究其是否和多柔比星的体外治疗有关.方法 用RT-qPCR法检测miR-24在结肠癌患者血浆中及结肠癌细胞系中的表达水平.MTT法检测miR-24反义核酸对多柔比星杀伤结肠癌细胞能力的影响.利用生物信息学、定量PCR及Western blot法验证miR-24是否调节结肠癌细胞BIM的表达.运用JC-1染色、Annexin V染色及Western blot法研究miR-24反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路.结果 结肠癌患者血浆及结肠癌细胞系中miR-24表达水平显著升高.miR-24反义核酸可显著增强多柔比星对SW480细胞的杀伤活性.定量PCR及Western blot实验表明miR-24的靶基因可能为BIM.miR-24反义核酸联合多柔比星可引起SW480细胞线粒体膜电位的丧失并诱导线粒体内Smac/DIABLO的释放,进而引起caspase-3的活化和凋亡的发生.转染BIM siRNA后miR-24反义核酸联合多柔比星对SW480细胞的凋亡诱导效应显著降低.结论 MiR-24反义核酸通过BIM-Smac/Diablo途径促进多柔比星对结肠癌细胞的凋亡诱导效应.
关键词： miR-24 BIM Smac/DIABLO SW480 多柔比星 -
具有相同遗传背景的人结肠癌细胞系生物学特性的鉴定
目的 对三种取自不同转移部位的结肠癌细胞系进行生物学特性的鉴定.方法 从体内成瘤性、原位移植后的自发性转移能力,以及体外生长、克隆形成率、粘附、运动、侵袭能力等方面,探讨具有相同遗传背景的SW480、SW620以及SW480/M5三种细胞系生物学特性的差异.结果 体内实验证明SW480具有多器官转移的潜能,SW620只具有淋巴结转移的能力,SW480/M5只具有肝脏转移的能力,SW480/M5的皮下瘤生长速度快,其次是SW620细胞;体外实验证明W48/M5和SW620的体外生长、克隆形成能力均强于SW480细胞,而两者对纤维黏连蛋白的粘附能力较SW480细胞弱,SW480/M5的运动及侵袭能力强于SW480及SW620细胞.结论 与SW480细胞相比,SW480/M5和SW620细胞具有一定的器官亲和力,三者的遗传背景一致,是研究结肠癌晚期演进的遗传改变的重要资源.
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皖南尖吻蝮蛇蛇毒中抗肿瘤活性蛋白分离纯化及其活体外性研究
目的:分离纯化皖南尖吻蝮蛇蛇毒(wan-nan Agkistrodon acutus venom)中抗肿瘤活性蛋白并研究其活性.方法:利用DEAE-sepharose Fast Flow和SP-sepharose Fast now阴阳离子交换层析以及Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离方法从皖南尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化得一种抗肿瘤活性蛋白,用CCK-8法检测该蛋白对体外培养的白血病K562细胞、结肠癌细胞(SW480)、胃癌细胞(SGC7901)、肝癌细胞(HeptG2)的增殖抑制作用.结果:分离纯化得一相对分子质量约23700的抗肿瘤活性组分(ATF1-c),CCK-8检测对体外培养的K562、SW480、SGC7901、HeptG2细胞的增殖抑制作用,呈剂量-时间依赖关系.结论:ATF1-c对体外培养的人癌细胞有明显的抑制和杀伤作用.
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灵芝多糖肽和小分子灵芝多糖肽抗肿瘤作用和免疫调节作用比较
目的 比较灵芝多糖肽(GLPP)和小分子灵芝多糖肽(GL-LPP3)离体抗肿瘤作用及对免疫调节作用.方法 以GLPP和GL LPP3作用于肿瘤细胞株(SW480、MCF-7、K562细胞),以5 Fu作对照,24、48 h后收集细胞,考察其对肿瘤细胞的抑制率.建立混合淋巴细胞培养体系,以环孢素A为对照,用MTT法测定24,48,72 h细胞活性,观察GLPP和GL-1PP3对免疫的调整作用. 结果 GLPP和GLLPP3对肿瘤细胞株SW480、MCF-7、K562存活率无抑制作用;GLPP和GL-LPP3可增强淋巴细胞免疫作用. 结论 GLPP和GL-LPP3体外不能直接抑制或杀伤肿瘤细胞,可增强T淋巴细胞免疫功能.
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细胞外基质蛋白SRPX2对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响
目的 检测细胞外基质(ECM)SRPX2蛋白在结肠癌组织中的表达,观察上调SRPX2表达对结肠癌SW480细胞的影响.方法 采用免疫组织化学方法在结肠癌组织芯片中检测SRPX2的表达;采用pCDNA 3.1-SRPX2质粒转染SW480细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72 hSW480细胞的增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测转染后SW480细胞的侵袭、迁移能力.结果 免疫组织化学检测结果示SRPX2在结肠癌中表达较癌旁组织明显增强(P＜0.01);MTT检测示48 h及72 h SRPX2转染组细胞增殖水平明显增加(P＜0.05);Transwell法检测,SRPX2转染组结肠癌细胞迁移及侵袭能力明显增强(P＜0.01).结论 SRPX2在结肠癌组织中表达增强,并可增强结肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,可能起到促癌作用.
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槐耳颗粒在体外对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响
目的：观察槐耳颗粒在体外对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响，并初步探讨其机制。方法 SubG1法确定槐耳颗粒促进结肠癌SW480细胞凋亡的佳作用浓度和时间，通过划痕愈合实验和Transwell侵袭实验观察槐耳颗粒对结肠癌SW480细胞侵袭转移的影响。 Western blot法和 Real-Time PCR (荧光定量 PCR )法检测 E-cadherin、twist、snail、vimentin在蛋白和mRNA水平的变化。结果槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后凋亡明显。槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后，划痕愈合实验相对迁移率为(31.36±2.39)%，而对照组36 h后相对迁移率则为(61.11±1.09)%(P<0.01)。 Transwell侵袭实验证实槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后每个视野穿透细胞数为(129±12)个，而对照组为(354±20)个(P<0.01)。槐耳颗粒3.0 g·L-1处理SW480细胞36 h后E-cadherin 在蛋白和mRNA水平表达均升高，而twist、snail和vimentin表达均降低。结论槐耳颗粒在体外能够通过抑制上皮-间质转化有效抑制结肠癌SW480细胞的侵袭转移。
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低氧培养的SW480细胞中NDRG1和MMP-2的表达
目的 观察低氧对结肠癌SW480细胞中NDRG1、MMP-2蛋白表达的影响.方法 分别在常规(常氧组)和低氧(低氧组)条件下培养结肠腺癌SW480细胞.运用免疫细胞化学染色法检测2组NDRG1蛋白表达,并用图像分析仪测光密度值(OD值);ELISA法检测MMP-2表达.结果 低氧组细胞NDRG1呈强阳性表达,而常氧组表达较弱,低氧组细胞NDRG1蛋白表达水平(0.1634±0.0079)显著高于常氧组(0.1358±0.0027)(P＜0.05);MMP-2表达也显著高于常氧组(P＜0.01).结论 低氧诱导了SW480细胞NDRG1、MMP-2表达上调.
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结肠癌SW480细胞冻存与复苏方法的改进
目的：探索一种程序简洁、易于操作的细胞株冻存与复苏的方法。方法采用常规方法体外培养肠癌细胞株SW480，胰酶消化后，收集细胞悬液，A组细胞采用传统冻存与复苏方法，B组采用改良的冻存与复苏方法，分别于2周、3个月、6个月后立即复苏冻存细胞进行培养，观察细胞的存活情况，并于1周内不同时间点用MTT法检测细胞增殖情况并进行比较。结果采用改良方法冻存与复苏的SW480细胞存活率及生长曲线与传统方法比较无显著差异，细胞贴壁率、形态学特点及增殖能力无明显变化。结论改良的细胞冻存体系以及快速复苏法是细胞株冻存与复苏的一种可行方法，且更加方便快捷。
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姜黄素调控Notch1信号通路诱导结肠癌SW480细胞株凋亡
目的 从Notch1信号通路探讨姜黄素诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的分子机制.方法 (1)利用流式细胞技术检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60 μmol/L)处理结肠癌SW480株24 h和48 h后的细胞凋亡情况.(2)通过RT-PCR检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60μmol/L)处理结肠癌SW480细胞株24h和48 h后,Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1 mRNA表达情况,观察姜黄素对Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因mRNA表达的影响.结果 (1)姜黄素能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡;(2)姜黄素能一定程度上下调Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因mRNA的表达(P＜0.05).结论 姜黄素能一定程度上诱导结肠癌SW480细胞株凋亡,这种对结肠癌SW480细胞毒性作用可能与调控Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1转录有关.
关键词： 姜黄素 Notch1信号通路 结肠癌 SW480 细胞凋亡 -
黄连素调控GRP78诱导结肠癌细胞凋亡的研究
目的:考察黄连素是否通过调节GRP78表达而促进SW480细胞凋亡.方法:MTT法检测不同浓度黄连素对结肠癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞GRP78、Bcl-2、Bax、GRP94的表达.结果:与对照组比较,不同浓度黄连素可呈浓度依赖性抑制SW480和HT-29细胞的增殖,其对SW480细胞的作用较强.黄连素可促进SW480细胞凋亡,抑制其GRP78表达,使Bax表达上调,Bcl-2表达下调.BiX激活GRP78表达后,受黄连素作用的SW480细胞凋亡率降低,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,但不同处理组GRP94表达均无显著变化.结论:黄连素可通过下调GRP78的表达来促进SW480细胞凋亡.
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RNA干扰转录因子激活蛋白4基因表达对结肠癌细胞株SW480的影响
目的 观察转录因子激活蛋白4(AP-4)基因对结肠癌细胞株SW480生物学行为的影响.方法 设计合成针对AP-4基因外显子7的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,用脂质体转染SW480细胞,通过RT-PCR技术、Western印迹、四甲基偶氮唑盐实验(MTT法)、流式细胞仪和Transwe ll体外侵袭实验等检测该siRNA对SW480细胞基因表达、细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡能力和浸润转移能力等生物学行为的影响.结果 AP-4 siRNA转染SW480细胞96 h后,其AP-4 mRNA水平下降了58%,培养液上清AP-4蛋白浓度下降了75%(P＜0.01).细胞增殖受到明显抑制,抑制率达61%～78%;流式细胞仪检测结果显示,AP-4 siRNA组SW480细胞凋亡率为(21.70±2.51)%,显著高于阴性对照组的(2.31±0.14)%(P＜0.01),G0-G1期细胞比例增加(P＜0.01),G2-M期细胞减少(P＜0.05);Transwe ll体外侵袭实验显示,AP-4 siRNA能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P＜0.01).结论 应用siRNA技术沉默AP-4基因能有效抑制SW-480细胞AP-4的表达,进而抑制细胞的生长、增殖及诱导细胞的凋亡,为以AP-4为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段.
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硫利达嗪诱导SW480细胞凋亡的机制
目的：研究硫利达嗪对结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响。方法应用5~30μmol/L硫利达嗪处理SW480细胞，MTT法检测细胞增殖抑制率；Hoechst33342细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期；RT-qPCR分析PDCD4、c-MYC、BCL2、CCND1、CASPASE3、PARP1、CDK4、EIF4A基因表达水平；Western blotting检测AKT、p-AKT、PDCD4蛋白表达水平。结果 MTT结果表明硫利达嗪抑制SW480细胞的增殖，硫利达嗪处理细胞后出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征；流式检测表明硫利达嗪诱导G0/G1期阻滞，细胞凋亡增加。RT-PCR结果表明硫利达嗪处理细胞后PDCD4表达上调，CCND1、CDK4、c-MYC、BCL2、CASPASE3、PARP1和EIF4A表达下调。免疫印迹分析结果显示PDCD4蛋白表达上调，p-AKT蛋白表达下调。结论硫利达嗪能够抑制人结肠癌SW480细胞的增殖，并诱导其凋亡，其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路导致PDCD4表达水平升高有关。
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穗花杉双黄酮通过影响caspase-3和β-catenin表达诱导结肠癌细胞SW480凋亡
目的：观察穗花杉双黄酮对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的影响，初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。方法 MTT细胞增殖试验检测穗花杉双黄酮对SW480细胞活力的影响，流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用，Western blot法检测穗花杉双黄酮作用细胞后caspase-3、β-catenin蛋白的表达。结果穗花杉双黄酮对SW480细胞生长有抑制作用，具有剂量依赖性。150μmol/L穗花杉双黄酮明显促进其凋亡，凋亡率显著高于对照组（P<0.01）。Western bolt结果表明，穗花杉双黄酮干预可以使caspase-3表达明显增强，β-catenin表达明显减弱。结论穗花杉双黄酮可诱导人结肠癌细胞SW480凋亡，并影响凋亡相关因子caspase-3、β-catenin的表达，从而达到抗肿瘤作用。
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硫化氢对人结肠癌细胞增殖和迁移的影响
目的：研究H2S对人结肠癌SW480细胞增殖和迁移的作用，及其调控的分子机制。方法用不同浓度H2S处理结肠癌SW480后，采用MTT法检测结肠癌SW480细胞增殖能力的改变，细胞划痕实验观察SW480细胞迁移能力的改变，Western blot实验检测MMP-2、MMP-9和SIRT1表达水平的改变。结果MTT实验，24、48、72 h 3个时间组50、100、200、400μmol/L H2S处理后，与相应时间对照组相比，H2S均能促进细胞的增值；细胞迁移实验结果显示NaHS（100μmol/l）处理组迁移能力增强且明显高于正常对照组（P<0.01），Western blot结果显示NaHS（100μmol/l）处理组MMP-2和MMP-9的表达水平增强且明显高于正常对照组（P<0.05，0.01），且NaHS（100μmol/l）处理组SIRT1表达水平增强。结论H2S能够促进人结肠癌SW480细胞的增殖和迁移，其机制可能与上调SIRT1的表达有关。
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具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定
目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.
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人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620及SW480的差异蛋白质组分析
目的分析比较人大肠癌不同转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选并探讨肿瘤转移相关蛋白与大肠癌发生发展转移的关系.方法利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解析离子化-飞行时间-质谱技术,分析高低转移性细胞株SW620和SW480蛋白质图谱的差异表达,查询数据库筛选大肠癌转移相关蛋白质.结果MalenieⅢ软件分析3次相同条件下的2-DE图谱,结果显示重复性、匹配性较好.SW620检测到(1316±62)个蛋白点,平均匹配率82%;SW480检测到(1332±74)个蛋白点,平均匹配率80%;蛋白点分布以PI 4～7、相对分子质量20 000～70 000范围内多.两种细胞株25个差异蛋白点(SW620 14个、SW480 11个)胰酶胶内酶解、质谱分析获得23张肽质量指纹谱;数据库查询结果高度匹配已知蛋白质3个,初步匹配已知蛋白质或片段14个.在这些差异表达的蛋白质中,部分与基因转录、细胞周期、信号转导、细胞凋亡有关,可能参与大肠癌的分化、增殖、侵袭、黏附和转移等多种生物学行为.结论人大肠癌不同转移潜能细胞株SW620和SW480的2-DE蛋白质图谱具有明显的差异表达,提示大肠癌转移过程的发生是多种蛋白质功能共同作用的结果.
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Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒对SW480结肠癌细胞株生长与侵袭的影响
[目的]探讨Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒对结肠癌细胞株SW480生长、迁移与侵袭的抑制作用.[方法]应用我们已构建的Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒转染SW480细胞,检测CXCR4 RNA干扰对CXCR4 RNA和蛋白的抑制作用,MTS法检测能否抑制细胞增殖,Transwell小室评价对细胞迁移和侵袭的影响.[结果]重组Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒转染SW480细胞可见绿色荧光.SW480、阴性对照组及Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒组CXCR4 RNA表达水平分别为0.54±0.06、1.00±0.03和0.11±0.04(P=0.001);CXCR4蛋白相对表达量分别为0.60±0.03、0.72±0.03和0.18±0.02(P＜0.001);MTS OD值分别为1.38±0.04(P=0.005)、1.28±0.05(P=0.026)和0.92±0.06;迁移实验细胞数分别为32.0±6.8、32.6±1.7和0.75±0.71 (P＜0.001);侵袭实验细胞数分别为29.1±10.3、30.4±6.1和0.63±0.74(P＜0.001).[结论]重组Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒可高效抑制SW480细胞CXCR4 RNA和蛋白表达水平,遏制细胞增殖,降低肿瘤细胞迁移和侵袭能力.
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氧化槐果碱对人结肠腺癌细胞增殖及凋亡的影响
目的：观察氧化槐果碱（OSC）对人结肠腺癌细胞株 SW480的增殖抑制及诱导凋亡的作用，探讨其作用机制。方法体外培养 SW480细胞，使用 OSC（作用浓度分别为0.5～2 mg／mL）和阳性对照药5－氟尿嘧啶（作用浓度10μg／mL）作用于细胞12～48 h；采用 MTT 法测定 SW480细胞增殖情况，荧光双染观察细胞形态变化，计数凋亡细胞所占比例，流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率，Real －time PCR 检测凋亡基因 Caspase －3和 Bcl －2的表达。结果MTT 结果显示，各浓度 OSC 对体外培养的 SW480细胞增殖具有明显抑制作用，该作用呈一定的时间和剂量依赖性；OSC 作用后细胞的体积变小变圆，核变形、皱缩，凋亡细胞所占比例显著增加；流式细胞仪分析结果表明，随着 OSC 作用时间的延长，G0／G1期细胞比例增加，同时 S 期细胞比例也相应增加；凋亡基因 Caspase －3 mRNA 表达上调，Bcl －2 mRNA 表达下调。结论OSC 可抑制体外培养的 SW480细胞生长增殖，其作用机制与阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡有关。
