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人参皂甙Rg1对大鼠室管膜前下区神经干细胞的保护作用研究
目的:探讨人参皂甙Rg1对大鼠室管膜前下区神经干细胞(SVZa NSCs)的保护作用及其与STAT3关系.方法:采用体外细胞培养法对胚胎大鼠SVZa NSCs分离、培养,建立SVZa NSCs谷氨酸中毒模型,相差显微镜下观察细胞形态变化,用台盼蓝排斥试验和MTT试验检测存活率,用TUNEL试验检测凋亡率;用免疫细胞化学法检测STAT3阳性细胞百分比表达.结果:人参皂甙Rg1能够明显提高谷氨酸损伤SVZa NSCs的存活率;可以提高损伤细胞STAT3阳性细胞百分比的表达.结论:人参皂甙Rg1对谷氨酸兴奋性中毒的SVZa NSCs有保护作用,其作用机制可能与增加STAT3表达有关.
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DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达
目的 讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用.方法 运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式. 结果从空间上看,Id2在RMS表达始终高,SVZa次之,在OB表达弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱. 结论 Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用.
关键词： DNA结合抑制因子2 室管膜前下区 神经干细胞 发育 逆转录-聚合酶链式反应 免疫印迹法 免疫组织化学 大鼠 -
Wnt-1对室管膜前下区神经干细胞体外分化的影响
目的探讨室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞体外分化过程中,Nestin和Wnt-1表达的变化,以及Wnt-1对SVZa神经干细胞体外分化的影响.方法以免疫荧光染色方法观察在SVZa神经干细胞体外分化过程中,Nestin和Wnt-1在不同时间点的表达水平,同时以基因转染方法增强SVZa神经干细胞Wnt-1表达,观察Nestin、Wnt-1和Mash-1的表达以及神经元分化比例的改变.结果 (1)Nestin主要表达于SVZa神经干细胞分化的早期阶段,随着细胞的分化和成熟,Nestin的表达迅速减弱.(2)SVZa神经干细胞贴壁分化2h即有Wnt-1表达,其表达高峰在细胞分化开始后12h,以后随着细胞分化的进行而迅速降低.(3)SVZa神经干细胞转染Wnt-1基因后,Nestin的表达减弱,Mash-1的表达增强,神经元的分化比例增高,Mash-1的增强与神经元分化之间有很高的一致性.结论 (1)Wnt-1表达于SVZa神经干细胞分化过程之中,在细胞分化成熟后则不表达,Wnt-1可能参与调节SVZa神经干细胞的体外分化,并可作为神经干细胞处于分化状态的标志.(2)SVZa神经干细胞转染Wnt-1后表达Mash-1增强,并更多分化为神经元,Wnt-1可能通过Mash-1途径促使SVZa神经干细胞向神经元方向分化.
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室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中骨形成蛋白2及DLX5的作用
背景:目前神经干细胞应用的大障碍还在于分化的调控,而对干细胞分化调控机制尚知之甚少.室管膜前下区是目前公认的神经干细胞富集区之一.在此区的神经干细胞可以长距离迁移到嗅球而保持神经干细胞不分化,后在嗅球分化为中间神经元.骨形成蛋白2及DLX5在室管膜前下区神经干细胞向嗅球迁移分化过程中起着重要作用.目的:研究室管膜前下区神经干细胞的构筑及迁移特点,以及目前国内外有关骨形成蛋白2及DLX5在此区神经干细胞迁移分化中的作用,希望对神经干细胞的分化调控机制有一定的认识.方法:由第一作者利用中文检索词"神经干细胞,室管膜前下区,骨形成蛋白2,DLX5"及英文检索词"neural stem cells,SVZa,BMP-2,DLX5",在PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)、中国期刊全文数据库(www.cnki.net/index.htm)、万方数据库(http://www.wanfangdata.com.cn)中检索1997-01/2009-01关于骨形成蛋白2、DLX5在室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中作用的文献.排除内容陈旧或重复文献.结果与结论:初检得到121篇文献,中文86篇,英文35篇.后对符合标准的28篇文献作进一步的分析.结果提示,室管膜前下区神经干细胞具有其独特细胞构筑和长距离迁移的特点,骨形成蛋白2及DLX5在其迁移分化过程中起着重要作用,但其具体作用机制仍不清楚.
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Mash1在室管膜前下区神经干细胞向神经元分化中的作用
目的研究Mash1在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用.方法体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,原位杂交检测Mash1在SVZa神经干细胞的表达;构建Mash1与绿色荧光蛋白(GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP活体荧光标记SVZa神经干细胞;采用细胞计数和流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例. 结果体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞Mash1原位杂交检测阳性;Mash1-GFP+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;Mash1-GFP-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组.结论体外培养的新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞表达Mash1;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化.
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重组质粒pEGFP-mDlX5的构建及其在SVZa神经干细胞中的表达研究
目的构建真核表达重组质粒pEGFP-mD1x5,并了解它在室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)中的mRNA及融合蛋白表达情况.方法运用DNA重组技术自原核表达载体上将小鼠来源的mD1x5基因克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)载体上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用电穿孔的方法转染SVZaNSCs,荧光显微镜下动态观察荧光变化情况;培养24h后提取转染细胞的总RNA及总蛋白,通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)了解其mRNA表达情况,用Western blot检测其蛋白表达情况.结果重组质粒通过双酶切产生了0.78kb目的插入片段及4.68kb载体片段;测序后证实0.78kb片段碱基序列与mDlx5基因完全同源;重组质粒转染SVZaNSCs 8 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后逐渐增多,24～48 h达高峰,且稳定表达较长时间;24 h后通过RT-PCR检测到mRNA表达,Westernblot检测到58 kD目的蛋白表达.结论新构建的真核表达重组质粒pEGFP-mDlx5通过鉴定,结构正确;转染到SVZaNSCs后能在其中表达、发挥功能,为后续研究奠定了基础.
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BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响
目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.
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Mash1在室管膜前下区神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用
目的 研究Mash1在室管膜前下区(anterior subventricular zone, SVZa)神经干细胞向γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)能神经元分化中的作用.方法 体外分离培养新生0 d昆明小鼠的SVZa神经干细胞,构建Mash1与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)正义、反义融合蛋白表达质粒,转染SVZa神经干细胞,GFP 活体荧光标记SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Mash1作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例和分化为GABA能神经元的比例.结果 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒双酶切鉴定构建成功,核转染结果表明:GFP融合蛋白表达阳性;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显低于空白对照组;pEGFP-Mash1+组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显高于空白对照组(P＜0.05);pEGFP-Mash1-组SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例明显低于空白对照组(P＜0.05).结论 pEGFP-Mash1-质粒、pEGFP-Mash1+质粒构建成功;Mash1可以促进SVZa神经干细胞向神经元方向分化,而且主要表现为促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化.
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高密度Oligo芯片筛选小鼠嗅球发育中DLX2相关基因
目的 筛选小鼠嗅球发育中调控同源盒转录因子2(DLX2)的相关基因,探讨室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制.方法 利用16 844点的高密度Oligo芯片检测发育期嗅球的基因表达情况,采用基因神经网络分析,筛选与DLX2相关的基因.结果 从2 398个在4个时间点都表达的基因中筛选出623个差异基因,在相关系数设定为0.95水平上,共筛选出29个与DLX2相关的基因.29个基因中,已知功能的基因有13个,主要与代谢、凋亡、发育及信号传导功能相关,未知功能的基因有16个.结论 在嗅球中可能有29个基因参与了DLX2的表达调控,对它们进一步的研究将有助于理解室管膜前下区神经干细胞在嗅球中向多巴胺神经元分化的机制.
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室管膜前下区NSC向神经元分化相关因素的作用
NSC (neural stem cells,NSCs)是来源于神经组织的具有增值分化成其他神经组织细胞具有干细胞特性的一类细胞[1].室管膜前下区(SVZa)是NSC集聚地,此区NSC产生的神经元祖细胞沿着一非常局限化的通道—吻侧迁移流(RMS)迁移至嗅脑,后在嗅球分化成特定的γ-氨基丁酸能(GABA)神经元和多巴胺(DA)能神经元[2-3].
