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大黄素通过激活PPAR δ促进胰高血糖素样肽1分泌的研究
目的 探讨中药活性成分大黄素对胰高血糖素样肽1(GLP-1)的分泌的影响及机制.方法 ①以高糖培养基(DMEM)培养小鼠肠道肿瘤内分泌细胞株(STC-1)进行体外的实验研究,以ELISA法检测GLP-1含量,探索大黄素体外对STC-1分泌GLP-1的影响.②利用C57BL/6J小鼠进行体内实验研究,分析小鼠给予大黄素灌胃对口服葡萄糖负荷的小鼠分泌GLP-1及胰岛素的影响.结果大黄素可剂量依赖性地促进STC-1细胞株分泌GLP-1,PPARδ特异性阻断剂GSK0660可阻断大黄素的作用;大黄素灌胃可提高口服负荷葡萄糖小鼠血浆GLP-1的水平,但同样可被GSK0660所阻断.结论 体外和体内实验证实,大黄素可促进GLP-1分泌,该作用可能与激活代谢性核受体PPARδ亚型有关.
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局灶性脑缺血再灌注大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体亚型表达的改变
目的 观察局灶性脑缺血再灌注大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)各亚型(PPARα、PPARδ/β和PPARγ)表达的改变,并初步探讨PPAR改变的意义.方法 健康雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、治疗组.制作大鼠大脑中动脉阻塞2 h再灌注22 h模型(MCAO/R),治疗组于MCAO/R前1 h给予PPAR全激动剂苯扎贝特.分别采用3%氯化三苯四唑(2,3,5-triphenyhetrazolium,TTC)染色法观察脑梗死体积;Western blot法和免疫组织化学法观察PPAR各亚型蛋白表达和分布的变化.结果 与假手术组相比,脑缺血再灌注(1)引起梗死的平均体积为44.30%;(2)使脑组织PPAR各亚型表达均增加,分别增加了1.47、3.52和2.25倍,差别具有统计学意义(免疫组织化学检测t值分别为8.63、9.29和13.62,Western blot检测t值分别为8.16、9.24和6.43,均P=0.000);(3)PPAR各亚型免疫阳性细胞增加主要表现在缺血侧半暗带区域,而非缺血侧(对侧)表达没有明显改变.与模型组相比,苯扎贝特能够:(1)显著降低脑梗死体积,平均减少54.36%,差异具有统计学意义(t=7.69,P=0.000);(2)进一步增加PPAR各亚型表达,分别增加了95.45%、183.47%、224.61%,差异具有统计学意义(免疫组织化学检测t值分别为7.36、5.64和10.50,Western blot检测t值分别为13.02、17.52和13.64,均P=0.000);(3)不但使缺血侧PPAR免疫阳性细胞增加,而且使非缺血侧增加.结论 局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织PPARα、PPARδ/β和PPARγ表达增加,可能是脑组织的一种代偿性神经保护反应.
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有氧运动对C57BL/6小鼠骨骼肌PPARδ表达和肌纤维类型的影响
目的:研究有氧耐力运动对骨骼肌PPARδ的表达及由此对肌纤维类型的影响,探讨骨骼肌对耐力训练产生适应性反应的生物学机制.方法:本研究选用雄性C57BL/6小鼠90只,分别随机分为3周(TC)、6周(SC)、9周(NC)对照组和3周(TE)、6周(SE)、9周(NE)运动组,建立无负重游泳训练模型,采用Northern blot、Western blot,免疫荧光和mATPase染色分析各组骨骼肌PPARδ的表达及肌纤维类型的变化.结果:有氧运动各组骨骼肌PPARδ转录和翻译水平与各自对照组相比显著提高.mATPase染色结果表明各运动组运动后腓肠肌纤维类型百分比无显著改变.结论:有氧耐力运动可诱导骨骼肌PPARδ mRNA和蛋白表达增强,但并未导致骨骼肌纤维类型的显著变化,提示PPARδ可能在骨骼肌对运动训练的适应性过程中发挥重要作用,而单纯运动并不能诱导肌纤维类型转变的发生,其可能是细胞内代谢和外界干预因素共同作用的结果.
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PPARδ激动剂GW501516的合成研究
目的 研究PPARδ激动剂GW501516的合成方法.方法 以4-三氟甲基苯硫酰胺为原料间体氯甲基噻唑,再经"一勺烩"操作的Williamson反应,依次进行硫醚化与酚的醚化、水解共5步反应制得GW501516.结果与结论 合成GW501516的总收率为64.9%,其结构经1H-NMR和13C-NMR确证."一勺烩"操作中以K2CO3代替昂贵的Cs2CO3,降低了成本,简化了其他后处理操作.
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α-倒捻子素调节骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡
目的 研究α-倒捻子素对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 先分离培养人原代OA软骨细胞,分别给予5、10、20 μmol/L的α-倒捻子素处理后24、48、72 h运用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot法检测基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)、MMP-3、MMP-13、过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、PPARδ、过氧化物酶增殖激活受体γ共激活子-1α(peroxisome proliferator-activated receptorγ coactivator-1α,PGC-1α)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;ELISA法检测细胞培养上清中的Ⅱ型胶原蛋白(collagen-Ⅱ)、蛋白多糖(proteoglycans,PG)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-6含有量.结果 α-倒捻子素可显著促进细胞增殖,抑制细胞凋亡;显著促进Collagen-Ⅱ和PG的产生;显著抑制MMP-1、MMP-3、MMP-13的表达;显著促进PPARγ、PPARδ、PGC-1α的表达,抑制TNF-α的表达.此外,α-倒捻子素还可显著抑制IL-1β和IL-6的产生.结论 α-倒捻子素可通过增加PPARδ、PPARγ的表达,促进OA软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡和炎性反应,从而延缓关节软骨的破坏和退变.
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PPARδ的结构及其生物学功能与疾病
PPARδ是过氧化物酶体增殖激活受体PPAR的一个亚型,主要控制脂肪组织和骨骼肌细胞的脂类代谢和能量解偶联,并参与许多疾病的发生和发展过程.PPARδ作为治疗靶标,它的合成激动剂有望开发成为治疗皮肤损伤和代谢综合症的有效药物.
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过氧化物酶体增殖物激活受体δ+294T/C基因多态性与冠心病的关系
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)+294T/C基因多态性与冠心病的关系.方法 运用聚合酶链式反应及限制酶切片段长度多态性技术分析无血缘关系汉族人群[82例正常对照者(NC),120例冠心病(CHD)患者]的PPARδ+294T/C基因多态性,分析基因型频率、等位基因频率,并对不同基因型患者冠心病的危险性进行评价.结果 两组间基因型分布有显著性差异(P<0.05);CHD组TC+CC基因频率及C等位基因频率均明显高于NC组(P<0.05);C等位基因携带(TC+CC)者冠心病危险性高于TT基因型(C等位基因携带者OR:3.16,95%CI:1.39～7.14).结论 PPARδ+294T/C基因多态性与冠心病之间有重要的相关性,C等位基因携带可能是冠心病的一个的危险因素.
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过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(PPARδ)在大肠癌中的表达及其意义--附80例临床分析
目的通过研究PPARδ在不同类型大肠癌中的表达差异,明确PPARδ的表达与大肠癌病理学特征的关系.方法选取2002年5～11月该院普外科收治手术的大肠癌病例80例,以同期普外科收治的行PPH术病例的正常直肠黏膜为对照,对它们的冰冻病理切片作免疫组织化学染色后用IMS DNA/彩色图像分析系统作图形分析,以阳性细胞面积占视野面积的百分比来表示PPARδ表达的阳性率.结果入选大肠癌病例和正常对照组相比,年龄、性别无统计学差异:PPARδ在细胞内的定位主要位于细胞核内,呈现棕黄色.正常大肠组织中的阳性细胞较少,大肠癌组织中的阳性细胞主要是增生或恶变的大肠腺细胞;正常大肠组织和大肠癌组织的PPARδ表达阳性率分别为(5.35±3.42)%和(30.55±8.81)%(P＜0.01),具有极显著的统计学差异;在大肠癌标本中:肿瘤的分化程度、肿瘤的侵犯深度和肿瘤的Dukes分期与PPARδ的表达阳性率有关(P＜0.05).病理组织类型、淋巴结转移情况和肝转移情况与PPARδ的表达无关(P＞0.05).结论 PPARδ的表达与大肠癌的分化程度、浸润深度和Dukes分期有关,与大肠癌的病理组织类型、淋巴结转移情况和肝转移情况无关.
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不同葡萄糖浓度对INS-1细胞PPARδ表达的影响
目的 研究不同葡萄糖浓度对大鼠INS-1 细胞PPARδ表达的影响,以初步阐明PPARδ在胰岛细胞糖脂代谢关联中的作用.方法 分别用含3、11、20 mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基,培养INS-1细胞24 h后,冻融法裂解细胞,检测INS-1细胞内的甘油三酯水平.提取RNA和核蛋白,RT-PCR半定量检测PPARδ mRNA,Western blot 检测PPARδ蛋白表达.结果 随着葡萄糖浓度的升高INS-1细胞内甘油三酯含量增高,而PPARδ mRNA和蛋白的表达均明显降低.结论 葡萄糖促进,INS-1细胞内甘油三酯沉积,而PPARδ的表达下降可能是高糖条件下胰岛细胞脂质沉积的重要原因.
关键词： PPARδ INS-1细胞 RT-PCR Western blot -
小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达
目的 构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisome proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体.方法 通过Kpn Ⅰ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pme Ⅰ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌BJ5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒.pAd-mPPARδ经Pac Ⅰ线性化后用LipofectamineTM 2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液.将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和Western blot检测PPARδ蛋白的表达.结果 成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010 pfu/ml.重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加.结论 该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础.
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过氧化物酶体增殖物激活型受体δ的研究进展
过氧化物酶体增殖物激活型受体(PPARs)是核受体超家族成员,在哺乳动物中存在3种亚型,即PPARα、PPARγ和PPARδ.PPARδ组织分布广泛,参与脂肪组织和肌肉中脂肪酸氧化和能量解耦联,抑制巨噬细胞诱导的炎症.许多研究证明,激活组织中的PPARδ可以控制体重增加,增强身体耐力,提高胰岛素敏感性,改善动脉粥样硬化,从而为治疗代谢综合征提供了多方面治疗靶点.现重点阐述近年采PPARδ的研究进展.
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PPARδ与代谢综合征和动脉粥样硬化关系的研究进展
探索改善代谢综合征(metabolic syndrome,MS)多种代谢异常的有效药物对降低MS并发2型糖尿病和心血管病的危险性有重要的意义.研究表明过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)在激动剂的作用下可增加巨噬细胞胆固醇的逆向转运、升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),促进骨骼肌细胞脂肪酸的氧化、预防肥胖,增加胰岛素敏感性,抑制炎症反应、缩小动脉粥样硬化损伤面积而有潜在的抗动脉粥样硬化的作用,因此有望成为防治MS的新型药物作用靶点.
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六味地黄汤相关单体对HepG2细胞内PPARδ水平的影响
目的 研究六味地黄汤中芍药苷、没食子酸、丹皮酚、梓醇、马钱苷、莫诺苷、桃叶珊瑚苷、23-乙酰泽泻内酯醇B、薯蓣皂苷元9种单体成分对过氧化物酶体增殖激活受体PPARδ水平的影响.方法 通过建立HepG2(人肝癌细胞)细胞高脂模型,降低PPAR δ的水平,再分别给予六味地黄汤中的9种单体成分(3个质量浓度/单体),考察各单体对PPARδ的作用.结果 丹皮酚、薯蓣皂苷元、桃叶珊瑚苷3个单体在不同质量浓度下使PPARδ都有明显的增加,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01),其他单体作用不明显.结论 丹皮酚、薯蓣皂苷元、桃叶珊瑚苷使PPARδ都有明显增加,可能是六味地黄汤降脂的有效成分.
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大豆异黄酮对去卵巢高脂模型大鼠PPARδ基因表达的影响
背景与目的: 研究高含量大豆异黄酮(Soy isoflavones,SI)对去卵巢动脉粥样硬化大鼠PPARδ基因表达的影响.材料与方法: 将60只SD大鼠去卵巢,10只喂基础饲料,另50只喂4周高脂饲料后,随机分为高脂模型组,SI低、中、高三个剂量组和雌激素已烯雌酚对照组,共5组,每组10只.继续喂高脂饲料22周,各SI剂量组加喂总异黄酮含量为90.04%,金雀异黄素(genistein,Gen)含量为39.37%的SI,按30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg三个剂量饲喂,观察实验大鼠主动脉及肝脏的形态学变化,并检测大鼠肝脏、小肠、主动脉中PPARδ的表达情况.结果: 高脂模型组主动脉和肝脏脂质堆积,细胞变形.而SI高剂量组主动脉和肝脏脂质堆积较少,细胞较正常.SI使大鼠肝脏、小肠、血管中PPARδ的表达增高.结论: SI可对抗高脂饲料对去卵巢大鼠造成的脂代谢紊乱,对主动脉壁及肝细胞具有保护作用,且呈剂量-效应关系.SI促进高脂饲料喂养的去卵巢大鼠血管的PPARδ表达.
