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GPC3在乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒相关性肝癌组织中的表达及其意义
目的：探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）在HBV和丙型肝炎病毒（HCV）相关性肝癌中的表达及其意义。方法收集肝癌肝组织及相应的癌旁组织（距癌组织边缘2 cm的肝组织）47对（HBV相关性肝癌31例、HCV相关性肝癌16例）、肝硬化肝组织36例（HBV相关性肝硬化22例、HCV相关性肝硬化14例）、慢性肝炎肝组织26例（乙型病毒性肝炎18例、丙型病毒性肝炎8例）、正常肝组织12例，采用免疫组织化学法检测GPC3在上述肝组织的表达水平，并比较其阳性率。结果 GPC3在正常肝组织、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎肝组织中均无表达；GPC3在HCV相关性肝癌、癌旁组织、肝硬化组织中的阳性率分别为100％、37.5％、28.6％，均明显高于HBV相关性肝癌、癌旁组织、肝硬化组织（分别为74.2％、9.7％、0％，P均＜0.05），但与合并肝硬化的HBV相关性肝癌（91.3％）及其癌旁组织（13.0％）比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）。结论GPC3在HBV和HCV相关性肝癌中均呈高度表达，在HCV相关性肝癌中更为显著，其可能在肝炎-肝硬化-肝癌的进程中发挥重要的作用。
关键词： 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 免疫组织化学 -
血清GP73、SOD、GPC3含量与肝癌病灶内细胞增殖、血管新生的相关性研究
目的:研究血清GP73、SOD、GPC3含量与肝癌病灶内细胞增殖、血管新生的相关性.方法:选择2O14年6月~2O17年2月期间在江汉油田总医院诊断为原发性肝癌的患者作为肝癌组,同期在江汉油田总医院体检的健康者作为对照组,采集两组受试者的血清并测定GP73、SOD、GPC3的含量;采集肝癌组患者的肝癌病灶和癌旁病灶,测定细胞增殖分子及血管新生分子的表达量.结果:肝癌组患者血清中GP73、GPC3的含量显著高于对照组,SOD 的含量显著低于对照组;肝癌组患者肝癌病灶内DNMT3B、STC2、SIRT6、LETM1、EphB4、SULT2B1、HIF-1α、VEGF、Ang-2、HGF、TGF-β1的蛋白表达量显著高于癌旁病灶;肝癌组患者肝癌病灶内DNM T3B、STC2、SIRT6、LETM1、EphB4、SULT2B1、HIF-1α、VEGF、Ang-2、HGF、TGF-β1的蛋白表达量与血清中GP73、GPC3的含量呈正相关,与血清中SOD的含量呈负相关.结论:肝癌患者血清中GP73、SOD、GPC3含的变化与肝癌病灶内细胞增殖、血管新生密切相关.
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高尔基体糖蛋白73、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、甲胎蛋白异质体百分比联合检测在原发性肝癌诊断中的应用
目的：探讨高尔基体糖蛋白73（GP-73）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）、甲胎蛋白异质体百分比（AFP-L3％）联合检测在原发性肝癌诊断中的应用。方法选择肝癌患者154例（肝癌组），肝硬化患者78例（肝硬化组），健康对照者56例（对照组），用酶联免疫法分别测出 GP-73、GPC3、AFP-L3的浓度。然后分别按照检测项目统计分析。结果肝癌组中 GP-73、GPC3、AFP-L3％的水平明显高于肝硬化组和对照组（P ＜0．05）；肝癌组中 GP-73、GPC3、AFP-L3％的阳性率分别为66．2％、72．1％、53．2％。三项联合检测的阳性率可达到97．9％。高于任何单项和联合检测的敏感度和准确度。肝癌组中 GP-73、AFP-L3％在 AFP不同水平内比较，差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论 GP-73、GPC3、AFP-L3％三者联合检测提高原发性肝癌诊断的敏感度和准确度，对鉴别诊断早期肝癌有参考意义。
关键词： 原发性肝癌 高尔基体糖蛋白73 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 甲胎蛋白异质体 -
荧光探针偶联G PC 3单链抗体对肝癌的体内外检测研究
目的 使用单链抗体偶联荧光染料构建探针进行磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)阳性肝癌的体内外检测.方法 通过Overlap聚合酶链反应(PCR)采用柔性肽G4S将罗氏公司开发的Codrituzumab轻链与重链连接,构建工程载体,并通过毕赤酵母进行表达纯化,获得靶向GPC3的单链抗体;采用流式细胞术检测单链抗体对GPC3阳性肝癌细胞Huh-7的结合能力;将单链抗体与碱性荧光染料罗丹明B偶联,使用激光共聚焦检测单链抗体在体外对Huh-7细胞的靶向能力;将单链抗体与近红外荧光染料NIRB-NHS偶联,通过CCD照相机实时收集荧光信号检测偶联探针在荷瘤裸鼠体内的靶向能力,并判断其开发为检测试剂的潜力.结果 通过基因工程手段和毕赤酵母表达,成功获得抗GPC3单链抗体,经WB鉴定结果说明单链抗体Anti-GPC3 scFv表达及装配正确.流式细胞术检测Anti-GPC3 scFv与肝癌细胞Huh-7的结合率为40.3％.体外靶向性试验验证单链抗体Anti-GPC3 scFv可在体外很好地靶向肝癌细胞Huh-7,单链抗体组细胞平均荧光强度为218.61±9.03,明显优于对照组的31.74±5.28.体内近红外成像试验中,通过H uh-7细胞移植荷瘤裸鼠给药后的荧光信号分析结果显示,单链抗体探针可以很好地靶向至肿瘤部位,分析热点区域的大肿瘤/正常组织荧光信号比可知,单链抗体组信号比为8.27±2.94,明显强于对照组的1.09±0.63.结论 采用毕赤酵母表达体系成功构建并表达了单链抗体Anti-GPC3 scFv.单链抗体保留了母本抗体的结合能力,并体现了很好的体外和体内靶向能力,其靶向能力可应用于G PC3阳性肝癌的检测领域,拥有潜在的临床应用前景.
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血清4项指标联合检测对原发性肝癌的诊断价值
目的：评价甲胎蛋白（AFP）、α‐L‐岩藻糖苷酶（AFU）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）及高尔基体蛋白73（GP73）联合检测在原发性肝癌（PHC）中的诊断意义。方法分别检测65例 PHC患者、61例肝硬化患者和60例健康对照者血清AFP、AFU、GPC3和GP73水平，并对结果进行统计学分析。结果 PHC组AFP、AFU、GPC3、G P73水平显著高于肝硬化组和健康对照组，差异有统计学意义（ P＜0．05），肝硬化组各项指标水平较健康对照组明显升高，差异有统计学意义（P＜0．05）。AFP、AFU、GPC3、GP73诊断PHC的敏感性为69．23％～78．46％，准确性为81．72％～84．95％，4项标志物联合检测的敏感性和准确性达95．38％和87．63％，明显高于单项检测。结论 AFP、AFU、GPC3、GP73联合检测可提高PHC的诊断率，尤其可提高AFP低水平PHC的早期诊断率。
关键词： 甲胎蛋白 α-L-岩藻糖苷酶 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 高尔基体蛋白73 原发性肝癌 -
磷脂酰肌醇蛋白聚糖3转录干预对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用
目的 探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC-3)特异性短发夹RNA (shRNA)对肝癌细胞侵袭和血管新生的抑制作用与机制.方法 将GPC-3特异性shRNA转染肝癌细胞,检测GPC-3 mRNA及蛋白表达的变化；分析其对细胞增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响.样本均数两两比较采用独立样本t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析.结果 shRNA转染肝癌细胞的效率大于80％,GPC-3 shRNA1转染HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞后,GPC-3 mRNA水平分别为2.13±1.10、4.94±0.59、3.66±0.32,与空白对照组的19.34±0.90、20.24±1.61、13.97±1.15相比,t值分别为21.786、15.473、15.004,P值均＜0.001,差异均有统计学意义,且GPC-3 shRNA1可明显诱导细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖、运动及侵袭能力.HepG2、MHCC-97H和Huh7肝癌细胞干扰组β-连环蛋白mRNA表达分别为6.82±0.21、4.01±0.52和5.47±0.90,与阴性对照组的12.52±0.30、12.03±0.98、12.45±0.26比较,t值分别为26.903、12.578和12.870,P值均＜0.001,差异均有统计学意义;Glil mRNA水平分别为9.78±1.35、10.78±1.15和10.93±0.97,与阴性对照组的6.49±0.72、6.80±0.79、10.03±0.97比较,t值分别为-3.730、-4.918和-3.083,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.GPC-3 shRNA1还可下调HepG2和MHCC-97H细胞胰岛素样生长因子Ⅱ和血管内皮生长因子表达.结论 GPC-3shRNA1可下调GPC-3 mRNA水平,通过Wnt/β-连环蛋白和Hedgehogs信号通路抑制癌细胞迁移、侵袭和血管新生,提示GPC-3为肝癌基因治疗潜在的分子靶目标.
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联合检测AFP-L3％、GP73、GPC3在AFP低值原发性肝癌诊断中的价值
目的:本研究探讨血清甲胎蛋白异质体3百分含量(AFP-L3％)、高尔基蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)联合检测在AFP低值原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)诊断中的临床价值.方法:选取58例AFP低值原发性肝细胞癌患者(PHC组)、62例良性肝病患者(良性肝病组)和55例体检健康者纳入本研究.采用微量离心柱法分离AFP-L3,电化学发光法检测AFP与AFP-L3,计算AFP-L3％.依据试剂盒推荐以AFP-L3％≥10％作为阳性界值.采用酶联免疫吸附法检测GP73、GPC3血清浓度,其诊断PHC的cut-off值由受试者工作特征曲线(recover operation characteristic,ROC)确定.结果:PHC组AFP-L3％ (16.58％±5.12％)明显高于良性肝病组(9.16％±3.86％)和健康对照组(5.11％ ±2.03％,P＜0.001);PHC组GP73浓度(167.83±69.56) ng/ml明显高于良性肝病组(59.43±28.37) ng/ml和健康对照组(10.39±4.22) ng/ml,P＜0.001;PHC组GPC3浓度(116.52±48.21) μg/L明显高于良性肝病组(28.43±11.25)μg/L和健康对照组(3.25±1.46) μg/L,P＜0.001.以AFP-L3％≥10％作为阳性界值诊断PHC,诊断灵敏度为82.76％,特异度为82.05％,诊断正确率为82.28％;依据ROC曲线,GP73诊断PHC的cut-off值为81.86 ng/ml,诊断灵敏度为77.59％,特异度为82.91％,诊断正确率为81.14％;依据ROC曲线,GPC3诊断PHC的cut-off浓度为35.43μg/L,诊断灵敏度为70.69％,特异度为77.78％,诊断正确率为75.43％;联合检测AFP-L3％、GP73、GPC3水平诊断PHC的灵敏度为87.93％,特异度为84.62％,诊断正确率为85.71％.结论:肿瘤标志物AFP-L3％、GP73、GPC3可作为早期诊断和鉴别诊断PHC的良好指标,联合检测可显著提高诊断正确率.
关键词： 原发性肝癌 甲胎蛋白异质体 高尔基体蛋白73 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 -
AFP、CEA、GPC3单独及联合检测在原发性肝癌诊断中的应用
目的:探讨3种血清肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)单独及联合检测对原发性肝癌(PHC)的互补诊断价值及对肝癌早期诊断的意义.方法:对我院2009年8月-2011年7月收治的55例PHC,30例肝硬化患者进行单独及联合检测AFP、CEA、GPC3,并选择同期30例正常人作为对照组.采用电化学发光法测定AFP水平,速率法检测CEA水平,ELISA法检测GPC3水平.结果:PHC组血清AFP、CEA和GPC3水平均明显高于肝硬化组及正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).PHC组患者血清AFP、CEA和GPC3阳性率分别为74.5％、69.1％和78.2％.血清指标AFP联合CEA或者GPC3可使检出率分别提高至81.8％和92.7％.三项指标联合检测PHC的阳性率可高达96.3％.AFP阴性的39例PHC患者中,血清GPC3、CEA阳性率分别为76.9％ (30/39)、71.8％ (28/39),表明二者对AFP阴性的PHC患者具有较高的诊断互补作用.结论:血清肿瘤标志物AFP、CEA、GPC3对PHC有一定的诊断价值;血清GPC3和AFP联合检测可明显提高PHC的诊断率,优于单项检测,特别是对AFP阴性或AFP呈低浓度PHC更具有诊断价值.
关键词： 原发性肝癌 甲胎蛋白 癌胚抗原CEA 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 诊断 -
多层螺旋CT及相关肿瘤标志物水平检测对肝细胞癌的诊断价值
目的:探讨肝细胞癌(HCC)多层螺旋CT(MSCT)影像特点及肿瘤标志物水平变化.方法:以本院2013年3月至2016年3月就诊的115例肝脏病变患者为研究对象,病理证实肝细胞癌60例,良性病变55例.所有患者均接受MSCT检查及血清高尔基体蛋白73(GP73)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)水平检测,观察HCC患者CT表现,以病理结果为金标准,分析MSCT诊断肝细胞癌敏感度、特异度及准确度,同时比较良恶性病变血清GP73、GPC3水平及其阳性检出率.结果:HCC患者血清GP73、GPC3水平均显著高于良性病变(P<0.05),血清GP73、GPC3单独及联合检测阳性检出率均显著高于良性病变(P<0.05).MSCT平扫图像多为低密度,增强扫描动脉期多为高密度影,门脉期多为低密度影或以低密度影为主,延迟期多为低密度影.MSCT对HCC诊断敏感度、特异度、准确度分别为85.00%、90.91%、87.83%.结论:MSCT对HCC特征清晰显示,诊断准确率较高,血清GP73、GPC3也可作为HCC诊断重要辅助手段,两者联合检测能有效提高HCC阳性检出率.
关键词： 肝细胞癌 体层摄影术 X线计算机 高尔基体蛋白73 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3
