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氧化苦参碱抑制HepG_2细胞增殖的研究
目的:探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞株(HepG_2)增殖抑制的影响及其作用机制.方法:以0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.8,1,2,5,8,10,15 g·L~(-1)的氧化苦参碱处理HepG_2细胞,四噻唑蓝法(MTT)检测其对细胞增殖的影响;苏木精-伊红(HE)染色比较细胞形态差异;免疫组化染色进一步检测HepG_2细胞肿瘤相关蛋白表达量的变化.结果:不同浓度氧化苦参碱处理HepG_2细胞,低于1 g·L~(-1)对细胞抑制不明显;1～8 g·L~(-1)对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时间和剂量依赖性;大于8 g·L~(-1)时,对细胞虽有明显的抑制作用,但未表现出明显的时间和剂量依赖性.进一步免疫组化分析结果显示,HepG_2细胞肿瘤相关蛋白P53和Bcl-2表达量明显减少,而Bax表达量明显增加.结论:氧化苦参碱对HepG_2细胞增殖具有明显的抑制作用;其作用机制可能是通过上调或者下调肿瘤相关蛋白的表达来实现的.
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液态甲醛对HepG_2细胞增殖影响及DNA损伤效应
为探讨液态甲醛致HepG_2细胞增殖的抑制情况和DNA损伤效应.以HepG_2细胞作为试验材料,甲醛染毒浓度分别为O(对照)、200、400、800,1600 μmol/L.采用MTT试验检测甲醛暴露24 h对HepG_2细胞的抑制率,并计算半数致死浓度(IC_(50)).采用彗星试验检测甲醛暴露12 h对HepG_2细胞的DNA损伤效应.结果 显示,200、400、800、1 600 μmol/L甲醛染毒组细胞抑制率分别为38.03%.46.01%,50.28%,73.65%,具剂依赖性.IC_(50)为484.59μmol/L.彗星试验结果显示.与对照组比较,200、400、800 μmol/L甲醛染毒组彗星细胞率和彗星细胞尾长均较高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).随着甲醛染毒剂量的增高,彗星细胞率及彗星细胞尾长均先升高后降低,且在400 μmol/L甲醛染毒组达到峰值.此外,1600μmol/L,甲醛染毒组彗星细胞率和尾长与对照组比较.差异无统计学意义(P＞0.05).表明甲醛暴露对HepG_2细胞的抑制具浓度依赖性.低浓度甲醛主要引起细胞DNA分子断裂,高浓度甲醛主要引起细胞DNA发生交联.
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蜕皮甾酮对胰岛素抵抗HepG_2细胞的蛋白质组学研究
目的 用比较蛋白质组学策略筛选蜕皮甾酮干预胰岛素抵抗HepG_2细胞前后的差异表达蛋白,为寻找胰岛素增敏药物作用靶点提供新的实验依据.方法 将HepG_2细胞置于5×10~(-7) mol·L~(-1)胰岛素培养液中诱导16 h,观察高胰岛素对HepG_2细胞葡萄糖消耗量的影响,确定模型建立后,加入含蜕皮甾酮10~(-5) mol·L~(-1)培养液继续孵育24 h,继续观察蜕皮甾酮对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗量的影响;并用裂解液提取干预前后细胞的蛋白质,以双向电泳技术对干预前后差异表达蛋白进行筛选,差异表达蛋白再经MALDI-TOF-MS质谱分析,MS-Fit数据库鉴定.结果 与模型组比较,蜕皮甾酮干预组找到53个差异蛋白点,其中35个蛋白点表达上调,18个蛋白点表达下调,鉴定了其中6个蛋白.结论 蜕皮甾酮胰岛素增敏作用靶点涉及多种与胰岛素抵抗相关的蛋白质和激酶,为后续靶蛋白的筛选及其功能研究奠定了基础.
