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鸡血藤活性成分SS8对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的作用
目的:研究鸡血藤单体成分SS8对骨髓抑制小鼠造血祖细胞(CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg)增殖的影响.方法:采用甲基纤维素半固体培养法,通过对长期接受SS8治疗后的骨髓抑制小鼠造血祖细胞的培养,观察SS8对CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg生长的作用.结果:SS8可显著刺激骨髓抑制小鼠CFU-GM,CFU-E,BFU-E,CFU-Meg生长,与对照组比较有显著差异(P<0.05).随时间延长、剂量增加,刺激作用逐渐加强.结论:SS8对骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖有明显刺激作用,且有时间、剂量相关性.
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红细胞生成素和重组细胞因子对动员后外周血造血祖细胞、红系爆式祖细胞和粒巨噬系祖细胞的集落形成和自我更新的作用
本研究探讨红细胞生成素(EPO)和重组细胞因子(G-CSF,SCF,IL-3和GM-CSF)对患者和健康供者动员后的外周造血祖细胞的红系爆式祖细胞(BFU-E)和粒巨噬系祖细胞(CFU-GM)的集落形成和自我更新的作用.为了更好的了解上述那一种细胞因子和如何联合对干细胞的扩增更为有效,采用甲基纤维素半固体培养法,观察在单独用EPO、G-CSF的基础上,比较联合SCF,IL-3和GM-CSF对BFU-E和CFU-GM的作用.结果显示:①在EPO+IL-3和EPO+SCF+IL-3组,外周血BFU-E自我更新显著增加,而EPO+SCF组则明显增加.②患者与正常供者之间BFU-E的自我更新无显著差别.③G-CSF联合SCF,IL-3和GM-CSF后CFU-GM集落形成显著增加.患者组仅G-CSF本身可使CFU-GM集落形成显著增加,而G-CSF+SCF和GMix组CFU-GM集落形成明显增加.④当G-CSF联合SCF,IL-3和GM-CSF可以显著增加CFU-GM的自我更新(AUC).GMix是CFU-GM的集落形成和祖细胞扩增的较佳组合.⑤正常供者比患者有较高的AUC即自我更新,特别是在G-CSF组比患者具有显著差异(P=0.0067).
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鸡血藤单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响
背景:机体造血主要依靠造血祖细胞来扩增,当受到放射线、化学药物等损伤时,即会发生造血功能障碍.目的:观察从传统中药鸡血藤中提取的九个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响.设计: 随机对照实验.单位:中国人民解放军总医院临床药理研究室.材料:实验于2002-11/2003-02在中国人民解放军总医院药理研究室完成,选用348只健康昆明种小鼠,体质量22.25g,清洁级,雌雄各半,由解放军军事医学科学院实验动物中心提供,许可证号码为SCXK-2001-001.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.鸡血藤由中国人民解放军总医院中药房提供,单体化合物没食子儿茶素、芒柄花素、儿茶素、焦性粘液酸、丁香酸、Demethylvestitol、间苯三酚、芒柄花甙、表儿茶素由中国医学科学院药物研究所从鸡血藤乙酸乙酯部位中分离.TGL-16型离心机为上海医疗器械六厂生产,CO2培养箱为日本SANYO公司产品,MK型倒置显微镜为日本OLYMPUS公司产品.方法:[1]实验分组:随机抽签法将小鼠分为29组:鸡血藤九种单体化合物没食子儿茶素、芒柄花素、儿茶素、焦性粘液酸、丁香酸、Demethylvestitol、间苯三酚、芒柄花甙、表儿茶素高剂量组、中剂量组及低剂量组共27组,同时设立正常组及对照组,每组12只.[2]实验干预:除正常组外,小鼠均给予全身60Co γ射线照射,剂量为4Gy.照射后第3天,9种单体化合物高、中、低剂量组小鼠分别腹腔注射2,0.4,0.08g/L相应单体化合物药液0.5mL,正常组和对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水.[3]实验评估:给药30min后分別取正常组及对照组各8只及其他组全部小鼠静脉血制备正常、对照及各单体含药血清,取对照组剩余4只小鼠的骨髓细胞进行造血祖细胞培养,培养分为对照组和九个单体化合物高、中、低剂量组,分别在各组培养体系中加入对照及各单体含药血清,另取正常组小鼠4只进行骨髓造血祖细胞培养作为细胞培养的正常组,通过计数各组CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg集落数来观察九个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响.主要观察指标:各组CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg集落数.结果:纳入小鼠348只,均进入结果分析,无脱失值.[1]CFU-E集落数:儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸、表儿茶素高剂量组CFU-E显著高于对照组(P<0.05-0.01),儿茶素中、低剂量组及没食子儿茶素中剂量组CFU-E也显著高于对照组(P<0.05).[2]CFU-GM集落数:除焦性粘液酸、芒柄花甙各剂量组外,鸡血藤其余单体化合物各剂量组CFU-GM均较对照组明显增加(P<0.01).[3]BFU-E集落数:儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸各剂量组及表儿茶素高、中剂量组的BFU-E较对照组明显增加(P<0.05).[4]CFU-Meg集落数:儿茶素和表儿茶素各剂量组、丁香酸高、低剂量组及没食子儿茶素低剂量组的CFU-Meg显著高于对照组(P<0.05).对照组所有集落数均明显少于正常组,差异有统计学意义(P<0.01).结论从中药鸡血藤中提取的单体化合物可刺激骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖,其中儿茶素的刺激增殖活性相对强.
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体外培养法观察铅对未成年小鼠造血干/祖细胞生长的影响
目的:为防治儿童铅中毒提供实验室研究资料,探讨醋酸铅对体外培养的小鼠骨髓造血祖细胞的影响.方法:将不同浓度的醋酸铅作用于体外培养的骨髓粒系造血祖细胞(CFU-GM)和红系造血细胞(BFU-E),观察CFU-GM和BFU-E细胞的集落数变化.结果: 醋酸铅可明显抑制骨髓CFU-GM和BFU-E的生长,与对照组比较差异显著(P<0.05),且随浓度增加抑制作用增强,呈明显的剂量-效应关系;进行等级相关分析,相关系数分别为rs=﹣0.969(P=0.000)和rs =﹣0.983(P =0.000).结论:醋酸铅可明显抑制体外培养的骨髓CFU-GM和BFU-E的生长.
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低氧对CD34+造血干/祖细胞增殖分化及其对细胞因子依赖性的影响
采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞, 进行低氧和常氧条件下单个核细胞(MNC)及CD34+细胞的半固体及液体培养, 计细胞总数和集落产率, 并通过流式细胞仪检测细胞表型和细胞周期, 以探讨造血干/祖细胞在低氧环境下增殖分化性能的改变及其对细胞因子反应性的变化.结果显示: CD34+细胞在低氧条件下生成的BFU-E集落数(324.8±41.4/104细胞)明显增多(对照为191.2±34.5/104细胞, P<0.01);在无细胞因子存在的液体培养体系中, 低氧组的BFU-E产率(152.4±22.6/104细胞)明显高于常氧组(74.2±9.3/104细胞, P<0.01);低氧培养细胞中CD34+细胞的比例高于对照2.5±1.2倍(P<0.05).但MNC生成的BFU-E在常氧和低氧条件下无显著差异.这些结果表明: 体外低氧环境能显著增加CD34+造血干/祖细胞形成红系祖细胞的产率, 且使其对细胞因子的依赖性降低, 并对早期红系祖细胞的维持有增强作用, 但对粒系祖细胞的增殖则有抑制作用.
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鸡血藤单体化合物对造血祖细胞增殖的调控作用研究
目的 研究从中药鸡血藤(spatholobus suberectus dunn,SSD)中提取的9个单体化合物对骨髓抑制小鼠造血祖细胞增殖的影响,明确鸡血藤补血活血作用的主要物质基础.方法 采用血清药理学方法,通过造血祖细胞培养观察9个化合物对骨髓抑制小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用.结果 腹腔注射鸡血藤各单体后的含药血清对骨髓抑制小鼠造血祖细胞的生长有较强的刺激作用:各单体化合物(除焦性粘液酸、芒柄花苷外)含药血清均可刺激CFU-GM的生长(P＜0.01);儿茶素、没食子儿茶素、丁香酸、表儿茶素的含药血清对CFU-E、BFU-E和CFU-Meg的刺激增殖作用与对照组比较亦差异有显著性(P＜0.05).结论 从中药鸡血藤中提取的单体化合物可刺激骨髓抑制小鼠造血祖细胞的增殖,缓解其造血祖细胞内源性增殖缺陷,其中儿茶素的刺激增殖活性相对强,可能是鸡血藤补血活血的主要物质基础.
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儿茶素对小鼠造血祖细胞的刺激增殖作用
目的:观察儿茶素对小鼠造血祖细胞增殖作用.方法:通过造血祖细胞培养观察儿茶素对小鼠CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-Meg生长的作用.结果:加入儿茶素工作液后,CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Meg集落数均明显升高.至100 nag·L-1时,各系造血祖细胞集落数均增加至高,与未加儿茶素的实验组相比均有统计学差异(P<0.01).结论:儿茶素可明显促进小鼠造血祖细胞(CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-Meg)的增殖,并可与造血生长因子起协同效应,具有明显的造血促进作用.
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小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液代替刺激因子培养BFU-E和CFU-Meg
造血微环境是一个复杂的造血调节系统,造血细胞的发生、发育、成熟、凋亡都受其直接或间接调节[1].骨髓内皮细胞是骨髓微环境的一个重要组成部分,对造血有重要调节作用[2].李卫民等[3]发现骨髓内皮细胞表达多种造血刺激因子和造血抑制因子mRNA, mw>10 kD组分的mBMEC-CM含刺激因子为主,能刺激造血,浓度达6%(体积比体积,V/V)时刺激作用强;mw<10 kD组分的mBMEC-CM中含抑制因子为主,主要抑制造血.程腊梅等[4]发现单用mw>10 kD组分的mBMEC-CM代替集落刺激因子可刺激CFU-GM生成,mw>10 kD组分的mBMEC-CM与GM-CSF合用可刺激HPP-CFC生成.本文研究单用mw>10 kD组分的mBMEC-CM作为刺激物培养BFU-E,CFU-Meg,以期观察红系、巨核系集落的生成.
关键词： 骨髓内皮细胞条件培养液 BFU-E CFU-Meg 小鼠 -
炙甘草汤及相应细胞培养上清对脐血BFU-E形成的影响
目的:探讨炙甘草汤及相应细胞培养上清对脐血单个核细胞BFU-E形成的影响.方法:新鲜脐血经淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,实验采用炙甘草汤与右归饮两个中药方剂,单个核细胞设空白对照组、炙甘草汤组、右归饮组、混合组及相应细胞培养上清组,每组分别加入中药液或细胞培养上清,甲基纤维素半固体培养基培养10 d后观察集落形成情况.结果:细胞培养上清组均能刺激细胞集落形成,其中尤以炙甘草汤组为明显,其次是混合组与右归饮组.炙甘草汤培养上清组与混合培养上清组两组与空白培养上清组相比,刺激效果明显.结论:炙甘草汤细胞培养上清能明显刺激脐血单个核细胞集落形成,对脐血细胞扩增有明显效果.
