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三七总皂苷对人肺泡上皮细胞间质转化的抑制作用
该研究探讨了三七总皂苷对TGF-β1诱导的A549人肺泡上皮细胞间质转化和细胞外基质分解能力的影响.首先应用MTT法检测三七总皂苷对A549细胞增殖的影响,在12.5 ～200 mg·L-1,未发现三七总皂苷对A549细胞增殖有显著性的影响.接着将A549细胞分组.除正常组外,其余各组细胞应用5 μg· L-1TGF-β1刺激,其中TGF-β1组正常培养,其他刺激组分别用50,100,200 mg·L-1三七总皂苷干预.收集细胞和上清,先后采用圆形度值评估细胞的形态变化,免疫组化法检测特异性蛋白的表达以及酶联免疫吸附法检测MMP-9和TIMP-1的水平.TGF-β1刺激后,与正常组比较,细胞的形态发生变化,圆形度值显著减少(P＜0.01);上皮特征性蛋白E-cad表达显著减少(P＜0.05)而间质特征性蛋白α-SMA和FN的表达显著增加(P＜0.05).与TGF-β1组比较,三七总皂苷干预能显著增加圆形度值、降低α-SMA和FN的表达(P＜0.05,P＜0.01),但对E-cad的表达没有明显的影响.另外,TGF-β1刺激后,细胞分泌MMP-9的能力显著增强(P＜0.05),而TIMP-1的分泌量未见显著变化.与TGF-β1组比较,三七总皂苷增加MMP-9的分泌量(P＜0.05),减少TIMP-1的分泌量(P ＜0.05,P＜0.01).上述结果表明三七总皂苷能抑制肺泡上皮细胞的间质转化,促进细胞外基质分解,具有治疗肺纤维化的应用前景.
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PLTP在香烟诱导A549细胞合成白介素8中的作用
目的：研究磷脂转运蛋白（ Phospholipid transfer protein ，PLTP）对香烟诱导人肺泡上皮A549细胞合成白介素8（Interleukin－8，IL－8）的影响。方法：体外培养人肺泡上皮A549细胞株24 h，加入不同浓度的烟草提取物（Cigarette smoking extracts，CSE）共培养24 h；1．0％CSE与A549细胞株共培养6、12、24、48 h；PLTP siRNA预处理后，加入CSE共培养24 h。3－（4，5－二甲基噻唑－2）－2，5－二苯基四氮唑溴盐（ MTT）法检测A549细胞增殖情况；实时定量PCR（ RT－PCR）检测PLTP和IL－8 mRNA的表达量；蛋白质印迹法（ Western blot ）检测PLTP的表达量；酶联免疫吸附法（ Enzyme－Linked Immunosorbent Assay ， ELISA）检测IL－8相对含量。结果：0．125％烟草提取物促进A549细胞增殖，0．25％、0．5％、1．0％ CSE浓度对A549细胞生长无明显影响，而2．0％、4．0％CSE浓度抑制A549细胞增殖；不同浓度的（0．25％、0．5％、1．0％） CSE作用24 h后，PLTP和IL－8 mRNA及蛋白表达量增加，并且IL－8蛋白分泌呈现一定时间依赖性；PLTP siRNA处理后，IL－8表达量明显升高（ P＜0．001）。结论：PLTP基因缺失促进香烟诱导A549细胞合成IL－8。
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CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用
目的:探讨CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染人肺泡上皮细胞中的作用.以及CD46和Nectin-4之间的相互作用.方法:分为麻疹病毒感染前处理组和感染后2 h组,均用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理人肺泡上皮细胞,并设对照组.检测细胞内病毒滴度的变化,采用Western blot和Real-time PCR检测NP蛋白的表达水平,并运用免疫共沉淀检测CD46与Nectin-4的相互作用.结果:与对照组相比,麻疹病毒感染前用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理的人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度显著降低,分别为对照组的48.03%和49.53%,同时用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理使病毒滴度下降为27.15%,差异均有统计学意义(P<0.01).然而,在麻疹病毒感染2 h后用抗CD46抗体、抗Nectin-4抗体处理,人肺泡上皮细胞内麻疹病毒滴度和NP蛋白量未见显著减少.Western blot和Real-time PCR结果与上述结果一致;免疫共沉淀实验显示,CD46与Nectin-4存在相互作用.结论:CD46、Nectin-4在麻疹病毒感染肺泡上皮细胞中起到介导作用,CD46与 Nectin-4可能存在协同作用,该作用对麻疹病毒的感染起到了增强效果.
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特布他林对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠钾泵及钠通道的影响
目的 探讨特布他林对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠水转运通道的影响.方法 将常规培养的A549细胞分为海水处理(SG)组、特布他林(20 μmol/L孵育6h)处理(TG)组和阴性对照(NG)组.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵α1亚单位(Na+/K+-adenosine triphosphatase-α1,NKA-α1)、钠通道α亚单位(epithelail sodium channds-α,α-ENaC)的表达,水解比色法检测Na+-K+-ATP酶(Na-/K+-exchanging ATPase,NKA)活性.结果 MTT法及流式细胞仪检测结果均显示,特布他林处理对海水孵育后细胞的存活率无影响.NG组的NKA-α1和α-ENaC蛋白表达显著高于SG组(P＜0.01)和TG组(t=3.71,3.78,P＜0.01),TG组显著高于SG组(t=2.58,2.64;P＜0.05).与NG组NKA酶活性[(31.298±5.779)μmol/(mg·h)]比较,SG组[(14.211±3.885)μmol/(mg·h)]和TG组[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]明显降低(t=2.54,2.71;P＜0.05);TG组的NKA酶活性[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]较SG组升高(t=2.51,P＜0.05).结论 特布他林不影响人肺泡上皮细胞存活,并且可以抑制海水浸泡引起的α-ENaC、NKA-α1含量及NKA活性的下降.
关键词： 海水浸泡 人肺泡上皮细胞 钠通道 Na+-K+-交换ATP酶 特布他林 -
高氧对人肺泡上皮细胞凋亡的影响及其作用机制
目的 观察高氧对人肺泡上皮细胞(HPAEC)凋亡的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期HPAEC细胞,随机分为高氧组和对照组.对照组细胞不作处理,放置于50 mL/L CO2培养箱中培养;高氧组细胞换液1次后,以3 L/min速度通入含900 mL/L O2和50 mL/L CO2高纯混合气,通入时间10 min;两组细胞均培养24h.采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,免疫共聚焦检测细胞组蛋白去乙酰化酶(SIRT1)转位情况,Western blotting法检测细胞SENP1蛋白、乙酰化p53蛋白.结果 高氧组和对照组细胞凋亡率分别为24.77％ ±2.17％、5.33％±2.60％,两组比较,P＜0.05.高氧组细胞从正常的长梭形、多角形变成圆形、椭圆形,细胞间的间隙增宽,悬浮的细胞较多;对照组细胞大多为长梭形、多角形,贴壁较好,细胞间的间隙较小,悬浮的细胞较少.高氧组和对照组细胞SIRT1蛋白转位率分别为88.89％、16.23％,两组比较,P＜0.05.高氧组和对照组细胞SENP1蛋白相对表达量分别为0.76 ±0.12、0.67 ±0.02,乙酰化p53蛋白相对表达量分别为0.81±0.07、0.52±0.03,两组比较,P均＜0.05.结论 高氧可促进HPAEC细胞凋亡,其机制可能是高氧诱导HPAEC细胞SENP1蛋白表达增加,进而SIRT1蛋白从胞核转位到胞质,使乙酰化p53蛋白表达增加.
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沉默Pin1表达抑制高氧诱导人肺泡上皮细胞凋亡
目的：研究沉默Pin1表达对高氧诱导人肺泡上皮细胞（A549细胞）凋亡的影响。方法在体外常规培养A549细胞，随机分为对照组、高氧组、空载体组和Pin1-shRNA组，以3?L/min速度向各处理组细胞中通入95%?O2和5%?CO2的高纯混合气10?min。培养24?h后，倒置相差显微镜下观察细胞形态；流式细胞术检测细胞凋亡率；SP细胞免疫化学法检测细胞凋亡相关蛋白XIAP和Caspase-9表达；荧光显微镜检测细胞线粒体活性氧簇（ROS）及线粒体膜电位。结果高氧组和空载体组细胞均生长状态差，Pin1-shRNA组活细胞数量较高氧组和空载体组多，但比对照组少。与对照组相比，高氧组和空载体组细胞凋亡率增加、Caspase-9表达增加、XIAP表达降低、ROS含量增加、线粒体膜电位下降（均P<0.05）。而Pin1-shRNA组与高氧组和空载体组相比，细胞凋亡率下降、Caspase-9表达降低、XIAP表达增加、ROS含量降低、线粒体膜电位升高（均P<0.05），但与对照组相比差异亦有统计学意义（均P<0.05）。结论抑制人肺泡上皮细胞Pin1表达可减轻高氧诱导的细胞凋亡。
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地黄对人肺泡上皮细胞间质转化的抑制作用
目的:探讨地黄(环烯醚萜类苷、低聚糖和多糖提取物按照一定比例形成的组合物)对人肺泡上皮细胞间质转化的影响和机制.方法:MTT法分析地黄对A549细胞增殖的影响.TGF-β1诱导A549肺泡上皮细胞的间质转化并进行不同剂量的地黄干预;圆形度定量法和免疫细胞化学法分析细胞形态和细胞E-cad、FN、Collagen-I和α-SMA蛋白的表达;双抗体夹心酶联免疫吸附法检测细胞分泌MMP-9和TIMP-1水平.结果:地黄对A549细胞增殖的抑制作用随着剂量的增加而增强,200μg/ml剂量显著抑制细胞增殖(P＜0.01).与正常组比较,TGF-β1组圆形度和E-cad表达显著降低,α-SMA、FN和Collagen-I表达显著升高,MMP-9和TIMP-1分泌量显著增加(P＜0.01).与TGF-β1组比较,50μg/ml、100μg/ml组的圆形度和E-cad表达显著升高,α-SMA表达显著降低;地黄对FN、Collagen-I的表达和MMP-9分泌量没有显著的影响;25/μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组TIMP-1分泌量显著增加.结论:地黄能有效抑制A549人肺泡上皮细胞的上皮间质转化,作用机制涉及TGF-β1信号转导通路,尚有抑制MMP-9降解细胞外基质的作用.
