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豚鼠内淋巴囊Na-K-ATP酶亚基异构体的表达
目的研究豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α、β亚基各个异构体的表达及其意义。方法分别采用免疫组化法和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织中Na,K-ATP酶α和β亚基异构体的分布。结果 Na,K-ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1、β1和β2异构体，且β2表达较β1表达更强，上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1和α2异构体，且α1表达较α2表达强，而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3异构体表达。结论内淋巴囊组织的Na,K-ATP酶由不同亚基异构体组成，它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。
关键词： 内淋巴囊 豚鼠 Na+-K+-交换ATP酶 -
银杏叶提取物EGb 761对失神经骨骼肌Na+-K+-ATP酶活性的影响
目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGb 761)对失神经肌肉Na+-K+-ATP酶活性的影响.方法选用SD大鼠16只,按术后注射药物的不同随机分为银杏叶提取物组(实验组)和生理盐水组(对照组).显露左侧坐骨神经,切断并切除0.5 cm神经段.分别将神经远、近端反折后结扎.术后两组分别经腹腔注射EGb 761(100 mg/kg-1*d-1)和同体积的生理盐水.术后6周取左侧小腿三头肌,测定其Na+-K+-ATP酶活性.结果实验组失神经肌肉Na+-K+-ATP酶的活性优于对照组,两者差异有显著性意义(t= 2.51,P < 0.05).结论银杏叶提取物能改善大鼠失神经骨骼肌Na+-K+-ATP酶的活性,表明其对失神经肌萎缩有一定的保护作用.
关键词： 神经损伤 肌 骨骼 Na+-K+-交换ATP酶 银杏叶提取物 -
地高辛抗血清拮抗大鼠缺血再灌注引起的脑损伤
研究地高辛抗血清对缺血再灌注脑损伤的拮抗作用,采用了大鼠全脑缺血再灌注模型,比色法检测脑匀浆液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、脑细胞膜Na+-K+-交换ATP酶活性、血清肌酸激酶(CK)含量;用放射免疫法检测脑匀浆液中内洋地黄素含量.结果发现,全脑缺血再灌注导致脑组织SOD活性和ATP酶活性显著下降,脑组织MDA水平、内洋地黄素水平和血清CK水平显著升高.地高辛抗血清能改善由于脑缺血再灌注所造成的SOD、ATP酶活性的下降以及MDA、CK和内洋地黄素水平的升高.结果表明,地高辛抗血清对脑缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其作用机制与减轻脂质过氧化、促进自由基的清除以及改善脑能量代谢有关.这些作用可能是通过拮抗内洋地黄素的作用而实现的.
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特布他林对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠钾泵及钠通道的影响
目的 探讨特布他林对海水浸泡的人肺泡上皮细胞(A549)钠水转运通道的影响.方法 将常规培养的A549细胞分为海水处理(SG)组、特布他林(20 μmol/L孵育6h)处理(TG)组和阴性对照(NG)组.采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况,Western blotting法检测钠钾泵α1亚单位(Na+/K+-adenosine triphosphatase-α1,NKA-α1)、钠通道α亚单位(epithelail sodium channds-α,α-ENaC)的表达,水解比色法检测Na+-K+-ATP酶(Na-/K+-exchanging ATPase,NKA)活性.结果 MTT法及流式细胞仪检测结果均显示,特布他林处理对海水孵育后细胞的存活率无影响.NG组的NKA-α1和α-ENaC蛋白表达显著高于SG组(P＜0.01)和TG组(t=3.71,3.78,P＜0.01),TG组显著高于SG组(t=2.58,2.64;P＜0.05).与NG组NKA酶活性[(31.298±5.779)μmol/(mg·h)]比较,SG组[(14.211±3.885)μmol/(mg·h)]和TG组[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]明显降低(t=2.54,2.71;P＜0.05);TG组的NKA酶活性[(19.521±1.648)μmol/(mg·h)]较SG组升高(t=2.51,P＜0.05).结论 特布他林不影响人肺泡上皮细胞存活,并且可以抑制海水浸泡引起的α-ENaC、NKA-α1含量及NKA活性的下降.
关键词： 海水浸泡 人肺泡上皮细胞 钠通道 Na+-K+-交换ATP酶 特布他林 -
黄芪注射液对离体大鼠心脏功能及Na+-K+-交换ATP酶活性的影响
目的:观察黄芪注射液对离体心脏的影响.方法:采用大鼠离体心脏,以Krebs-Henseleit灌流液进行离体灌流.观察给黄芪注射液灌流前及灌流后5,10,15,20及30 min心肌收缩幅度、冠状动脉(冠脉)流量及心率等指标.试验结束后取部分左心室心肌,以比色法测定心肌细胞膜Na+-K+-交换ATP酶活性.结果:给药后5～30 min,20 mg/L, 100 mg/L及500 mg/L3个剂量组黄芪注射液均有显著增加冠脉流量的作用,同时,心肌收缩幅度亦明显增加,与对照组比较差异均有显著意义(P＜0.05或P＜0.01);500 mg/L组给药后5及15 min心率明显增加;500 mg/L及100 mg/L剂量组心脏心肌组织Na+-K+-交换ATP酶活性明显提高,与对照组比较差异有非常显著意义(P＜0.01).结论:黄芪注射液能够明显增加正常离体大鼠心脏冠脉流量、心肌收缩幅度及心率,并有增加心肌细胞膜Na+-K+-交换ATP酶活性的作用.
关键词： 黄芪 冠状动脉循环 心肌再灌注 心肌收缩 Na+-K+-交换ATP酶 -
低浓度哇巴因升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度可能的信号转导途径
目的:观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,并探讨低浓度OUA是否可通过Na+,K+-ATPase的信号转导途径升高[Ca2+]i.方法:分离豚鼠心室肌细胞,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca2+]i的荧光密度,另用不同浓度OUA孵育急性分离的豚鼠心室肌细胞后,分别取其沉淀用Western印迹检测观察OUA对酪氨酸蛋白(Src)磷酸化的影响.结果:在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(10-9,10-8,10-7,10-6mol·L-1)均可浓度依赖性地升高细胞内钙浓度(P《0.05或0.01),且在正常台氏液中升高更为显著(P《0.05).蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST)(1、10、50、100 μmol·L-1)可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应.磷酸化Src包括相对分子质量120 000和70 000两个条带,各剂量OUA(10-4,10-6,10-8mol·L-1)均能使Src的两个磷酸化条带的密度较阴性对照组显著升高(P＜0.05),而GST(100 μmol·L-1)可显著抑制OUA的升高效应.结论:低浓度OUA可能通过使酪氨酸蛋白磷酸化,激活OUA/Na+,K+ATPase/Src信号转导通路,促使钙通道开放及内钙释放,从而升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度.
关键词： Na+-K+-交换ATP酶 心室肌细胞 哇巴因 钙 -
不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株cAMP水平及Na+-K+-ATP酶活性的影响
目的:观察不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株(LLC-PK1)细胞内环腺苷酸(cAMP)水平和Na+-K+-ATP酶活性的改变,探讨代谢相关因素在细胞水平对近端肾小管上皮细胞的离子转运和细胞凋亡影响. 方法:以LLC-PK1为研究对象,观察尿酸浓度为0, 0.1, 0.2和0.4 mmol/L和胰岛素浓度为0, 10-9, 10-8, 10-7 mol/L培养24 h条件下,LLC-PK1细胞内cAMP水平、Na+-K+-ATP酶活性的改变以及离子转运情况. 结果:0.1, 0.2和0.4 mmol/L尿酸刺激24 h, LLC-PK1的cAMP水平、细胞Ca2+, Na+浓度升高,而Na+-K+-ATP酶的活性、K+浓度下降;胰岛素在高浓度时引起细胞内游离Ca2+, Na+浓度增高,而cAMP水平,Na+-K+-ATP酶活性及K+浓度下降. 结论:尿酸和胰岛素均对LLC-PK1细胞具有明显的影响,可能与代谢综合征时肾脏功能改变的发生或保护机制有关.
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灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激的保护作用
目的:研究灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激的保护作用.方法:采用与黄嘌呤(0.3 mmol/L)和黄嘌呤氧化酶(0.02 U)体系在37℃下孵育30 min,建立大鼠脑突触体超氧阴离子氧化损伤模型.通过测定脂质过氧化产物丙二醛评价脂质过氧化程度.通过脂溶性荧光探针DPH的各向异性判断突触体膜的流动性.胞内钙离子的测定采用荧光光度法,以Fura 2-AM为荧光探针.测定ATP酶解释放的无机磷确定Na+/K+-ATP酶的活性.结果:超氧阴离子使大鼠脑突触体的脂质过氧化产物丙二醛及胞内钙离子浓度显著上升,突触体的膜流动性和Na+/K+-ATP酶的活性则显著下降,预先加入灯盏花乙素(25 100 μmol/L)则能显著缓解超氧阴离子引起的氧化性损伤,表现为丙二醛的水平和胞内钙离子浓度下降,膜流动性增加及Na+/K+-ATP酶活性的恢复.结论:灯盏花乙素对超氧阴离子引起的大鼠脑突触体氧化应激具有良好的保护作用.
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低浓度毒毛旋花子苷元的强心作用及其与心肌细胞膜Na+,K+-ATP酶的关系
目的:观察低浓度的毒毛旋花子苷原(Strophanthidin,Str)对离体豚鼠心脏是否有强心作用,及其与心肌细胞膜Na+,K+-ATP酶活性的关系.方法:采用Langendorff离体灌流装置经主动脉逆行灌流心脏;八道生理记录仪记录心率(HR),左室内压(LVP)及其大变化速率(±dp/d tmax);无机磷法测定心肌细胞膜Na+,K+-ATP酶活性.结果:Str 0.1 nmol/L可兴奋Na+,K+-ATP酶活性(P＜0.05)但不影响心脏的收缩功能.Str 1 nm01/L仅能升高+dp/dtmax(P＜0.05)并兴奋Na+,K+-ATP酶活性(P＜0.01).Str 10和100 nmol/L可升高LVP和+dp/dtmax(P＜0.05或P＜0.01),对Na+,K+-ATP酶活性无明显作用.Str 1-100μml/L虽能短暂升高LVP和±dp/dtmax(P＜0.01),但随后出现不规则收缩并使LVP和±dp/d tmax降低,其对Na+,K+-ATP酶活性则表现为剂量依赖性抑制作用(P＜0.01).结论:高浓度Str的正性肌力作用是通过抑制Na+,K+-ATP酶活性实现的,而低浓度Str的强心作用似与Na+,K+-ATP酶抑制作用无关.
关键词： 毒毛旋花子苷元 心肌收缩 Na+-K+-交换ATP酶 豚鼠
