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复方银杏叶颗粒改善人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用及其机制研究
该实验于体外使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与复方银杏叶颗粒(80,160,320,640 mg· L-1)预孵育,合并使用H2O2(1 200 μmol·L-1)建立氧化应激损伤模型.采用MTT法研究药物对HUVEC细胞增殖情况的影响,检测细胞培养上清中的LDH,MDA,NO含量及SOD活性,判断药物对内皮细胞的保护作用.通过Casepase-3活性检测以及ArnexinV-FITC/PI流式细胞术,检测药物对细胞凋亡的保护作用.使用Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.研究发现1 200μ.mol·L1H2O2能够诱导内皮细胞产生氧化应激损伤,使细胞存活率降低,且细胞增殖抑制程度与H2O2的作用时间呈正相关.而80,160,320,640 mg·L-1的复方银杏叶颗粒能够明显减轻该模型下内皮细胞的氧化应激损伤,恢复细胞正常增殖水平,改善细胞状态,抑制细胞凋亡,同时能够上调Bcl-2的表达以及下调Bax的蛋白表达.该实验证明了复方银杏叶颗粒对H2O2诱导的内皮细胞氧化应激损伤及细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与复方银杏叶颗粒抑制了内皮细胞凋亡的线粒体途径有关.
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复方银杏叶颗粒对H2O2致H9c2细胞损伤的保护作用
目的 观察复方银杏叶颗粒(YXY)对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的影响.方法 采用H2O2建立心肌损伤模型,给予YXY 25、50、100、200 /mL预处理24 h,MTT法测定细胞生存率,相差显微镜观察细胞形态学改变;试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶-MB (CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)水平;共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子浓度及线粒体膜电位.结果 H2O2500 μmol/L作用6h可显著降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤;YXY预处理可提高细胞生存率,改善损伤细胞形态学改变,减轻LDH、CK外漏,降低细胞上清中MDA、NO水平,增加SOD活性,减少H9c2细胞内ROS生成,降低细胞内钙离子浓度、减轻线粒体膜电位的下降.结论 YXY对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤有保护作用.
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复方银杏叶颗粒制备工艺研究
目的 优选复方银杏叶颗粒中银杏叶提取工艺.方法 以总黄酮醇苷的转移率为评价指标,采用正交实验设计优选提取工艺参数.结果 确定银杏叶提取的工艺为80％乙醇回流(80℃)2次,每次3h,银杏叶提取浓缩液用大孔吸附树脂的提纯研究.结论 该提取工艺为复方银杏叶颗粒制备及相关研究提供了一定科学依据.
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复方银杏叶颗粒中总黄酮醇苷的含量测定
目的:建立HPLC法测定复方银杏叶颗粒中总黄酮醇苷含量.方法:色谱柱为Hypersil BDS C18(250mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50);流速为1.0 mL/min;检测波长为360 nm.结果:槲皮素在7.5656~189.14 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999);山柰素在7.0832~177.08 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999);异鼠李素在4.6728~177.08 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999);总黄酮醇苷的平均回收率为100.9 %,RSD为1.2 %.结论:本方法操作简便、灵敏、可靠,具有良好的重复性和稳定性, 可用于复方银杏叶颗粒中总黄酮醇苷的检测.
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复方银杏叶颗粒对急性胰腺炎肝功能损害的保护作用
目的:探讨复方银杏叶颗粒对急性胰腺炎肝功能损害的保护作用.方法:选取2013年9月-2015年9月我院收治的重症急性胰腺炎(SAP)合并肝功能损害患者82例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各41例.对照组患者给予SAP相关常规治疗;观察组患者在对照组基础上给予复方银杏叶颗粒5 g加入温开水80 mL中溶解后经鼻饲胃管注入,tid.1周为1个疗程,共治疗2个疗程.观察两组患者腹痛缓解时间、血清淀粉酶恢复时间、住院时间及不良反应发生情况,检测两组患者治疗前后血清淀粉酶、丙氨酸转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、白蛋白(ALB)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肉毒素浓度、丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(TAC)、外周血中性粒细胞中核因子-κB(NF-κB)水平.结果:对照组患者脱落3例,38例完成研究;观察组患者脱落6例,35例完成研究.观察组患者腹痛缓解时间、血清淀粉酶恢复时间、住院时间明显短于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).两组患者治疗前血清淀粉酶、ALT、TBIL、AST、γ-GT、ALB、IL-6、TNF-α、肉毒素浓度、MDA、SOD、GSH-Px、TAC、NF-κB水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者血清淀粉酶、ALT、TBIL、AST、γ-GT、IL-6、TNF-α、肉毒素浓度、NF-κB、MDA水平显著降低,ALB、SOD、GSH-Px、TAC水平显著升高,且观察组显著优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:复方银杏叶颗粒能显著降低患者血清淀粉酶水平,保护肝功能,且安全性较好;其机制可能与抑制炎症因子释放、改善氧化应激反应、降低肉毒素浓度、抑制NF-κB活化有关.
