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黄芪丹参水煎液抑制ISO诱导的大鼠心肌重构及其下调STIM1,TRPC1,CaN和NFATc3表达的机制
探讨黄芪丹参水煎液(HDD)对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌重构抑制作用和对STIM1,TRPC1,CaM,CaN,NFATc3表达的影响. 皮下注射 ISO(2.5 mg·kg-1·d-1,14 d)建立大鼠心肌重构模型,随机分为对照组、ISO模型组、HDD5(HDD 5 g·kg-1·d-1+ISO)组、HDD10(HDD 10 mg·kg-1·d-1+ISO)组.干预4周后,计算心脏质量指数(HW/BW)和左心室质量指数(LVW/BW);超声心动图观察心肌结构;HE染色观察心肌组织病理学结构变化;ELISA检测血清中 BNP,CaN和CaM kinases Ⅱ的水平;Western blot检测左心室组织 STIM1,TRPC1,p-CaN,p-NFATc3和NFATc3蛋白的表达.结果显示,ISO组大鼠HW/BW和LVW/BW均大于HDD5组和HDD10组(P<0.05);超声心动图检查结果显示,HDD能够抑制 ISO诱导的LVEDD,LVESD增加;ELISA检测显示,HDD能明显抑制ISO致心肌重构大鼠血清中BNP,CaN和CaM kinases Ⅱ含量的升高(P<0.01).Western blot 检测结果显示,ISO组大鼠心肌组织STIM1,TRPC1,p-CaN,p-NFATc3和NFATc3表达升高,HDD给药后心肌组织内STIM1,TRPC1,p-CaN,p-NFATc3和NFATc3的表达均降低(P<0.05). 结果表明,黄芪丹参水煎液具有抑制ISO致大鼠心肌重构的作用,其机制与下调STIM1,TRPC1,CaM kinases Ⅱ,p-CaN/CaN和p-NFATc3/NFATc3表达有关.
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膳食辣椒素对醋酸脱氧皮质酮-盐型高血压大鼠肾脏氧化应激损害的保护作用
目的 观察膳食辣椒素对醋酸脱氧皮质酮(DOCA)-盐型高血压大鼠的肾脏保护作用.方法 10周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠16只,术后随机分成普食组和辣椒素组,每组8只;另取8只大鼠行假手术作为对照(假手术组).辣椒素组于术后给予含0.2 g/kg辣椒素饲料喂养,普食组与假手术组给予普通饲料喂养,膳食干预时间为8周.每周监测血压、体质量;干预8周后收集24 h尿液及取血浆观察肌酐、尿素氮、尿蛋白等指标;解剖显微镜下分离肾内小动脉行冰冻切片,利用超氧阴离子和一氧化氮的荧光探针染色后分析一氧化氮和超氧阴离子水平,Western blot法观察肾内小动脉解耦联蛋白2(UCP2)、硝基酪氨酸、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)和瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)蛋白表达的变化.结果 干预8周后,DOCA-普食组收缩压高于假手术组[(186.5±9.4)比(103.8±8.9)mm Hg,P＜0.01];肾内小动脉超氧阴离子水平升高,一氧化氮水平下降[DHE荧光强度(69.1±3.0)比(18.3±1.6),P＜0.01;DAF-2DA荧光强度:(15.0±1.1)比(27.0±0.8),P＜0.01];Western blot显示肾内小动脉组织TRPV1、p-eNOS下降(P＜0.01),硝基酪氨酸蛋白表达水平增加(P＜0.01);单肾质量/体质量、血尿素氮、24 h尿蛋白、血肌酐增加[分别(9.64±1.31)比(4.13±0.64)mg/g;(11.13±3.01)比(4.25±1.66) mmol/L,(44.85±8.50)比(7.48±1.07)mg/24 h,(71.47±9.32)比(36.97±2.32)μmol/L,均P＜0.05],肌酐清除率下降[(2.25±1.13)比(5.88±0.14) mL/min,P＜0.05].与DOCA-普食组相比,DOCA-辣椒素组肾内小动脉TRPV1和UCP2表达、肾内小动脉组织中p-eNOS蛋白表达水平、一氧化氮水平增加(均P＜0.01),硝基酪氨酸蛋白表达、超氧阴离子水平降低(均P＜0.01),血压[(160.3±7.3)比(186.5±9.4)mm Hg,P＜0.01]和肾功能指标[单肾质量/体质量:(7.94±1.08)比(9.64±1.31) mg/g;血尿素氮:(8.25±1.16)比(11.13±3.01)mmol/L;24 h尿蛋白:(31.54±6.45)比(44.85±8.50)mg/24 h;血肌酐:(60.32±5.13)比(71.47±9.32)μmol/L,均P＜0.05]降低.结论 辣椒素对DOCA-盐型高血压大鼠肾脏氧化应激损害有明显的保护作用,其机制涉及激活TRPV1,上调UCP2的表达,从而减轻氧化应激对肾脏的损害.
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TRPC1沉默对脑缺血大鼠神经干细胞迁移的影响
目的 探讨瞬时受体电位通道1(TRPC1)沉默对脑缺血大鼠内源性神经干细胞增殖、迁移和分化的影响.方法 SD大鼠分为假手术组、脑缺血组、TRPC1沉默组(脑缺血+TRPC1沉默)和阴性对照组,以脑室内注射siRNA沉默TRPC1,以线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)模型,脑缺血模型制作成功后,腹腔内注射Brdu标记内源性神经干细胞,分别于48 h、4 w后处死大鼠,行Brdu免疫组化染色、免疫荧光双标染色(Brdu/GFAP、Brdu/Neun)观察NSC的增殖、迁移和分化情况.结果 脑缺血后48 h,脑缺血组和TRPC1沉默组SVZ区Brdu阳性表达均较假手术组明显增多(P<0.01),但TRPC1沉默组Brdu阳性细胞数较缺血组低(P<0.01).脑缺血4 w后,缺血组与假手术组相比,皮质区具有更多的Brdu阳性细胞(P<0.01),同样TRPC1沉默组Brdu阳性细胞数多于假手术组,但明显低于脑缺血组(P<0.01);免疫荧光双标染色发现,脑缺血各组Brdu/GFAP、Brdu/Neun双阳性细胞的数量均比假手术组明显增高,但TRPC沉默组双阳性细胞显著少于脑缺血组和阴性对照组(P<0.01).结论 TRPC1沉默显著影响脑缺血大鼠SVZ区NSC的增殖、向脑缺血区迁移及向成熟细胞的分化.
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体外高糖环境对H9 c2心肌细胞中STIM1、Orai1及TRP C1的影响
目的构建体外高糖诱导的心肌损伤模型，观察体外高糖环境对H9c2心肌细胞的增殖以及基质作用分子1（ STIM1）、Orai1和瞬时受体电位通道1（ TRPC1）表达的影响。方法体外培养鼠胚H9c2心肌细胞，随机分为4组，正常对照组（5?5 mmol／L葡萄糖）、高渗组（27?5 mmol／L甘露醇＋5?5 mmol／L葡萄糖）、高糖组（33 mmol／L葡萄糖），药物组（2μmol／L SKF96365＋33 mmol／L葡萄糖）。培养72 h。采用CCK8技术检测细胞增殖率；采用RT?PCR以及Western blotting技术测定4组STIM1、Orai1及TRPC1的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果正常对照组和高渗组STIM1、Orai1及TRPC1的mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义（ P均＞0?05）；高糖组STIM1、Orai1及TRPC1的mRNA及蛋白相对表达量较正常对照组增加（ P均＜0?05）；药物组的表达量较正常对照组高（P均＜0?05），较高糖组下降（P均＜0?05）。结论体外高糖在一定程度上抑制心肌细胞增殖，促进STIM1、Orai1及TRPC1蛋白的表达，这可能是体外高糖环境下H9c2心肌细胞损伤的机制之一。
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胸腺五肽对老年慢性阻塞性肺疾病患者血清白细胞介素17A、趋化因子12水平及瞬时受体电位通道1表达的影响
目的 探讨胸腺五肽联合常规药物对老年COPD患者血清白细胞介素17A(IL-17A)、趋化因子12 (CXCL12)水平及瞬时受体电位通道1(TRPCl)表达的影响.方法 选择156例COPD患者为研究对象,按照随机数字表法分为两组(n=78).对照组进行常规治疗;观察组在常规治疗的基础上进行胸腺五肽皮下注射.测定治疗前后CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平以比较两组免疫功能,治疗前后测定1秒用力呼气容积(FEV1)、残气量/肺总量比率(FEV1/FVC)及大呼气流量(PEF)以比较两组肺通气功能,测定和比较两组患者治疗前后外周血IL-17A、CXCL12水平及肺泡灌洗液中TRPC1水平.比较两组患者的不良反应.结果 治疗前,两组CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+差异均无统计学意义(均P＞0.05);治疗后,对照组未发生显著变化(P＞0.05),观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+[(65.17±2.39)％、(41.06 ±2.15)％、(1.50±0.74)％]显著高于对照组[(52.66±2.38)％、(32.30±2.05)％、(0.80±0.81)％],CD8+ (24.02±2.23)％显著低于对照组[(32.66±1.97)％,P＜0.05].治疗前,两组患者FEV1、FEV1/FVC、PEF均无显著差异(均P＞0.05);治疗后两组患者的FEV1、FEV1/FVC、PEF均显著升高(均P＜0.05),且观察组均显著高于对照组(均P＜0.05).治疗前两组患者外周血IL-17A、CXCL12水平及肺泡灌洗液中TRPC1水平差异均无统计学意义(均P＞0.05);治疗后,观察组患者外周血IL-17A[(24.18±3.69) pg/mL]、CXCL12水平[(193.50 ±2.90) pg/mL]及BALF中TRPC1水平[(7.69±1.14)ng/L]显著降低(P＜0.05),对照组患者外周血IL-17A[(34.25±3.74) pg/mL]、CXCL12水平[(205.37±3.21) pg/mL]及BALF中TRPC1水平[(14.25±1.20) ng/L]也显著降低(P＜0.05),且观察组显著低于对照组(P＜0.05).观察组和对照组的不良反应的总发生率为16.67％、12.82％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 胸腺五肽联合常规药物治疗能显著提高老年COPD患者的免疫功能,改善肺通气功能,降低炎症因子,缓解炎症反应,安全有效.
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血管性抑郁患者血清瞬时受体电位通道1蛋白水平的改变
目的 了解血管性抑郁患者血清中瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)的改变.方法 选取血管性抑郁患者58名,原发性抑郁症患者49名,健康对照者38名.通过ELISA技术,检测受试者血清中TRPC1的水平.使用HAMD?17测评抑郁患者的严重程度.分析不同年龄阶段TRPC1的改变;分析不同致病原因(脑梗死、缺血性脑血管病、陈旧性脑出血、脑微量出血、血管危险因素等)所致血管性抑郁患者间TRPC1水平的差异;进一步分析TRPC1水平与抑郁症状严重程度之间的关系.结果 (1)所有血管性抑郁患者的血清TRPC1水平[(643.76±118.43)pg/ml]低于健康对照组[(712.48±98.75)pg/ml],60岁以上的血管性抑郁患者的TRPC1水平[(601.43±113.55)pg/ml]明显低于60岁以上原发性抑郁患者[(626.32±125.46)pg/ml]和60岁以上健康被试[(721.84±99.62)pg/ml].(2)在导致血管性抑郁的各种原因当中,脑梗死、缺血性脑血管病、脑微量出血的患者TRPC1水平明显降低(P<0.05),而陈旧性脑出血、血管危险因素的患者TRPC1改变不明显(P>0.05).(3)血管性抑郁组(r=-0.962,P<0.05)和原发性抑郁组(r=-0.674,P<0.05)的血清TRPC1水平与HAMD?17评分均呈负相关.结论 TRPC1水平在血管性抑郁患者中较低,在脑梗死、缺血性脑血管病、脑微量出血所导致的血管性抑郁患者中改变更明显.TRPC1水平越低,抑郁程度越重.TRPC1对血管性抑郁患者的神经血管保护作用降低,可作为血管性抑郁研究的生物学标志.
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针刺预处理对瞬时受体电位通道1介导的大鼠心肌缺血改善作用
目的 通过观察针刺预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中瞬时受体电位通道1(TRPC1)的表达,进而揭示针刺预处理对心肌保护作用的机理.方法 选择Wistar大鼠为受试对象,心肌缺血前给予针刺,采用推管法结扎大鼠冠状动脉左前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,心肌缺血再灌注损伤后用Elisa法测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)含量变化,在心肌损伤区采用免疫组化法观察心肌组织TRPC1的表达变化,原代培养各组心肌组织并检测各组心肌细胞钙离子浓度.结果 与正常组、假手术组比较,心肌缺血组血清中VEGF含量减少(P＜0.05);与心肌缺血组比较,针刺预处理组血清中VEGF含量升高(P＜0.05);与心肌缺血组比较,针刺预处理组心肌TRPC1的表达明显增加(P＜0.05),而且心肌细胞内钙离子浓度明显降低(P＜0.05).结论 针刺预处理对心肌缺血大鼠心肌具有保护作用;其保护作用机制可能是通过增加心肌中表达TRPC1和降低细胞内钙离子浓度实现的.
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TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成
目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用.方法 取2～3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达.将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+];和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用.结果 与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P＜0.05);在四种不同处理作用下,TRPC1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05);与Control组、TRPC1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05);TRPC1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的刺激下作用增强.结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成.
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钙离子信号蛋白TRPC1及Orai1参与了HUVEC经SOC和ROC介导的钙内流和NO生成
目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)及钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导的Ca2+内流和一氧化氮(N0)生成中的作用.方法 取2～3代HUVEC进行随机分组,将构建的TRPC1、Orai1干扰质粒(shTRPC1、shOrai1)分别转染入HUVEC,采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、Orai1 mRNA和蛋白的表达及转染抑制效率.将各组细胞分别与钙敏感受体(CAR)激动剂精胺、ROC模拟剂(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220与经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化.结果 与对照组比较,shTRPC1组和shOrai1组mRNA表达(抑制率分剐为84.50％、76.10％)和蛋白的表达(抑制率分别为83.98％、71.73％)明显降低(P＜0.05).在4种不同药物作用下,shTRPC1组和shOrai1组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05).结论 TRPC1、Orai1参与了人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成.
关键词： 瞬时受体电位通道1 钙释放激活钙通道调节分子1 钙敏感受体 钙离子 一氧化氮 -
TRPC1在 TGF-β1诱导支气管上皮细胞迁移中的作用
目的：探究经典瞬时受体电位通道1（TRPC1）在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人支气管上皮细胞（16HBE）迁移中的作用。方法： siRNA沉默TRPC1；CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡；细胞划痕和Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭。 Western blot检测E-钙黏蛋白和vimentin的蛋白表达。结果：TGF-β1刺激细胞后，TGF-β1组细胞的迁移距离大于对照组（P＜0.01）。 TGF-β1组和TRPC1沉默组的细胞活力和凋亡与对照组相比差异不显著；与TGF-β1组细胞比较， siRNA和 TGF-β1共同作用组迁移能力明显降低（ P＜0.01）。与 TGF-β1组相比，siRNA 沉默TRPC1和 TGF-β1共同作用组 E-钙黏蛋白的蛋白表达明显降低（ P ＜0.05），而vimentin的蛋白表达明显增强（P＜0.05）。结论：TRPC1通过调节E-钙黏蛋白和vimentin 的蛋白表达参与了TGF-β1诱导人支气管上皮细胞迁移的过程。
