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艾滋病免疫重建不全患者TCRVβ基因多样性改变及药物干预研究
目的:探讨艾滋病免疫重建不全患者的TCRVβ基因多样性改变及中药免疫2号方的干预作用.方法:采集37例艾滋病免疫重建不全患者治疗前后的外周血PBMC,另以15例HIV抗体阴性健康献血员做对照,采用人类TCRVβ基因CDR3多样性定量检测试剂盒检测,基因扫描作图并计算Vβ家族中每个家族不同大小CDR3区片段的分布.结果:HAART治疗后1年免疫重建不全患者的TCRVβ多个家族的扫描图高斯分布被打破,并发生TCR谱系的偏移,经半年中药联合HAART治疗后,偏移的TCR谱系有所恢复.以试剂盒提供的定量分析软件计算的距离D(distance)值来量化评价,2组D值改变无明显差异,但联合中药能减少数据的变异性.CD4+T细胞计数与TCRVβ基因多样性改变两者存在显著的相关关系(r=-0.772,P=0.000).结论:中药复方对于TCRVβ各家族单寡克隆情况有不同程度的改善和恢复,提示中医药可能促进T细胞部分受体基因重排,丰富受体库,帮助机体免疫细胞有效识别病毒,减少T细胞凋亡.
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T大颗粒淋巴细胞白血病2例
例1．女，65岁，因左下肢肿痛伴发热1周于2011年9月1日入院。查体：双侧颈部及腋下可扪及多发淋巴结肿大，无压痛，直径约2 cm ×1 cm，无贫血貌，肝脾肋下未及。实验室检查：血WBC 11．08×109／L，L 0．88，PLT 141×109／L，Hb 118 g／L；外周血淋巴细胞亚群：CD3＋98．2％、CD3＋CD4＋5．8％、CD3＋CD8＋91．8％，CD1＋91．9％、CD5＋60．3％；抗核抗体1∶1000（＋）；外周血涂片：幼稚淋巴细胞3％，成熟淋巴细胞93％；骨髓涂片：成熟淋巴细胞65％，可见大量颗粒淋巴细胞。 B型超声提示脾脏轻度大（10．8 cm ×4．1 cm）。外周血流式细胞仪检查：淋巴细胞占94．5％，其中CD3＋CD8＋细胞约占淋巴细胞的90％，同时表达CD2＋98．72％、CD5＋37．44％、CD7＋90．55％，CD5＋752．3％， CD5－6，TCRαβ（＋）；TCRvβ单克隆性阳性， TCR受体重排阳性。诊断T大颗粒淋巴细胞白血病。给予患者小剂量甲氨蝶呤（ MTX）口服，患者不能耐受不良反应，自行停药，未再服用任何与治疗本病相关药物。2012年12月，患者因反复头痛、恶心不适2个月，头颅MR检查提示额部中线区可见团状异常信号影，大小2．7 cm ×3．7 cm ×4．0 cm，考虑白血病颅内侵犯。患者拒绝腰穿等进一步检查及治疗，2014年8月患者死亡。
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乙肝疫苗免疫前后人TCRVβ基因亚家族取用表达的研究
目的:研究T细胞受体(TCR)Vβ基因亚家族在免疫后的表达特征.方法:运用RT-PCR及 Southem blot技术对乙肝疫苗免疫前后健康成年人TCR Vβ1-20基因亚家族的表达水平进行了半定量研究.结果:Vβ6、Vβ14基因亚家族的表达增高;Vβ4、Vβ9基因亚家族的表达下调.结论:免疫后诱导产生了HBsAG特异的T细胞应答,该结果为制定预防和治疗HBV感染的免疫策略提供了新的依据.
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vMIP-Ⅱ对SIV感染的食蟹猴TCRVβ基因表达的影响
目的 检测感染SIV初期用病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)治疗的食蟹猴外周血T细胞TCRVβ优势表达,分析特异性Vβ亚家族表达水平的变化及T细胞克隆性质的改变.方法 11只食蟹猴感染前后外周血PBMC样本共22例通过半定量RT-PCR技术分析其中14个TCRVβ亚家族T细胞的表达情况,运用基因扫描技术分析用药组与感染组差异表达的T细胞TCRVβ7亚家族基因中CDR3的长度了解其克隆性.结果 与感染前正常食蟹猴外周血T细胞的14个TCRVβ亚家族中表达(除去表达量极低的10个亚家族)相比较,感染后SIV组中部分样品Vβ7、8、14、16的表达量与感染前比较有上升趋势;vMIP-Ⅱ组中TCRVβ亚家族的表达量上升更加明显.基因扫描结果显示感染前、后标本中Vβ7亚家族的表达由多克隆向寡克隆变化的趋势.结论 体内实验研究表明,SIV感染初期的食蟹猴体内部分TCRVβ亚家族有特异性的增生,且克隆性发生改变.vMIP-Ⅱ对此种Vβ亚家族的表达的增生有促进的作用,推测其促使特异性应答的免疫细胞的增生.
关键词： 病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ TCRVβ RT-PCR 基因扫描 -
T细胞CTLA-4、TCRVβ8基因克隆、重组及表达
目的 克隆Graves'病患者甲状腺组织T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和TCRVβ8目的 基因,重组为CTLA-4-TCRVβ8基因并表达出融合蛋白.方法 RT-PCR从Graves'病患者甲状腺组织中克隆T淋巴细胞的CTLA-4胞外段和TCRVβ8基因,依次与表达质粒进行连接,双酶切及测序鉴定获得正确的重组子;原核表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western-Blotting检测蛋白表达情况.结果 基因克隆扩增出CTLA-4和TCRVβ8目的 基因片段,测序结果 证实序列与已发表的一致.重组基因原核表达出与预期分子质量大小相符的目的 蛋白.结论 成功构建和表达了CTLA-4-TCRVβ8基因,为探索Graves'病免疫耐受治疗提供了基因产品.
