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新风胶囊对强直性脊柱炎患者疗效及血清免疫球蛋白亚型、外周血淋巴细胞自噬的影响
目的 观察新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)患者的症状体征、血清免疫球蛋白、外周血淋巴细胞自噬蛋白、自噬基因的影响,探讨其作用机制.方法 将59例AS患者按随机数字表法分为2组,治疗组(39例)和对照组(20例),治疗组给予XFC治疗,每次3粒,每日3次;对照组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗,每次4片,每日2次.治疗3个月.统计Bath强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)及Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI);采用ELISA法检测两组血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM)水平,采用Western blot检测两组的淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、PI3K、Akt、mTOR水平,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检查血清自噬相关基因Atg1、Atg5、Atg12、Atg13、Atg17表达改变.采用Spearman相关分析方法比较AS患者免疫球蛋白亚型与细胞自噬基因的相关性.结果 与治疗前比较,治疗组治疗后BASDAI、IgG1、IgG3、IgA水平下降(P＜0.O1),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降(P＜0.01),ATG1、ATG12、ATG13、ATG17 mRNA表达下降,ATG5 m RNA表达升高(P＜0.01);对照组BASDAI、IgG1、IgA水平下降(P＜0.05,P＜0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降(P＜0.05),ATG1、ATG13 m RNA表达下降(P ＜0.05,P＜0.01).与对照组比较,治疗组BASDAI、IgG1、IgA水平下降(P＜0.05),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下降(P＜0.01),ATG12、ATG17 mRNA表达下降,ATG5mRNA表达升高(P＜0.01).相关分析结果显示,AS患者IgG1、IgG2、IgG3、IgA、SlgA、IgM与ATG17呈负相关,IgG4与ATG17呈正相关(P ＜0.05,P＜0.01).结论 XFC提高AS患者临床疗效,其增强AS患者细胞自噬的机制可能为作用于PI3 K/Akt/m TOR信号,影响自噬基因和自噬蛋白的表达,参与调节B淋巴细胞的增殖和分化,加强体液免疫.
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自噬与糖尿病肾病相关性研究进展
自噬是细胞为应对内外环境压力变化而出现的一种正常反应，是细胞内物质成分被溶酶体降解的过程。近年来研究发现，自噬在糖尿病肾病（DN）的发生发展中起着重要作用，是DN治疗的潜在靶点，与肾足细胞的生长发育和生理病理活动密切相关，是一种细胞的自我保护机制，调控自噬相关信号通路可影响DN发生发展。因此，本文就DN的发病机制、自噬在肾固有细胞中的作用以及调控自噬相关信号通路对糖尿病肾病发生发展的影响等方面进行综述。
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自噬与2型糖尿病相关性的研究进展
自噬是细胞对内外界环境压力变化的一种反应，是细胞内的物质成分被溶酶体降解的过程。近年研究发现自噬在2型糖尿病的发生发展中起着重要作用，与胰岛β细胞的数量和胰岛素的分泌密切相关，是一种细胞的自我保护机制，自噬的激活与调节对于维持胰岛β细胞的结构和功能方面必不可少。此外，研究发现一些治疗2型糖尿病的药物也参与了自噬途径的调节。因此，本文就自噬在维持胰岛β细胞结构和功能中重要作用，自噬通路的调节，以及自噬与2型糖尿病药物的相关性等方面进行综述。
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骨关节炎大鼠软骨 PI3K／Akt-mTOR及Beclin-1自噬通路的表达及相关性分析
目的：观察骨关节炎（OA）大鼠软骨自噬基因（Atg5、Atg7、Atg12）以及自噬相关蛋白mTOR、Beclin‐1、PI3K、Akt、LC3‐Ⅱ的表达，并分析其与IL‐4、IL‐10、IL‐1β、TNF‐α的相关性。方法20只大鼠随机分为正常组和模型组，每组各10只。模型组大鼠采用关节腔注射木瓜蛋白酶（Papain）和 L‐半胱氨酸（L‐cystine）方法制成骨关节炎大鼠模型。以光镜对大鼠软骨进行Mankin标准评分，以电镜观察OA大鼠软骨中自噬小体的形态及数目；采用荧光定量PCR检测软骨Atg5、Atg7、Atg12的表达，采用免疫印迹法（Western blot）检测软骨mTOR、Beclin‐1、PI3K、Akt、LC3‐Ⅱ的表达，采用ELISA法检测血清细胞因子IL‐4、IL‐10、IL‐1β、TNF‐α水平。结果与正常组大鼠比较，OA大鼠关节软骨Mankin评分明显升高（P＜0.01）；Atg5在软骨中降低（P＜0.01），并与IL‐4、IL‐10呈正相关（均 P＜0.01），与IL‐1β、TNF‐α呈负相关（P＜0.05或 P＜0.01）；Atg7在软骨中降低（P＜0.01）；mTOR在软骨中升高（P＜0.05），PI3K、Akt在软骨中均升高（均 P＜0.01），并与IL‐4、IL‐10呈负相关（ P＜0.05或 P＜0.01），与IL‐1β、T N F‐α呈正相关（ P＜0.05或 P＜0.01）；LC3‐Ⅱ、Beclin‐1在软骨中降低，与IL‐4、IL‐10呈正相关（ P＜0.05或 P＜0.01），与IL‐1β、T N F‐α呈负相关（ P＜0.05或P＜0.01）。结论 OA大鼠软骨在Mankin评分升高的同时，出现Atg5及Atg7表达的降低，PI3K／Akt‐mTOR通路上调，Beclin‐1下调，自噬受抑制，此过程可能参与OA软骨病变。
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提取的尿蛋白及糖基化终产物对肾小管上皮细胞自噬通路的影响
目的 探讨尿蛋白超负荷及糖基化终产物对肾小管上皮细胞(TECs)自噬活性的影响.方法 在广东医学院附属医院肾脏病理库中选择微小病变肾病综合征(MCNS)及糖尿病肾病(DN)患者的肾组织,以临床表现为血尿而肾组织活检基本正常的标本为对照,免疫染色观察自噬膜蛋白-微管相关蛋白轻链3(LC3-Ⅱ)在肾脏的表达.分别以提取的MCNS患者的尿蛋白(8 g/L)以及晚期糖基化终产物-牛血清白蛋白(AGE-BSA,100 mg/L)刺激人肾小管上皮细胞(HK-2细胞株),Western印迹检测LC3-Ⅱ蛋白表达,以溶酶体抑制剂(亮肽素200 mg/L或氯喹10 μmol/L)阻断溶酶体对自噬的降解,观察LC3-Ⅱ的转化;转染tfLC3质粒以观察溶酶体与自噬泡融合及降解的情况;分别以自噬诱导剂雷帕霉素(10 μmol/L)以及自噬抑制剂氯喹(10 μmol/L)增强及抑制自噬后,ELISA法检测细胞损伤因子中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白(NGAL)及肾损伤分子-1(KIM-1).结果 (1)与正常对照组相比,MCNS及DN患者TEC内LC3-Ⅱ蛋白表达明显增加(P＜0.01).(2)尿蛋白刺激后,HK2细胞LC3-Ⅱ蛋白表达显著增多(P＜0.01),且自噬抑制剂亮肽素使LC3-Ⅱ表达进一步增加;(3)通过转染tfLC3质粒,观察到尿蛋白刺激使HK2细胞早期自噬体及自噬溶酶体都明显增加(P＜0.01).(4)AGE-BSA刺激HK2细胞后,LC3-Ⅱ表达也明显增多(P＜0.01),但自噬抑制剂氯喹并未使LC3-Ⅱ蛋白表达进一步增加;(5)通过转染tfLC3质粒,观察到AGE-BSA刺激可使早期自噬体增多(P＜0.01),但无晚期自噬体增多(自噬泡不能被降解).(6)自噬诱导剂雷帕霉素可降低尿蛋白诱导的细胞损伤因子NGAL和KIM-1的上调,自噬抑制剂氯喹则作用相反.结论 尿蛋白可激活TEC自噬活性,但AGE-BSA则在下游阻断自噬通路而降低自噬活性.自噬通路的激活可能在原发和继发性肾病所致TEC损伤中发挥重要作用.
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黄芪甲苷调控LC3/mTOR自噬通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨LC3/mTOR自噬通路调控黄芪甲苷在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用和意义.方法 将50只成年雄性Wistar大鼠构建大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型,随机分为对照组、模型组、雷帕霉素(RAPA)组、3-MA 组、黄芪甲苷(AST)组.采用灌胃方法在造模前分别灌注雷帕霉素,3-MA和黄芪甲苷.按Longa评分标准进行神经功能缺陷评分;计算梗死灶体积和 HE染色观察脑损伤情况;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测 mTOR、LC3、Beclin-1、ATG5、SQSTM1/p62 和Caspase-3 mRNA和蛋白质表达.结果 与模型组相比,RAPA组、3-MA 组、AST 组Longa评分显著降低,梗死面积(% )显著减少,差异有统计学意义(P＜0 .05) .黄芪甲苷治疗后,大鼠Longa评分低,梗死面积(% )少,差异有统计学意义(P＜0 .05).与模型组相比,AST 组mTOR 、p62和Caspase-3 mRNA和蛋白质水平显著降低,LC3和Beclin-1 mRNA和蛋白质水平显著升高,差异有统计学意义(P＜0 .05).结论 黄芪甲苷可以有效治疗和缓解大鼠MCAO ,LC3/mTOR自噬通路在此过程中发挥重要的作用.
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强直性脊柱炎患者免疫球蛋白及细胞自噬的变化及相关性分析
目的:分析39例强直性脊柱炎患者和20例健康体检者的血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM)、淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、自噬指标微管相关蛋白l轻链(LC3-Ⅱ)、磷脂酰肌醇三磷酸激酶(PI3K)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),观察上述指标的变化并对其相关因素进行分析.方法:选取39例强直性脊柱炎患者为AS组,另设20例健康体检者为健康对照组,采用ELISA方法检测2组血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM),运用Western blot方法检测2组淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、PI3K、AKT、mTOR的变化.结果:①2组免疫球蛋白比较,IgA、IgG1、IgG3较健康对照组显著升高(P<0.05或P<0.01).②2组细胞自噬相关指标比较,PI3K、mTOR较健康对照组明显升高(P<0.05或P<0.01).③相关性分析结果显示,AS患者PI3K与LC3-Ⅱ呈负相关.④相关性分析结果显示,AS患者IgG1、IgG2、IgG3、IgG4与mTOR呈正相关,SIgA与Beclin1呈正相关.结论:AS患者存在体液免疫功能的紊乱和细胞自噬指标的变化,且各项指标存在一定的相关性.
