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新风胶囊对强直性脊柱炎患者疗效及血清免疫球蛋白亚型、外周血淋巴细胞自噬的影响
目的 观察新风胶囊(XFC)对强直性脊柱炎(AS)患者的症状体征、血清免疫球蛋白、外周血淋巴细胞自噬蛋白、自噬基因的影响,探讨其作用机制.方法 将59例AS患者按随机数字表法分为2组,治疗组(39例)和对照组(20例),治疗组给予XFC治疗,每次3粒,每日3次;对照组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)治疗,每次4片,每日2次.治疗3个月.统计Bath强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)及Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI);采用ELISA法检测两组血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM)水平,采用Western blot检测两组的淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、PI3K、Akt、mTOR水平,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检查血清自噬相关基因Atg1、Atg5、Atg12、Atg13、Atg17表达改变.采用Spearman相关分析方法比较AS患者免疫球蛋白亚型与细胞自噬基因的相关性.结果 与治疗前比较,治疗组治疗后BASDAI、IgG1、IgG3、IgA水平下降(P＜0.O1),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降(P＜0.01),ATG1、ATG12、ATG13、ATG17 mRNA表达下降,ATG5 m RNA表达升高(P＜0.01);对照组BASDAI、IgG1、IgA水平下降(P＜0.05,P＜0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达下降(P＜0.05),ATG1、ATG13 m RNA表达下降(P ＜0.05,P＜0.01).与对照组比较,治疗组BASDAI、IgG1、IgA水平下降(P＜0.05),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平下降(P＜0.01),ATG12、ATG17 mRNA表达下降,ATG5mRNA表达升高(P＜0.01).相关分析结果显示,AS患者IgG1、IgG2、IgG3、IgA、SlgA、IgM与ATG17呈负相关,IgG4与ATG17呈正相关(P ＜0.05,P＜0.01).结论 XFC提高AS患者临床疗效,其增强AS患者细胞自噬的机制可能为作用于PI3 K/Akt/m TOR信号,影响自噬基因和自噬蛋白的表达,参与调节B淋巴细胞的增殖和分化,加强体液免疫.
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3-氢化松苓酸B诱导人胃癌HGC-27细胞的程序性死亡
目的 研究3-氢化松苓酸B对人胃癌细胞HGC-27程序性死亡的影响.方法 MTT法测定细胞增殖.流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率.吖啶橙染色及透射电镜观察细胞自噬;Western blot法检测自噬相关蛋白的表达.结果 3-氢化松苓酸B对HGC-27细胞的增殖具有抑制作用,并呈明显的时间、剂量依赖性.10、20、40 μmol/L 3-氢化松苓酸B处理HGC-27细胞24 h后,可将细胞阻滞于Go/G1期,但对细胞凋亡无明显影响.20 μmol/L 3-氢化松苓酸B处理HGC-27细胞24 h后,透射电镜观察到大量自噬泡和自噬体,细胞自噬比例随浓度增加而显著提高;3-氢化松苓酸B促进Ⅰ型微管相关蛋白1轻链3 (LC3 Ⅰ)向Ⅱ型微管相关蛋白1轻链3(LC3 Ⅱ)转化,上调肌球蛋白样B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)结合蛋白(Beclin-1)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A (p21)的表达,并抑制G1/S-特异性周期蛋白-D1 (CyclinD1)的表达.结论 3-氢化松苓酸B可诱导HGC-27细胞发生自噬性死亡,但是对细胞凋亡无明显影响.
关键词： 3-氢化松苓酸B 人胃癌细胞HGC-27 凋亡 自噬 自噬蛋白 -
膜性肾病组织中足细胞自噬体数量、自噬相关蛋白表达变化及其意义
目的 观察特发性膜性肾病(IMN)和继发性膜性肾病(SMN)病灶组织中足细胞自噬体数量、自噬相关蛋白表达变化,探讨足细胞自噬与膜性肾病的关系.方法 收集92例IMN患者(IMN组)、22例SMN患者(SMN组)的病肾组织标本,及30例因外伤、输尿管肿瘤等其他原因行肾切除手术者(对照组)的正常肾组织标本.观察各组肾组织病理变化、足细胞结构,计算足细胞自噬体数量;分析足细胞自噬体数量与膜性肾病临床病理参数的关系;采用Western blotting法检测各组肾组织中的自噬蛋白Beclin-1、微管相关蛋白轻链3(LC3).结果 IMN组、SMN组、对照组足细胞自噬体数量分别为(2.63±0.94)、(2.58±0.52)、(3.22±0.86)个,IMN组和SMN组足细胞自噬体数量较对照组减少(P均<0.05).IMN组、SMN组中,临床分期为Ⅱ期、24 h尿蛋白量(24 h UP)≥3.5 g/L、血清白蛋白(Alb)≥30 g/L、估算肾小球滤过率(eGFR)≥60 mL/(min·1.73 m2)的患者足细胞自噬体数量分别少于临床分期为Ⅰ期、24 h UP<3.5 g/L、Alb<30 g/L、eGFR<60 mL/(min·1.73 m2)的患者(P均<0.05).IMN组和SMN组足细胞自噬体数量与24 h UP、eGFR、血肌酐、尿素氮均无相关性(P均>0.05).IMN组和SMN组肾组织中LC3、Beclin-1相对表达量均低于对照组(P均<0.05).结论 IMN、SMN患者病肾组织中足细胞自噬体数量减少,自噬相关蛋白表达降低;自噬可能与膜性肾病患者足细胞损伤过程密切相关,随着病情进展,足细胞自噬活性下降.
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加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道平滑肌中自噬蛋白表达的干预作用
目的 观察咳嗽变异性哮喘大鼠气道平滑肌中自噬蛋白表达情况及加味芎蝎散的干预作用.方法 40只大鼠随机分为4组:空白对照组,模型组,孟鲁司特钠组,中药组.Masson法检测胶原沉积、气道壁平滑肌细胞增生,免疫组化和WB法检测自噬蛋白LC3和Beclin1表达情况.结果 与对照组相比,CVA大鼠平滑肌组织增生、肥大,胶原沉积,纤维化程度增强.免疫组化和WB实验证实,CVA大鼠自噬蛋白Beclin1和LC3明显降低,而中药组有明显的缓解作用.结论 加昧芎蝎散可能通过增强气道平滑肌中自噬蛋白的表达来抑制气道重塑.
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抑制DNA-PKcs对放射治疗后食管鳞癌细胞系EC109自噬蛋白表达和增殖的影响
目的 研究抑制DNA-PKcs对放射照射(X-Ray)后食管鳞癌细胞EC109自噬蛋白表达和增殖的影响.方法 用NU7441抑制DNA-PKcs;放射照射处理食管鳞癌细胞EC109;实验共分为4组(对照组、NU7441组、X-Ray组、X-Ray+ NU7441组).蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬蛋白Beclin-1及LC3B的表达;流式细胞术检测凋亡;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况.结果 p-DNA-PKcs在NU7441处理食管鳞癌细胞EC109后表达降低,X-Ray照射后表达升高.与未处理细胞(对照组)相比,X-Ray+NU7441组Beclin-1及LC3B均表达升高,与X-Ray组相比,X-Ray+NU7441组Beclin-1表达升高.与对照组相比,X-Ray组及X-Ray+NU7441组凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与X-Ray组相比,X-Ray+ NU7441组细胞凋亡率明显增加.M T T 结果显示,与对照组相比,X-Ray组及X-Ray+ NU7441组增殖明显被抑制,差异有统计学意义(P<0.05).结论 NU7441抑制EC109细胞DNA-PKcs蛋白表达后,可促进肿瘤细胞自噬蛋白Beclin-1和LC3B表达,促进凋亡、抑制细胞增殖.
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强直性脊柱炎患者免疫球蛋白及细胞自噬的变化及相关性分析
目的:分析39例强直性脊柱炎患者和20例健康体检者的血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM)、淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、自噬指标微管相关蛋白l轻链(LC3-Ⅱ)、磷脂酰肌醇三磷酸激酶(PI3K)、AKT、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),观察上述指标的变化并对其相关因素进行分析.方法:选取39例强直性脊柱炎患者为AS组,另设20例健康体检者为健康对照组,采用ELISA方法检测2组血清免疫球蛋白(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、SIgA、IgM),运用Western blot方法检测2组淋巴细胞自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、PI3K、AKT、mTOR的变化.结果:①2组免疫球蛋白比较,IgA、IgG1、IgG3较健康对照组显著升高(P<0.05或P<0.01).②2组细胞自噬相关指标比较,PI3K、mTOR较健康对照组明显升高(P<0.05或P<0.01).③相关性分析结果显示,AS患者PI3K与LC3-Ⅱ呈负相关.④相关性分析结果显示,AS患者IgG1、IgG2、IgG3、IgG4与mTOR呈正相关,SIgA与Beclin1呈正相关.结论:AS患者存在体液免疫功能的紊乱和细胞自噬指标的变化,且各项指标存在一定的相关性.
