肝X受体激动剂T0901317对肝癌血管生成的作用及机制

目的 探讨肝脏X受体激动剂T0901317对肝细胞癌血管生成的作用及机制.方法 采用实验研究方法.人肝癌细胞MHCC97-H、人肝癌细胞Huh7、人脐静脉内皮细胞HUVEC各自的空白组、低浓度组、高浓度组分别加入0、1、3 μmoL/L T0901317.采用CCK-8法检测各组细胞生长情况.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析各组细胞肝脏X受体靶基因脂肪酸合成酶(FAS) mRNA相对表达量.测量MHCC97-H裸鼠模型(MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组)皮下肿瘤体积和体质量.处死裸鼠后获取肿瘤组织.采用免疫组织化学染色检测裸鼠肿瘤组织中肿瘤血管生成标志物CD31相对表达量.采用Transwell法检测HUVEC各组细胞迁移能力和成血管能力.观察指标:(1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响.(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用.(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响.(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响.(5) T0901317对HUVEC迁移能力的影响.(6) T0901317对HUVEC成血管能力的影响.正态分布的计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验.结果 (1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响.CCK-8法细胞生长实验结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±1.7％、101.0％±0.7％、104.6％±1.9％,3组比较,差异无统计学意义(F=2.632,P＞0.05).Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±2.7％、97.6％±2.4％、103.7％±2.8％,3组比较,差异无统计学意义(F=1.404,P＞0.05).HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±0.7％、100.7％±1.2％、101.3％±0.8％,3组比较,差异无统计学意义(F=0.471,P＞0.05).(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用.实时荧光定量PCR结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±2.2％、658.5％±7.7％、1 241.0％±106.8％,3组比较,差异有统计学意义(F=46.227,P＜0.05).其中MHCC97-H空白组分别与MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=70.025,8.274,P＜0.05);MHCC97-H低浓度组与MHCC97-H高浓度组比较,差异有统计学意义(t=4.222,P＜0.05).Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±15.8％、1 225.0％±26.7％、2 015.0％±215.1％,3组比较,差异有统计学意义(F=49.402,P＜0.05).其中Huh7空白组分别与Huh7低浓度组、Huh7高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=39.460,8.879,P＜0.05);Huh7低浓度组与Huh7高浓度组比较,差异有统计学意义(t=2.836,P＜0.05).HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±19.6％、790.8％±116.5％、1 756.0％±55.0％,3组比较,差异有统计学意义(F=185.395,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=7.639,34.375,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=7.488,P＜0.05).(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响.MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长实验结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤体积分别为(935±72) mm3和(552±47)mm3,两组比较,差异有统计学意义(t=4.449,P＜0.05).MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型体质量分别为(23.8±0.8)g和(21.7±1.7)g,两组比较,差异无统计学意义(t=1.059,P＞0.05).(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响.免疫组织化学染色检测结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31相对表达量分别为100％±11％和35％±7％,两组比较,差异有统计学意义(t=4.919,P＜0.05).(5)T0901317对HUVEC迁移能力的影响.Transwell法细胞迁移实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组穿膜细胞百分比分别为100.0％ ±4.0％、57.3％±1.5％、32.7％±1.7％,3组比较,差异有统计学意义(F=163.944,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=9.998,15.434,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=10.801,P＜0.05).(6)T0901317对HUVEC成血管能力的影响.细胞成血管实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组成血管长度相对值分别为100.0％±3.4％、68.4％±3.5％、44.7％±0.5％,3组比较,差异有统计学意义(F=38.964,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=6.268,9.831,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=3.460,P＜0.05).结论 肝脏X受体激动剂T0901317可抑制肝细胞癌血管生成.