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肝X受体激动剂T0901317对血糖波动下人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响
目的 研究肝X受体(LXRs)激动剂T0901317对血糖波动条件下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的葡萄糖和T0901317处理HUVEC,采用CCK8法检测HUVEC增殖情况;Western印迹法检测Akt蛋白、p-Akt(Ser473)蛋白表达.结果 血糖波动抑制HUVEC的增殖及p-Akt(Ser473)蛋白的表达(P<0.05).T0901317促进血糖波动损伤后HUVEC的增殖(P<0.05),上调p-Akt(Ser473)蛋白表达(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05).此外,PI3K/Akt抑制剂LY294002(10 μmol/L)可以阻断T0901317上调p-Akt(Ser473)蛋白表达的作用(P<0.05).结论 血糖波动通过抑制PI3K/Akt信号通路减弱HUVEC增殖能力,LXRs激动剂T0901317可通过激活PI3K/Akt信号通路增强血糖波动抑制下HUVEC的增殖能力.
关键词： 血糖波动 人脐静脉内皮细胞 PI3K/Akt信号通路 T0901317 -
肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响
目的 探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用.方法 根据不同干预条件分为空白对照组(对照组),T0901317干预组(T0901317组).24 h、48 h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48 h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测.结果 T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组.T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高.结论 T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡.
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肝脏X受体α对高糖所致心肌细胞凋亡的影响及其机制
目的：观察肝脏X受体α（ LXRα）对高糖所致心肌细胞凋亡的影响，并探讨其机制。方法将对数生长期的H9c2大鼠心肌细胞随机分为5组，空白组、低T0组、中T0组、高T0组分别用二甲基亚砜及5、10、20μmol／L的LXRα激动剂T0901317预处理12 h，高糖对照组不处理；之后低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组用33 mmol／L的高糖浸润24 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，Western blotting法检测细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白相对表达量。结果空白组、低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组细胞凋亡率分别为10．67％±0．82％、29．53％±4．21％、19．76％±2．80％、15．15％±1．90％、34．09％±5．32％；多组间比较，P＜0．05；低T0组、高糖对照组与空白组比较，P均＜0．01；中T0组、高T0组与高糖对照组比较，P均＜0．05。与空白组比较，低T0组、中T0组、高T0组、高糖对照组Bcl-2表达均降低，Bax和Caspase-3表达均增加，P均＜0．05；与中T0组、高T0组比较，高糖对照组上述指标变化更明显，P均＜0．05；低T0组与高糖对照组上述指标比较，P均＞0．05。结论中、高浓度LXRα可抑制高糖所致的心肌细胞凋亡，其机制可能与降低Bax、Caspase-3表达和增加Bcl-2表达有关。
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LXR激动剂对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响
目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂对高脂饲养ApoE基因敲除小鼠(ApoE-/-)在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)病变形成的早期阶段斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9表达及胶原含量的影响.方法:8周龄雄性ApoE-/-小鼠12只,随机分入LXR激动剂T0901317干预组或二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组,每组各6只.均高脂饲养8周,在高脂饲养的后4周,分别给予T0901317 20 mg·kg-1·d-1或相当剂量的DMSO腹腔注射.麻醉后处死小鼠,取小鼠主动脉,以石蜡包埋,行主动脉根部连续切片;以HE染色观察形态学变化,生化法检测小鼠血脂,免疫组化法检测主动脉壁斑块内组织因子(tissue factor,TF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metallopmteinase-9,MMP-9)的表达水平,苦味酸-天狼星红染色检测斑块内胶原含量,以ImagePro Plus6.0软件进行图像分析.结果:T0901317干预组血浆总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇明显高于对照组(P<0.01,P<0.01和P<0.05);T0901317干预组主动脉AS斑块面积明显小于对照组(P<0.05),分别为(4285±2133)μm2和(8403±2535)μm2;T0901317干预组主动脉As斑块面积/血管壁面积比值明显小于对照组(P<0.05);10901317干预组动脉粥样硬化斑块内TF表达水平较对照组明显减低(P<0.05),平均吸光度值分别为(0.0309±0.0109)与(0.0764±0.0346);动脉粥样硬化斑块内MMP-9表达水平较对照组明显减少(P<0.01),平均吸光度值分别为(0.0293±0.0163)与(0.0671±0.0200):T0901317干预组动脉粥样硬化班块内胶原纤维的含量较对照组明显增加(P<0.01),平均吸光度分别为(0.0311±0.0101)与(0.0142±0.0054).结论:LXR激动剂不仅可以抑制动脉粥样硬化的发展,而且可能通过减少动脉粥样硬化斑块内组织因子和基质金属蛋白酶-9的产生,改变斑块内的胶原构成,而起到稳定动脉粥样硬化斑块的作用.
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肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎性因子释放的影响及其机制
目的 观察肝X受体激动剂T0901317对脂多糖诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子释放的影响,并探讨其机制.方法 160 nmol/L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24h后分为四组:对照组、脂多糖组、T0901317组和脂多糖+T0901317组,酶联免疫吸附法检测培养液中炎症因子含量.LipofectarnineTM2000转染ATP结合盒转运子A1(ABCAl) siRNA,定量PCR检测细胞ABCA1、ABCG1和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达,Western blot检测ABCA1、ABCG1、TLR4和核因子κB (NF-κB) p65的蛋白表达.结果 T0901317抑制脂多糖诱导的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)释放,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和ABCG1表达；转染ABCA1 siRNA后,ABCA1的蛋白表达明显下降,T0901317对炎症因子的抑制作用明显减弱；T0901317下调TLR4和核内NF-κB的表达.结论 T0901317抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其促进膜转运体ABCA1表达,抑制膜受体TLR4和转录因子NF-κB的表达有关.
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Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷缓解肝X受体激动剂诱导的小鼠肝脏脂肪性变
目的 探讨Niemaan-Pick C1-Like 1在肝X受体激动剂诱导的肝脏脂肪性变中的作用.方法 给C57BL/6小鼠和Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠喂食0.015%胆固醇饮食21天,胃饲溶剂或肝X受体激动剂T09901317一周后.收集小鼠肝脏,称重;抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量;用实时定量聚合酶链反应法检测肝脏表达与脂肪合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1的mRNA水平.结果 在胃饲T0901317一周后,C57BL/6小鼠肝脏由1.1±0.1 g增大到2.8±0.3 g,肝脏甘油三酯含量由34.2±18.1 mg/g增至232.2±67.9 mg/g,固醇调节元件结合蛋白1c、脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1 mRNA水平在肝脏的表达也显著增高;而Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏由0.9±0.1 g增大到1.5±0.1 g,肝脏甘油三酯含量由43.7±26.5 mg/g增至104.9±62.1 mg/g,脂肪酸合成酶和硬脂酰CoA去饱和酶1 mRNA水平在肝脏的表达也显著增高.但在10901317诱导下,Niemann-Pick C1-Like 1基因敲除小鼠肝脏脂肪酸合成酶mRNA水平仍比C57BL/6小鼠低63%.结论 Niemann-Pick C1-Like 1表达缺陷降低肝X受体激动荆诱导的肝脏固醇调节元件结合蛋白1c和脂肪酸合成酶的表述,缓解小鼠肝脏脂肪性变.
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肝X受体激动剂T0901317抑制TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-SMA的表达
目的 探讨肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导的人正常肺成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法 组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫细胞化学鉴定.T0901317和/或TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用RT-PCR,Western blot和免疫荧光观察α-SMA mRNA和蛋白水平的表达.结果 人肺成纤维细胞表达波形蛋白而不表达角蛋白.RT-PCR,Western blot,免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下组成性表达少量的α-SMA,TGF-β1 5 ng/ml即可以诱导α-SMA mRNA和蛋白表达的明显上调,而T0901317 5μg/ml时可以明显抑制这种表达的上调.结论 肝X受体激动剂T0901317可以在基因和蛋白水平抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞α-SMA表达的上调,可能具有潜在抗纤维化应用价值.
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肝X受体激动剂T0901317对TGF-β1诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白表达的影响
目的 探讨肝X受体激动剂T0901317对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人正常肺成纤维细胞纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响.方法 组织块贴壁法培养人正常肺成纤维细胞,波形蛋白和角蛋白免疫组织化学鉴定.T0901317及 TGF-β1刺激人正常肺成纤维细胞后,分别应用Western blot 和激光共聚焦显微镜观察FN的表达.结果 成纤维细胞表达波形蛋白,不表达角蛋白.Western blot和免疫荧光结果均显示正常肺成纤维细胞基态下表达较多的FN,TGF-β1可以诱导FN表达的进一步上调,而T0901317在5 μg/mL时即可抑制这种表达的上调.结论 肝X受体激动剂T0901317可以抑制TGF-β1诱导的体外人正常肺成纤维细胞FN表达的上调,可能具有潜在抗纤维化治疗作用.
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肝X受体对急性肺损伤保护机制的探讨
目的 探讨肝X受体对急性肺损伤的保护机制,观察凋亡抑制因子Api6、Caspase-3、Bcl-2的表达情况.方法 将54只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(CL组)、内毒素处理组(LP组)、T0901317预处理组(TP组).TP组预处理后,脂多糖造模,于1h、4h、8h时处死大鼠采取肺组织,免疫组化染色测定凋亡因子Caspase-3、Bcl-2,蛋白定量检测Api6表达水平,同时测定动脉血气,观察电子显微镜下肺组织病理学改变.结果 与CL组相比,LP组动脉血氧分压均显著降低;病理形态学示:与LP组相比,TP组损伤明显减轻.通过Western blot检测肺Api6蛋白表达获知:TP组明显比LP组表达有所增加.结论 Api6在ALI大鼠肺组织中表达明显减少.Api6高表达对肺组织起到一定的保护作用.肝X受体激动剂预处理可以减轻脂多糖所致肺组织的损伤,其机制可能与其抑制促凋亡因子、增加抗凋亡因子表达有关.
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T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织LXRα表达的影响及其抗炎作用
目的 探讨肝脏X受体α(LXRα)激活剂T0901317对脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠动物模型的保护效应.方法 72只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为对照组、LPS组和T0901317干预组.观察各组大鼠PaO<,2>、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中LXRα、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α蛋白变化;采用免疫组化染色观察肺组织LXRα蛋白变化.结果 与对照组比较,LPS致伤后各时间点PaO<,2>显著降低,肺组织干/湿重比值(W/D)、MPO活性均显著升高(P<0.05),组织病理显示肺组织受损;肺组织LXR-α mRNA表达下降,TNF-α mRNA升高(P<0.05).肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α显著升高.免疫组化显示LXRα蛋白在对照组肺组织中表达较高水平,在LPS致伤后可见该蛋白表达较对照组显著下降(P<0.05).10901317干预组LXRα在基因和蛋白水平表达上调,TNF-α表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05),同时观察到肺部炎症明显减轻.结论 在LPS诱发的大鼠ALI模型中,10901317通过促进LXR-α表达,抑制TNF-α表达,减轻炎性细胞在肺组织的浸润和聚集,从而具有保护作用.
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LXRα激活剂T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织MPO、TNF-α表达的影响
目的 观察LXRα(liver X receptor α)激活剂T0901317对急性肺损伤大鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 72只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为对照组、脂多糖致伤组、T0901317干预组,在1h、2h、4h、8h时相点采集大鼠肺组织测定肺组织中MPO活性、TNF-α含量,并观察肺组织病理学变化.结果 与对照组比较,脂多糖致伤组各时间点MPO活性均显著升高(P＜0.05),组织病理显示肺缉织受损;肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α亦显著升高.T0901317干预组MPO活性及TNF-α表达下降,肺部炎症明显减轻.结论 T0901317能够显著降低急性肺损伤大鼠肺组织MPO活性、TNF-α水平,对急性肺损伤大鼠具有保护作用.
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肝X受体激动剂T0901317对肝癌血管生成的作用及机制
目的 探讨肝脏X受体激动剂T0901317对肝细胞癌血管生成的作用及机制.方法 采用实验研究方法.人肝癌细胞MHCC97-H、人肝癌细胞Huh7、人脐静脉内皮细胞HUVEC各自的空白组、低浓度组、高浓度组分别加入0、1、3 μmoL/L T0901317.采用CCK-8法检测各组细胞生长情况.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析各组细胞肝脏X受体靶基因脂肪酸合成酶(FAS) mRNA相对表达量.测量MHCC97-H裸鼠模型(MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组)皮下肿瘤体积和体质量.处死裸鼠后获取肿瘤组织.采用免疫组织化学染色检测裸鼠肿瘤组织中肿瘤血管生成标志物CD31相对表达量.采用Transwell法检测HUVEC各组细胞迁移能力和成血管能力.观察指标:(1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响.(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用.(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响.(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响.(5) T0901317对HUVEC迁移能力的影响.(6) T0901317对HUVEC成血管能力的影响.正态分布的计量资料以(x)±s表示,多组间比较采用方差分析,两组间比较采用t检验.结果 (1)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC生长的影响.CCK-8法细胞生长实验结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±1.7％、101.0％±0.7％、104.6％±1.9％,3组比较,差异无统计学意义(F=2.632,P＞0.05).Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±2.7％、97.6％±2.4％、103.7％±2.8％,3组比较,差异无统计学意义(F=1.404,P＞0.05).HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组活细胞百分比分别为100.0％±0.7％、100.7％±1.2％、101.3％±0.8％,3组比较,差异无统计学意义(F=0.471,P＞0.05).(2)T0901317对MHCC97-H、Huh7、HUVEC肝脏X受体的作用.实时荧光定量PCR结果显示:MHCC97-H空白组、MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±2.2％、658.5％±7.7％、1 241.0％±106.8％,3组比较,差异有统计学意义(F=46.227,P＜0.05).其中MHCC97-H空白组分别与MHCC97-H低浓度组、MHCC97-H高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=70.025,8.274,P＜0.05);MHCC97-H低浓度组与MHCC97-H高浓度组比较,差异有统计学意义(t=4.222,P＜0.05).Huh7空白组、Huh7低浓度组、Huh7高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±15.8％、1 225.0％±26.7％、2 015.0％±215.1％,3组比较,差异有统计学意义(F=49.402,P＜0.05).其中Huh7空白组分别与Huh7低浓度组、Huh7高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=39.460,8.879,P＜0.05);Huh7低浓度组与Huh7高浓度组比较,差异有统计学意义(t=2.836,P＜0.05).HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组细胞FAS mRNA相对表达量分别为100.0％±19.6％、790.8％±116.5％、1 756.0％±55.0％,3组比较,差异有统计学意义(F=185.395,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=7.639,34.375,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=7.488,P＜0.05).(3)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长的影响.MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤生长实验结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤体积分别为(935±72) mm3和(552±47)mm3,两组比较,差异有统计学意义(t=4.449,P＜0.05).MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型体质量分别为(23.8±0.8)g和(21.7±1.7)g,两组比较,差异无统计学意义(t=1.059,P＞0.05).(4)T0901317对MHCC97-H裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31表达的影响.免疫组织化学染色检测结果显示:MHCC97-H对照组和MHCC97-H T0901317组裸鼠模型皮下肿瘤组织中CD31相对表达量分别为100％±11％和35％±7％,两组比较,差异有统计学意义(t=4.919,P＜0.05).(5)T0901317对HUVEC迁移能力的影响.Transwell法细胞迁移实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组穿膜细胞百分比分别为100.0％ ±4.0％、57.3％±1.5％、32.7％±1.7％,3组比较,差异有统计学意义(F=163.944,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=9.998,15.434,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=10.801,P＜0.05).(6)T0901317对HUVEC成血管能力的影响.细胞成血管实验结果显示:HUVEC空白组、HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组成血管长度相对值分别为100.0％±3.4％、68.4％±3.5％、44.7％±0.5％,3组比较,差异有统计学意义(F=38.964,P＜0.05).其中HUVEC空白组分别与HUVEC低浓度组、HUVEC高浓度组比较,差异均有统计学意义(t=6.268,9.831,P＜0.05);HUVEC低浓度组与HUVEC高浓度组比较,差异有统计学意义(t=3.460,P＜0.05).结论 肝脏X受体激动剂T0901317可抑制肝细胞癌血管生成.
